合川补骨脂药材HPLC指纹图谱研究

目的:建立补骨脂药材的指纹图谱,从整体上控制补骨脂药材的质量。方法:采用HPLC法,用二级管阵列进行检测,以补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂黄酮类成分分离效果为评价指标,筛选流动相及检测波长。结果:以70%乙醇回流提取1h,用乙腈-0.1%乙酸梯度洗脱效果较佳,检测波长为315nm。补骨脂药材在组分上相似度较好。结论:经统计分析,该法稳定,重现性好,简便可行,适用于补骨脂药材的质量控制。

HPLC法同时测定补骨脂药材中6种成分的含量

目的:建立同时测定补骨脂药材中6种成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法同时分析补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂甲素、补骨脂异黄酮、补骨脂定和补骨脂查耳酮6种成分。用AlltechC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,1%冰醋酸溶液和乙腈为流动相,采用梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长245nm。结果:6种成分线性关系良好,r>0.9991,平均加样回收率均大于95.0%,RSD均小于3.0%。结论:该方法适用于补骨脂药材中6种成分的同时测定,可作为药材质量的综合评价方法。

黄芪、赤芍配伍补骨脂对大鼠体内补骨脂素和异补骨脂素药代动力学的影响

目的 研究黄芪、赤芍与补骨脂配伍后,补骨脂中主要毒性成分补骨脂素和异补骨脂素的血浆药代动力学参数变化。方法 32只雄性SD大鼠随机分为4组,补骨脂组、补骨脂-黄芪组、补骨脂-赤芍组、补骨脂-黄芪-赤芍组。单次灌胃给药,分别于给药后0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24 h目内眦取血,超高效液相色谱-串联四级杆质谱(UPLC-MS/MS)法检测血浆中补骨脂素和异补骨脂素的血药浓度,采用DAS3.0软件非房室模型计算药动学参数。结果 补骨脂与赤芍配伍后,大鼠血浆中补骨脂素、异补骨脂素最高血药浓度(c_(max))、药时曲线下面积(AUC_(0-t))显著降低,补骨脂与黄芪配伍后,大鼠血浆中异补骨脂素的c_(max)显著降低,补骨脂与黄芪赤芍三药合用后大鼠血浆中补骨脂素和异补骨脂素的AUC_(0-t)显著降低;异补骨脂素的AUC_(0-∞)和c_(max)显著降低。结论 黄芪、赤芍与补骨脂配伍使用,可以降低补骨脂中主要毒性成分补骨脂素和异补骨脂素的体内暴露量,补骨脂-黄芪-赤芍组大鼠血浆中异补骨脂素平均驻留时间(MRT)延长,其具体作用机制有待深入研究。

不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定

应用高效液相色谱法 ,测定了不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量。色谱柱为Kromasil C18( 4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm) ,流动相 :甲醇 水 ( 4 5∶5 5 ) ,检测波长 :2 4 5nm ,流速 :1 0ml/min ,柱温 :35℃。结果 :补骨脂素在 0 0 4 4 8～ 0 4 4 8μg(r =0 9999)范围内、异补骨脂素在 0 0 35 6～ 0 35 6 μg(r =0 9997)范围内线性关系良好 ,补骨脂素和异补骨脂素平均回收率分别为 98 6 9% (RSD =1 97% )和 10 1 0 9% (RSD =3 0 6 % )。

补骨脂水提液及补骨脂素对体外培养成骨细胞的影响

为了探讨补骨脂水提液及补骨脂素对体外培养成骨细胞的影响，采用MTT法、PNPP（对硝基苯磷酸二钠盐）法及流式细胞术，分别榆测不同浓度的补骨脂水提液（10^-4～10^1mol·L^-1）及补骨脂素（10^-8～10^-4 mol·L^-1）对体外培养小鼠成骨细胞增殖、分化及细胞周期的影响。结果表明，10、10^-3mg·mL^-1补骨脂水提液对成骨细胞有明显的促增殖作用；高浓度（10^-4、10mol·L^-1）补骨脂素抑制细胞增殖，而低浓度（10^-7、10^-8mol·L^-1）补骨脂素能够促进增殖；10^-4、10^-6、10^-8mol·L^-1补骨脂素均能使成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）活性明显上升；各浓度的补骨脂水提液及补骨脂素使细胞G，期百分比降低，而S期、G2期百分比显著增加。试验结果证实补骨脂水提液及补骨脂素具有植物雌激素样作用，可以促进成骨细胞增殖，促使细胞由G1期向S期、G2期转化；补骨脂素是促进成骨细胞分化的有效成分。

补骨脂炮制前后化学成分的变化

目的:从炮制前后补骨脂素、异补骨脂素和微量元素含量的变化探讨补骨脂炮制的物质基础。方法:采用HPLC梯度洗脱法、电感藕合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)分别测定了补骨脂炮制前后的补骨脂素、异补骨脂素及六种微量元素的含量。结果:炮制使补骨脂中的微量元素Mn、Ca、Mg、Fe、Zn含量增加,但Cu含量变化不明显;补骨脂素、异补骨脂素含量增加。结论:炮制使补骨脂有效成分含量增加,提高了中药补骨脂整体生物活性。

超临界流体萃取法测定补骨脂中的主要成分

采用超临界流体萃取(SFE)技术和CGC技术测定了中药补骨脂中的补骨脂素和异补骨脂素。对超临界流体萃取过程中影响萃取效率的主要因素采用正交设计法和方差分析法进行了考察,确定了主效应和适宜的操作条件。与传统的萃取法比较,SFE具有经济、快速、简便、选择性好、环境污染小等优点。

补骨脂有效成分提取工艺的考察

目的:筛选并优化中药补骨脂提取工艺。方法:以补骨脂素、异补骨脂素含量为考察指标,采用浸提法、回流法、超声法、索氏法对中药补骨脂进行提取,应用高效液相色谱法进行含量测定,得到最适提取方法,并以补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂素和异补骨脂素总含量以及出膏率为考察指标,对其最适提取方法进行优化。结果:应用回流法提取时补骨脂素、异补骨脂素含量较高,溶剂浓度和提取时间对实验结果影响较大。结论:回流法为提取补骨脂素与异补骨脂素的最佳方法;4倍量乙醇,提取2h,乙醇浓度为80％为最佳提取条件,且回流提取工艺操作简单,提取效率高。

响应面法优化超声波法提取补骨脂中活性成分的工艺研究

以补骨脂素与异补骨脂素总得率为考察指标,优化超声波法提取补骨脂中活性成分的工艺。选取提取时间、液料比和超声波功率为随机因子,在单因素试验的基础上,进行3因素3水平的Box-Behnken中心组合试验设计,以补骨脂素和异补骨脂素总得率为响应值进行响应面(RSM)分析,优化超声波法提取补骨脂中活性成分提取条件。结果显示,超声波法提取补骨脂中活性成分的最佳条件为:提取时间47.5 min,液料比5.6∶1(mL∶g),提取液20 mL,提取功率330 W,在最佳的提取条件下,补骨脂素和异补骨脂素总得率理论值为1.043%,验证值为1.047%,验证值与理论值间的相对误差为0.384%,验证值与真实值相吻合,说明响应面法优化补骨脂中活性成分超声波法提取条件可行。

补骨脂中补骨脂素含量的高效液相色谱法测定

目的优化并建立以高效液相色谱法测定补骨脂中补骨脂素含量的方法。方法采用超声法从补骨脂中提取得到补骨脂素,经薄层层析法、紫外分光光度法等方法进行定性分析并采用高效液相色谱法(HPLC)测定补骨脂素的含量。色谱柱为YWG C18(250 mm×4.6 mm,10μm),流动相为甲醇,检测波长246nm,柱温为30℃,流速为1 ml.min-1。结果测定补骨脂素线性范围为0.03～0.36μg.ml-1。相关系数r=0.999 1,平均加样回收率为99.1%,RSD为1.9%(n=9)。结论该方法简便、准确、可靠,可作为补骨脂中补骨脂素含量的测定方法,为补骨脂的进一步开发利用和有效性研究提供理论依据。

补骨脂对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的观察由补骨脂乙醇提取物中分离得到的单一化学成分对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响。方法在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同化合物,检测细胞内碱性磷酸酶含量,并用MTT法检测细胞增殖活性。结果由补骨脂乙醇提取物中分离出的化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ能提高大鼠颅骨成骨细胞ALP活性及促进其增殖。结论化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ可促进成骨细胞分化、增殖,为补骨脂治疗骨质疏松的有效成分。

补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素测定

目的根据《欧洲药典》质量标准要求,改进补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的HPLC测定方法。方法补骨脂以甲醇提取,YMC-Triart C18色谱柱（4 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-水（35∶65）,等度洗脱,体积流量为1 m L/min,检测波长为246 nm。结果补骨脂素和异补骨脂素在10~100μg/m L范围内成线性,并在Merck-Li Chrospher RP-18（4 mm×250 mm,5μm）和Waters Spherisorb ODS2 column（4 mm×250 mm,5μm）色谱柱上可重复实验结果,两成分的定量测定结果偏差分别为1.50%和1.33%。7个省和缅甸产共16批补骨脂样品中的补骨脂素和异补骨脂素含有量在1.11%（云南）和0.29%（广西）之间。结论建立的方法可符合欧盟植物药申报专属性、精密度（日间、日内）、准确度的要求。

D101大孔吸附树脂法富集补骨脂中补骨脂酚的研究

[目的]开发可工业化生产的补骨脂中补骨脂酚的富集方法。[方法]实验采用大孔吸附树脂技术有针对性地富集补骨脂提取液中的补骨脂酚,并尽可能去除补骨脂素和异补骨脂素等香豆素类化合物。[结果]经过大孔吸附树脂处理,可以有效去除补骨脂素和异补骨脂素,补骨脂酚含量达到45.6%。[结论]大孔吸附树脂方法用于补骨脂中补骨脂酚的富集,可以避免现有技术使用大量有机溶剂的缺点,该方法有效成分转移率高,成本低。

超临界流体色谱分离纯化补骨脂中的异补骨脂素和补骨脂素

建立超临界流体色谱(SFC)分离纯化补骨脂中异补骨脂素和补骨脂素的工艺方法。采用YMC-C18、YMC-Diol和YMC-NH2等3种色谱柱,甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇等4种改性剂,流动相流速2~6 mL×min^-1、温度300~325 K、压力10~14 MPa条件下,考察了异补骨脂素和补骨脂素的纯化效果。放大得到制备型SFC条件为:色谱柱YMC-Diol;流动相为含有j=2%甲醇的超临界二氧化碳,流速14.0 mL×min^-1;分离温度313 K;压力12 MPa。结果表明,分离得到的异补骨脂素和补骨脂素的纯度均大于98%,由Van’t Hoff曲线可知实验条件下SFC分离过程为焓控过程。

混合胶束扫集毛细管电泳法分离补骨脂中有效成分

采用混合胶束毛细管电泳在线扫集技术分离测定了中药补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素。电泳条件:以35mmol/L硼砂-40mmol/LSDS-5mmol/Lβ-环糊精(CD)-5mmol/L尿素(含10%体积分数乙醇,pH2.8)为电泳运行缓冲溶液,未涂层石英毛细管(φ50μm×58cm,有效长度为41.2cm)为分离通道,重力进样,进样高度为11cm,-20kV恒压,检测波长为246nm。通过此方法扫集,富集倍数可以达到160倍以上,极大地提高了检测的灵敏度。

反相高效液相色谱法在补骨脂提取物3种主要成分含量测定中的应用

目的采用反相高效液相色谱法,建立同时测定补骨脂提取物中补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚含量的方法。方法采用Epic C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-水,梯度洗脱;流速:1.0 m L/min;柱温:30℃;检测波长250 nm。结果该法测定补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚分别在0.0563~0.3379、0.0523~0.3139、0.1280~0.7680μg范围内线性关系良好,相关系数均为0.9999。平均加样回收率分别为100.66%(n=6)、RSD=1.77%,100.43%(n=6)、RSD=1.45%和99.41%(n=6)、RSD=1.63%。结论本方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为补骨脂提取物中补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚的含量控制方法。

补骨脂药材UPLC指纹图谱建立及12种主要成分含量测定

目的建立补骨脂Psoralea corylifolia药材的UPLC指纹图谱,同时对其中12种成分进行含量测定,为其质量控制提供参考。方法采用Shim-pack GIST-HP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);以水和乙腈为流动相,梯度洗脱,建立10个产地29个批次的补骨脂药材的UPLC指纹图谱,并采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)进行相似度评价。同时测定了补骨脂药材中12种成分的含量。结果建立了补骨脂药材的UPLC指纹图谱,29批药材的相似度在0.827~0.989,共标定出21个共有峰,并指认出其中12个色谱峰。定量分析条件方法学考察结果良好,29批药材中补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、欧前胡素、补骨脂宁、补骨脂定、4,5-去氢异补骨脂定、补骨脂乙素、异补骨脂色烯查耳酮、补骨脂酚的质量分数依次为1.08~6.95、0.76~5.01、0~0.62、0.40~2.54、0.32~1.75、0~0.25,0.06~0.73、0.23~1.83、0~0.27、0.86~6.86、0.08~1.59、4.20~20.76 mg/g。结论UPLC指纹图谱结合多成分同时测定的方法,操作简便,结果准确、稳定,可为补骨脂药材的质量评价提供参考。

基于CYP450酶的补骨脂素及异补骨脂素与黄独乙素的药物相互作用研究

目的基于细胞色素P450(CYP450)代谢酶探究补骨脂素和异补骨脂素对黄独乙素在大鼠体内代谢的影响。方法采用大鼠离体循环肝灌流方法,考察大鼠分别给予补骨脂素或异补骨脂素1、3、7 d后,黄独乙素在肝脏中的代谢情况;利用UPLC-MS/MS检测循环灌流液中剩余黄独乙素的含量;通过大鼠眼内眦取血的方法研究大鼠分别给予补骨脂素或异补骨脂素干预1周,再给予黄药子提取物(10 g·kg^(−1))后体内黄独乙素的药动学变化,药动学参数采用DAS 2.0软件中的非房室模型法进行计算。结果大鼠给予补骨脂素或异补骨脂素后,循环灌流液中黄独乙素的含量相对增加,且补骨脂素或异补骨脂素给药时间延长后,对酶的抑制程度更强;当大鼠给予补骨脂素或异补骨脂素干预后,与非干预组(黄药子提取物组)相比,药时曲线下面积(AUC_(0~t))和平均驻留时间(MRT_(0~t))增加,消除半衰期(t_(1/2Z))减小。结论补骨脂素/异补骨脂素可通过抑制肝脏中CYP450酶的活性降低其对黄独乙素的代谢,使黄独乙素在肝脏中代谢减少,造成蓄积,临床用药应注意含有补骨脂素/异补骨脂素或黄独乙素中药在合用时可能产生的药物相互作用。

补骨脂素药理作用及肝毒性机制的研究进展

补骨脂素是源于补骨脂Psoralea corylifolia的香豆素成分,具有抗骨质疏松、神经保护、抗肿瘤、雌激素样、抗炎等多重药理作用,有着良好的临床应用潜力。随着对补骨脂用药安全问题的不断关注,近年来关于补骨脂素的肝脏毒性研究也逐渐增多。通过查阅近20年国内外相关文献,对补骨脂素的药理作用和肝毒性研究概况进行整理和总结,为补骨脂素的进一步研究和临床应用提供参考。