不同浓度药物PTC124和G418对HERG通道无义突变体的作用

目的:通过对HERG基因无义突变体应用不同剂量PTC124和G418来观察其通道功能的恢复情况,并探讨药物的作用机制。方法:制备HERG基因R1014X突变体,将野生型(WT)HERG及R1014X分别瞬时转染至HEK293细胞,转染24 h后将其置入含不同浓度的PTC124和G418的培养液中孵育24 h。逆转录聚合酶链反应法检测各组细胞HERG信使核糖核酸(mRNA)的表达,蛋白印迹法检测野生型和R1014X给药前后通道蛋白的表达,全细胞膜片钳技术记录通道电流以评价HERG基因编码通道的功能性表达。结果:与野生型相比,R1014X突变体编码的通道蛋白的蛋白条带变短,蛋白量及mRNA水平无明显差异(P>0.05)。药物PTC124和G418均能恢复R1014X完整蛋白的表达,并呈剂量依赖性变化(P<0.05),PTC124的作用弱于G418(P<0.05)。药物干预后,R1014X突变体HERG通道的功能得到不同程度的恢复,其最大尾电流密度由(4.75±0.88)pA/pF分别增加至(9.62±0.73)pA/pF(PTC124,P<0.05)和(22.57±2.26)pA/pF(G418,P<0.05),G418作用使通道的半激活电压得到恢复(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:药物PTC124和G418能不同程度恢复HERG基因无义突变的结构和功能性表达,其恢复HERG基因的蛋白表达呈剂量依赖性变化。

欧盟批准PTC124作为治疗DMD和CF的孤儿药物开发

PTC生物制药公司近日宣布，该公司最新研制的苯基硫脲124（PTC124）药物已获得欧盟医药局（EMEA）孤儿药品委员会（COMP）批准用于杜兴肌营养不良肌肉萎缩症（DMD）和震性纤维化疾病（CF）治疗的孤儿药开发地位。该公司专门从事靶向基因转录后控制机制的小分子药物设计、研发和商品化生产。

PTC124不影响心脏SCN5A通道和HERG通道的电生理特性

目的无义突变产生提早出现的终止密码子(Premature termination codon,PTC),其主要致病机制是突变基因单倍体表达不足,见于心脏SCN5A和HERG基因。SCN5A无义突变导致心脏传导功能障碍、扩张性心肌病和Brugada综合征(BrS)等疾病,HERG无义突变导致长QT综合征、扩张性心肌病等疾病,目前尚无有效方法根治这类疾病,但药物将是治疗这类突变相关性疾病的最佳选择。近年来开发的口服药物PTC124,能够选择地抑制过早出现的终止密码子,诱导核糖体通读、不影响正常的终止密码子。为了评价该药物的安全性,本研究检测了PTC124对心脏钠通道和HERG通道的电生理特性。方法构建心脏SCN5A和HERG基因的真核表达载体,分别转染HEK293细胞,应用PTC124处理细胞72小时,全细胞膜片钳记录钠通道和HERG通道的表达电流和动力学,蛋白印迹证明钠通道和HERG通道的表达水平。结果 PTC124处理或未处理的钠电流密度分别-240.2±24.8pA/pF和-238.5±25.2pA/pF,PTC124处理或未处理的HERG激活电流密度分别为43.2±4.3pA/pF和41.9±5.0pA/pF,PTC124处理或未处理的HERG失活电流密度分别为69.9±3.8pA/pF和70.1±3.7pA/pF,激活或失活动力学参数均没有统计学差异。结论 PTC124不影响心脏钠通道和HERG通道的电生理特性。该研究为今后评估这种疗法的使用价值,治疗具有潜在的致命性心律失常性疾病患者的安全性提供依据。

PTC124不影响豚鼠心室肌细胞的电生理特性

目的无义突变产生提早出现的终止密码子(Premature termination codon,PTC),其主要致病机制是突变基因单倍体表达不足,见于心脏钠通道SCN5A基因。SCN5A无义突变导致心脏传导功能障碍、扩张性心肌病和Brugada综合征(BrS)等疾病,目前尚无有效方法根治这类疾病,但药物将是治疗这类突变相关性疾病的最佳选择。近年来开发的口服药物PTC124,能够选择地抑制过早出现的终止密码子,诱导核糖体通读,不影响正常的终止密码子。为了评价该药物的安全性,本研究检测了PTC124对豚鼠心室肌细胞动作电位特性的急性效应。方法应用膜片钳方法研究PTC124对豚鼠心肌细胞动作电位的影响。采用酶法分离豚鼠心肌细胞,测定PTC124对心肌细胞的急性毒性作用。结果 PTC124对豚鼠心肌细胞静息膜电位、最大上升速率、动作电位幅度和动作电位持续时间在50和90%的复极期均没有受到影响。结论 PTC124不影响豚鼠心室肌细胞动作电位。该研究为今后评估这种疗法的使用价值,治疗具有潜在的致命性心律失常的BrS和/或传导障碍性疾病患者的安全性提供依据。

无义突变引起的遗传性疾病及其治疗新药的研究进展

无义突变(nonsense mutation)是一类特定类型的基因突变。文章综述了无义突变及其引起的遗传性疾病,治疗这类疾病新药的发展,PTC124及其作用机制以及对杜兴肌营养不良和囊性纤维变性等的药效学研究进展。