中成药相关肝损伤研究进展

药物性肝损伤是指由化学药品、生物制品、中草药及其制剂等所导致的肝损伤,是临床常见的药物不良反应之一。近年来,含何首乌、补骨脂、淫羊藿的中成药导致肝损伤的临床报道逐渐增多,其导致肝损伤的原因及机制受到广泛关注,并取得一定进展。本文主要对含此类组分的中成药及其肝损伤的原因、发病机制等进行综述。

含活性成分中药材对骨质疏松症的作用机制研究现状

骨质疏松症(OP)是由于随着年龄的增长,骨量不断下降,骨的脆性增加,易于发生骨折的一种全身性的疾病。随着现代社会人口老龄化问题不断加剧,OP的患病率不断上升,这一问题逐渐成为关注热点。研究发现,淫羊藿、补骨脂、骨碎补、仙茅、女贞子、旱莲草、杜仲等中药材中含有的一些活性成分,通过滋补肝肾、填补肾精等作用可提高骨密度,减少骨吸收,进而降低骨质疏松性骨折的可能,对OP有一定的治疗作用。本文综述中药材中含有的生物活性成分在抗炎、抑制破骨细胞产生、促进成骨细胞发育和缓解OP等方面的作用,为中药在临床上治疗OP的合理应用提供一定参考。

基于网络药理学及分子对接探讨补骨脂治疗牙周炎的作用机制

目的:采用网络药理学及分子对接技术探讨补骨脂治疗牙周炎的作用机制。方法:通过大量的文献查阅获取补骨脂主要活性成分及其对应靶点,运用人类基因综合分析数据库(GeneCards)和基因表达综合数据库(GEO)获得牙周炎相关靶点,制作韦恩(Venny)图后获取药物-疾病交集靶点;利用工具平台STRING11.5构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;运用Cytoscape 3.7.0软件构建“补骨脂活性成分-潜在靶点”“牙周炎关键靶点”图,并筛选出前10的关键活性成分和核心靶点,借助Metascape数据库和微生信平台对核心靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;最后使用Discovery Studio 2019对补骨脂关键活性成分与核心靶点进行分子对接,探索最佳结合靶点。结果:筛选得到补骨脂有效活性成分87个,对应成分的相关靶点595个;牙周炎相关靶点1213个。GO生物学过程分析表明,补骨脂活性成分的基因功能主要表现在对激素的反应等过程,KEGG结果表明补骨脂的作用与癌症通路等信号通路有关。分子对接结果表明,bakuflavanone与基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMP)9的结合能较高。结论:补骨脂活性成分可能通过癌症通路等信号通路作用于核心靶点而发挥治疗牙周炎的功效,尤其是bakuflavanone,可能具有开发为抗牙周炎新药的潜力。

5种炮制方法对补骨脂脂溶性和挥发性成分的影响

目的考察5种炮制方法对补骨脂中脂溶性和挥发性成分组成和含量的影响。方法补骨脂生品及制品中脂溶性成分以石油醚为提取溶剂,索氏回流提取,并进行衍生化;挥发性成分采用顶空进样技术采集,两者采用GC-MS法分析。结果补骨脂生品及制品中脂溶性成分主要以脂肪酸和萜类为主。除油炙法外,其余炮制法降低脂溶性成分提取率。5种炮制方法均能增加脂溶性成分及不饱和脂肪酸的种类,降低不饱和脂肪酸的相对含量(雷公法除外),增加饱和脂肪酸的种类(清炒法除外),降低饱和脂肪酸相对含量(油炙法和盐炙法除外)。挥发性成分以单萜和倍半萜类为主,5种炮制方法均能降低单萜类成分的相对含量,升高倍半萜类的相对含量,并增加挥发性成分种类(雷公法除外)。结论炮制能够降补骨脂中所含脂溶性和挥发性成分的总含量,调整成分的相对含量和种类,产生新的成分,以上可能是补骨脂炮制解毒增效的机理之一。

基于生物信息学技术探讨补骨脂致肝损伤的作用机制

目的基于生物信息学技术建立补骨脂成分-靶点-信号通路-肝损伤网络,探讨补骨脂导致肝损伤的作用机制。方法通过TCMIP数据库收集补骨脂成分以及肝损伤有关的靶点,依据反向药效团匹配方法预测补骨脂成分的作用靶点;采用Cytoscape构建补骨脂成分-靶点网络,对补骨脂作用靶点构建网络模型进行GO与KEGG富集分析。结果补骨脂中有22个成分作用于31个肝损伤靶点蛋白,血清白蛋白(ALB)、谷胱甘肽S-转移酶P(GSTP1)、运甲状腺素蛋白(TTR)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)可能是关键节点蛋白。KEGG分析遴选出化学物致癌、AMPK、PPAR信号、P450代谢和谷胱甘肽等信号通路。结论补骨脂可能是作用于ALB、GSTP1、TTR与PPARG等靶点并调控五类信号通路导致肝损伤。

补骨脂提取物对APP/PS1小鼠学习记忆能力的改善作用

目的:探讨补骨脂提取物对淀粉样前体蛋白/早老素1双转基因小鼠(APP/PS1小鼠)学习记忆能力的改善作用。方法:APP/PS1小鼠60只随机分为模型组、盐酸多奈哌齐(0.65 mg/kg)组、抗脑衰胶囊(0.585 g/kg)组及补骨脂提取物(0.5 g/kg)组,每组15只,另取15只C57小鼠为正常对照组,灌胃给药,1次/d,共灌胃90 d。行为学实验检测小鼠学习记忆能力,HE染色观察下丘脑组织形态变化,免疫组化法检测小鼠下丘脑区雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、卵泡刺激素受体(FSHR)及黄体生成素受体(LHR)表达。结果:与模型组比较,各给药组平均潜伏期显著缩短,穿越平台次数及靶象限停留时间显著增加,避暗潜伏期延长且错误次数显著减少(P<0.05或P<0.01);模型组下丘脑细胞核排列错乱,神经元细胞数量减少、结构受损,盐酸多奈哌齐、抗脑衰胶囊组及补骨脂提取物组神经元细胞核排列较紧密,神经元细胞较多、结构趋于完好;与模型组比较,补骨脂提取物组下丘脑ERα、ERβ、FSHR、LHR蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论:补骨脂提取物能显著改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,其机制可能与增加ERα、ERβ、FSHR、LHR的表达有关。

补骨脂中三个异戊烯基黄酮类化合物的全合成研究

以2,4-二羟基苯乙酮为原料,利用温和简便的方法成功合成了补骨脂中3个天然异戊烯基黄酮类化合物:异补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚和补骨脂乙素。为进一步研究异戊烯基黄酮类化合物生物活性提供可靠易行的合成方法。目标化合物结构经1HNMR、13CNMR和MS(ESI)表征。

补骨脂对牙周炎大鼠牙移动保持期OPG表达的影响

目的:观察牙周炎大鼠牙移动保持期间,采取灌胃补骨脂水煎液对牙周组织中OPG表达情况。方法:按照随机数字表法将45只建立牙周炎的雄性大鼠分为三组,每组15只。空白对照组:建立牙移动模型后处死。实验组和阴性对照组:牙移动模型建立后去除拉簧,安放保持装置,各保持3、7、14、21 d。实验组在保持期内灌胃补骨脂水煎液,阴性对照组灌服等量生理盐水。制作免疫组化切片,观察上颌第一磨牙远中侧牙周组织OPG的表达情况。结果:阴性对照组在早期变化不显著,3 d后不断增加,实验组在整个保持阶段OPG的表达呈不断增加的趋势。在同一时段进行对比,实验组OPG的表达均明显大于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补骨脂水煎液可提高牙周炎大鼠牙移动后牙周OPG的表达,加快牙周改建。

补骨脂改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的尿液代谢组学研究

运用尿液非靶代谢组学探究补骨脂改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的作用机制。所有动物实验均经过黑龙江中医药大学动物伦理委员会批准(批准号:2020092502)。将16只3月龄雄性APP/PS1小鼠随机分为模型组和补骨脂组(0.5 g·kg^(-1)),另取8只同背景C57BL/6J小鼠作为空白组,以避暗实验和新物体识别实验为评价指标,通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)测定各组小鼠尿液中内源性代谢物的变化,筛选差异代谢物,并进行代谢通路富集分析。实验结果显示,与模型组相比,补骨脂可明显减少APP/PS1小鼠的避暗潜伏期及错误次数(P<0.01),显著提高APP/PS1小鼠的新物体识别指数(P<0.01)。代谢组学分析鉴定出15个差异代谢物,补骨脂能显著回调9个差异代谢物。代谢通路分析显示,组氨酸代谢、柠檬酸循环、牛磺酸和次牛磺酸代谢和糖代谢途径是补骨脂发挥改善学习记忆能力作用的主要代谢途径。研究提示,补骨脂改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力的机制可能与改善线粒体功能障碍、降低外周组胺水平、调节能量代谢紊乱及抗氧化水平等相关。

补骨脂生品及炮制品抗氧化活性

目的:筛选补骨脂生品及5种炮制品(雷公法制补骨脂、炒盐补骨脂、酒炒补骨脂、炒补骨脂和盐蒸补骨脂)各石油醚(PE)部位、乙酸乙酯(EA)部位和正丁醇(BU)部位的体外抗氧化活性,并比较不同炮制方法对补骨脂抗氧化活性的影响。方法:以二丁基羟基甲苯(BHT)为阳性对照,利用清除二苯代苦味酰基(DPPH)和[2,2'-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基以及铁离子还原/抗氧化(ferricreducing/antioxidant power assay,FRAP)3种方法对补骨脂生品及炮制品各部位抗氧化活性进行评价。结果:雷公法补骨脂、炒盐补骨脂、酒炒补骨脂和炒补骨脂各PE部位清除DPPH自由基的能力(IC50分别为97.1,97.7,99.9和95.7 mg.L-1)均低于补骨脂生品PE部位(IC50=77.3 mg.L-1);补骨脂生品PE部位清除ABTS自由基的能力(IC50=1.8 mg.L-1)强于阳性对照BHT(IC50=2.3 mg.L-1),酒炒补骨脂和盐蒸补骨脂BU部位清除ABTS自由基的能力(IC50为5.8 mg.L-1和5.1 mg.L-1)均高于补骨脂生品正丁醇部位(IC50=6.8 mg.L-1);5种补骨脂炮制品各部位还原Fe3+的能力均比补骨脂生品各部位低。结论:补骨脂生品及炮制品各部位显示出不同的抗氧化活性,且不同炮制方法抗氧化活性差距较大。

不同产地补骨脂中6种呋喃香豆素的HPLC法测定

建立了高效液相色谱法测定不同产地补骨脂中的6种呋喃香豆素化合物:补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素、异补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡素和三甲基补骨脂素。采用Capcell Pak-C_(18)色谱柱,以甲醇∶水为流动相,线性梯度洗脱,检测波长248 nm。结果 6种成分的峰面积在1~100μg/ml范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.2%、99.5%、96.8%、99.2%、99.6%和98.7%,RSD分别为1.54%、1.35%、0.65%、0.43%、0.18%和0.26%。10种不同产地补骨脂中上述6种成分的含量分别为0.21%~0.86%、0.10%~0.17%、0.28%~0.89%、0.14%~0.43%、0.10%~0.21%和0.10%~0.26%。经方法学验证,本方法可用于补骨脂药材的质量控制。

高温处理补骨脂对酪氨酸酶活性的影响

目的:研究高温处理补骨脂对酪氨酸酶活性的影响。方法:采用体外酪氨酸酶多巴速率氧化微量法,测定高温处理补骨脂后对酪氨酸酶活性的影响。结果:除低浓度和30 min中浓度外,同一浓度和高温处理时间下,随着温度的升高,对酪氨酸酶的激活率逐渐增大;同一浓度和温度下,随着高温处理时间的增大,对酪氨酸酶的激活率未呈现规律性的增强或减弱的趋势,其中,在2 g·L-1浓度下,121℃加热40 min和20 min对酪氨酸酶的激活率最高,分别为135.45%±4.29%和106.97%±3.21%。结论:控制合适的高温处理时间和温度可以增强补骨脂浸膏对酪氨酸酶的激活活性。

补骨脂“大燥伤肝”的客观性及生物学机制研究

依据补骨脂“性本大燥”的药性理论,寻找补骨脂致肝损伤的易感证候及生物标志物。分别构建肾阴虚证、肾阳虚大鼠模型,所有动物实验操作和福利均遵循河南中医药大学第一附属实验动物伦理与动物福利委员会的规定(批号YFYDW2020017)。结果发现补骨脂可显著降低肾阴虚证大鼠体质量、饮水量、尿量,并增加其肝、睾丸、肾上腺、脾脏脏器指数及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)表达;同时,补骨脂还显著增加了肾阳虚证大鼠尿量,并降低ALT、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)表达;苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色显示补骨脂明显加剧肾阴虚证大鼠肝细胞炎症浸润,并减轻肾阳虚证大鼠肝损伤。超高效液相色谱-质谱(ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS)检测血浆后共鉴定出17个补骨脂共同调控肾阴/阳虚证大鼠的具有显著差异的内源性代谢标志物。其中,谷氨酰胺、喹啉酸、胆绿素、乳糖基酰基鞘氨醇等8个代谢物呈相反变化趋势,主要涉及半胱氨酸和蛋氨酸代谢、酪氨酸代谢、色氨酸代谢、嘌呤代谢、鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、谷氨酰胺代谢等通路。因此,本研究推测肾阴虚证与肾阳虚证可能分别是补骨脂发挥肝损害与肝保护的易感证候,这可能与其调控体内相关氨基酸代谢和鞘脂代谢等有关,可为中医临床补骨脂的安全精准使用提供一定的实验数据支撑。

补骨脂正丁醇部位抗HIV/SIV活性的体外实验研究

目的观察中药补骨脂乙醇提取物正丁醇部位体外抑制人免疫缺陷病毒(HIV)及猴免疫缺陷病毒(SIV)的活性及作用。方法运用CCK-8试剂检测补骨脂正丁醇部位不同浓度对MT2细胞的细胞毒性。分别以HIV-1BK132和SIVmac251感染MT2细胞为体外实验模型,以细胞病变效应(CPE)、套式反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内病毒核糖核酸(RNA)相对量和上清中病毒载量为主要评价指标,评估补骨脂正丁醇部位体外抑制HIV-1/SIV的作用及量效关系。结果 CCK-8比色法测定结果显示,补骨脂正丁醇部位最大无毒性浓度为32μg.mL^-1。CPE结果显示,当病毒对照组有大量合胞体(+++)形成时,仅补骨脂正丁醇部位32μg.mL^-1浓度组及16μg.mL^-1浓度组未见合胞体形成(-),与正常细胞对照组和阳性药对照组相当(-),其余各浓度组均有不同程度合胞体形成。RT-PCR结果显示,与病毒对照组相比,补骨脂正丁醇部位在8~32μg.mL^-1浓度范围时,对HIV-1/SIV感染MT2模型中细胞内HIV/SIV RNA的相对量及上清中HIV/SIV病毒载量均有显著的下调作用(P<0.01),且在16~32μg.mL^-1浓度差异尤为显著(P <0.001),与阳性药对照组相当(P> 0.05)。结论补骨脂正丁醇部位对HIV-1 BK132/SIVmac251诱导MT2细胞病变效应有较明显的抑制作用,同时对细胞内及上清液中的HIV/SIV量有显著的下调作用,且在8~32μg.mL-1浓度之间存在一定的量效关系。

补骨脂水提取物对去卵巢骨质疏松大鼠肾脏组织中TGF-β1/Smad4信号通路转导的影响

目的:探讨补骨脂水提取物(PCE)对绝经后骨质疏松症的作用及分子机制。方法:采用双侧卵巢切除法建立绝经后骨质疏松(OVX)大鼠模型,评估OVX大鼠的体质量变化,采用双能X线吸收测量仪测量全身骨密度值,采用ELISA法检测血清碱性磷酸酶(ALP)和酸性磷酸酶(ACP)及雌激素E2分泌水平,采用苏木精-伊红(HE)染色检测股骨病理变化,采用RT-PCR和Western Blot法检测肾脏TGF-β1/Smad4信号分子mRNA和蛋白的表达水平。结果:补骨脂水提取物对绝经后骨质疏松症具有潜在的保护作用,能够显著减小术后大鼠体质量的增加(P>0.05),且增加OVX大鼠的全身骨密度值(P<0.05);同时其呈剂量依赖性下调ALP和ACP水平及上调E2水平(P<0.05),显著减小骨髓腔面积(P<0.05);除此之外,其呈剂量依赖性下调OVX大鼠肾脏组织中TGF-β1及Smad4的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论:补骨脂水提取物对绝经后骨质疏松症具有潜在的保护作用,且与TGF-β1/Smad4信号通路介导骨代谢紊乱有关。