毛白杨PtCDD基因5′片段的原核表达及功能分析(英文)

根据GenBank中毛白杨钙离子依赖型脱氧核糖核酸酶(PtCDD)基因序列,以毛白杨形成层区域的cDNA为模板,经PCR扩增出该基因上游637 bp的cDNA片段。将该片段与PET-30b(+)载体连接,构建杨树PtCDD基因片段原核表达载体并进行表达研究,获得大量的PtCDD-(HIS)6融合蛋白。并进一步对该蛋白进行纯化和功能检测。结果表明:PtCDD基因片段能够在大肠杆菌体内表达出具有DNase功能的蛋白,克服了因表达全酶可能强烈降解DNA所带来的不能最终获得表达产物的问题,为今后PtCDD蛋白的抗体制备以及进一步研究奠定了基础。

利用酵母双杂交筛选与PtCDD相互作用的生物大分子

为了筛选与杨树Ca2+依赖型DNase PtCDD相互作用的蛋白基因,构建杨树形成层区域的cDNA文库,以PtCDD为靶蛋白,通过酵母双杂交在已构建的文库中筛选得到两个片段,AD1-10和AD12-2,分别是银桦线粒体的核糖体RNA小亚基基因(mtSSU)和杨树叶片在干旱胁迫条件下得到的一种EST。利用凝胶阻滞实验在体外验证了PtCDD蛋白与AD1-10的结合作用,初步说明PtCDD可能对线粒体所参与的杨树细胞程序化死亡(PCD)有一定的调控作用。