三疣梭子蟹Pt-ddit4l基因的克隆及表达分析

为明确三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)DNA损伤诱导蛋白因子-4(DNA Damage Inducible Transcript like 4,DDIT4L)基因的结构和功能。利用RACE方法克隆获得三疣梭子蟹Pt-ditt4l基因全长。该基因序列全长2727 bp,其中ORF为507 bp,编码了一个168个氨基酸的蛋白,预测分子质量为19.14 kD,且在C端有一个高度保守的RTP801_C结构域。Blast相似性比对和系统进化树分析发现,Pt-ddit4l与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)ddit4l基因的相似性最高为60%,且与凡纳滨对虾先聚为一支。梭子蟹不同发育阶段表达分析表明,Pt-ddit4l基因在发育早期发挥了一定的作用;组织表达分析显示,Pt-ddit4l基因在肝胰腺中的表达量最高,在血细胞中表达量最低。注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)后的感染实验表明,血细胞中Pt-ddit4l的表达量先上升后下降,在24h达到峰值,为对照组的8.85倍(P<0.05);而肝胰腺中则是整体呈下调的趋势,在72h时达到最低值,仅为对照组的1/40(P<0.05)。注射dsddit4l后该基因12—24h表达量显著下调,且注射dsddit4l后再进行弧菌感染的螃蟹的死亡率要显著远高于对照组。研究丰富了三疣梭子蟹DNA损伤诱导蛋白相关研究资料。