雷帕霉素-深共晶溶剂滴眼液对小鼠同种异体角膜移植排斥反应的抑制作用及其机制

目的探讨雷帕霉素(RAPA)-深共晶溶剂(DES)滴眼液对小鼠同种异体角膜移植免疫排斥反应的抑制作用及其机制。方法采用CCK-8实验检测10种DES对人角膜上皮细胞系(HCECs)细胞活性的影响,选择细胞活性显著高于对照组的DES检测其表征,筛选最适宜DES,并通过BALB/c小鼠和新西兰大白兔对最适宜DES进行生物相容性评价。将小鼠随机分为正常组、磷酸盐溶液(PBS)组、DES组和RAPA-DES组。正常组正常饲养小鼠,PBS组、DES组和RAPA-DES组小鼠右眼行角膜移植术,术后小鼠右眼分别滴加PBS、DES和RAPA-DES溶液,隔天通过裂隙灯观察角膜移植物的存活状况,评估角膜移植物的生存百分比并绘制角膜移植物生存曲线。于移植术后第7、16天,取小鼠眼球,苏木素-伊红(HE)染色,于显微镜下观察角膜水肿和炎症浸润情况。于移植术后第16天,经实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠角膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12α和IL-17αmRNA的表达水平。并通过蛋白质免疫印迹试验(WB)检测各组小鼠角膜组织中IL-6和IL-17α蛋白表达水平。结果CCK-8实验显示,与对照组比较,DES-1和DES-2组细胞的细胞活性显著升高(P<0.05),DES-1组细胞的细胞活性较DES-2组高(P<0.05),且DES-1的黏度低于DES-2,pH值更接近于7.4,因此DES-1为最适宜DES,应用于后续实验。生物相容性评价结果显示,DES-1对小鼠和新西兰大白兔眼球和角膜均无任何刺激。相比PBS组,RAPA-DES组的角膜植片在术后第7、16天更透明,无明显水肿和新生血管现象。RAPA-DES组与PBS组、RAPA-DES组与DES组相比,角膜移植物的生存百分比显著升高(P<0.05)。PBS组、DES组和RAPA-DES组小鼠角膜移植物的中位生存时间分别为16、16和22 d。HE染色结果显示,PBS组和DES组小鼠角膜移植物明显水肿,有大量炎症细胞浸润。RAPA-DES组的角膜移植物中无明显水肿,只有少量炎症细胞积累。RT-qPCR结果显示,RAPA-DES组小鼠角膜组织中TNF-αmRNA表达水平与PBS组无明显差异(P>0.05),RAPA-DES组IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA表达水平明显低于PBS组和DES组(P<0.05),RAPA-DES组小鼠角膜组织中IL-12α和IL-17αmRNA表达水平低于PBS组(P<0.05)。WB结果显示,RAPA-DES组的IL-6和IL-17α蛋白的表达水平明显低于PBS组(P<0.05)。结论RAPA-DES滴眼液能显著延长角膜移植物生存时间,其可以通过降低角膜组织中促炎因子水平,抑制术后角膜移植物炎症反应,从而起到抑制免疫排斥反应的作用。

羊膜移植联合药物预防翼状胬肉复发的临床观察

目的 寻找高效低毒的防止翼状胬肉术后复发的药物。方法 对 134例 16 3眼原发性和复发性翼状胬肉患者施行翼状胬肉切除加羊膜移植术 ,联合应用糖皮质激素或丝裂霉素C、干扰素进行对照研究 ,以观察其复发率差异及术后并发症。结果 单纯应用糖皮质激素组复发率 17.6 5 % ,明显高于丝裂霉素C组 5 .4 5 %和干扰素组 5 .2 6 % ,有明显统计学差异 (P <0 .0 5 ) ,后 2组复发率无统计学差异 (P>0 0 5 )。丝裂霉素C组 1例并发后部巩膜炎 ,2例表层巩膜炎。干扰素组未发现全身及局部毒副作用。结论 干扰素是一种有效。

翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植对创面上皮修复及复发的影响

目的探讨翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植对创面上皮修复及复发的影响。方法选择2011年11月至2015年6月收治的翼状胬肉患者,共162例202眼,在翼状胬肉切除的基础上,分别联合自体角膜缘干细胞移植(A组)82例101眼,生物羊膜移植(B组)80例101眼。比较两组的手术前后视力变化、创面愈合时间及复发情况。结果两组术后视力、屈光度均显著改善(P<0.05),而术后两组视力、屈光度无显著性差异(P>0.05);与B组比较,A组创面愈合时间明显缩短,术后并发症发生率显著降低(P<0.05);随访6个月,A组复发率为4.0%,显著低于B组11.9%(P<0.05)。结论翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植可促进创面上皮修复,减少术后并发症,降低术后复发率。

大范围切除联合新鲜羊膜移植治疗复发性翼状胬肉

目的:观察大范围切除联合新鲜羊膜移植术在治疗复发性翼状胬肉的临床疗效。方法:对复发性翼状胬肉47例50眼在显微镜下行大范围翼状胬肉切除联合新鲜羊膜移植术,观察术后胬肉复发及眼表修复情况。结果:术后随访观察6～36mo,4眼复发,46眼治愈,复发率为8%。结论:大范围翼状胬肉切除联合新鲜羊膜移植治疗复发性翼状胬肉能够有效降低胬肉的复发,且羊膜取材方便,手术操作简单,有利于基层医院开展。

新鲜羊膜移植治疗翼状胬肉的临床观察

目的:探讨羊膜移植在翼状胬肉治疗中的应用价值。方法:翼状胬肉患者30例(45眼),其中术后睑球粘连2例(2眼),分别进行新鲜羊膜移植术。术后对患眼进行裂隙灯检查角膜上皮修复情况,羊膜成活情况及新生血管生长情况,随访6～12个月。结果:45眼中未发生羊膜移植后的急性排斥反应和感染现象;其中睑球粘连2例(2眼),移植后眼球恢复运动且视力有不同程度的提高;30例(45眼)翼状胬肉有2眼复发,复发率约为4.44%。结论:羊膜移植治疗翼状胬肉能有效降低复发率,安全有效。

异体羊膜复合神经生长因子桥接长段周围神经缺损的可行性研究(英文)

目的探讨同种异体羊膜材料复合应用神经生长因子替代神经材料桥接周围神经缺损的可行性。方法48只健康SD大鼠制备坐骨神经缺损模型,随机分为4组,即自体神经原位移植组(A组),异体神经移植应用环孢素A(CyclosporineA,CSA)5mg/(kg.d)5周组(B组),异体羊膜材料桥接缺损复合应用神经生长因子组(C组),单纯异体神经移植组(D组)。6只Wistar大鼠取双侧坐骨神经作为供体。于术后12周取移植段神经行光镜、电镜形态学观察,测定神经运动诱发电位潜伏期、神经运动诱发电位峰值、神经传导速度和振幅积分、腓肠肌最大收缩力,再生轴突计数及髓鞘厚度测定。结果12周时A、B、C组的各项检测指标明显优于D组(潜伏期、诱发电位峰值、传导速度、腓肠肌最大收缩力、髓鞘厚度及再生轴突计数ANOVA结果分别为F=12.87,P<0.05;F=19.54,P<0.05;F=35.21,P<0.01;F=56.33,P<0.01.F=75.26,P<0.05;F=14.83,P<0.05;F=96.11,P<0.01),3组间差异无显著性(P>0.05),再生神经形态与功能恢复良好。结论对于长段周围神经缺损,应用异体羊膜复合神经生长因子进行桥接可以有效促进神经再生及功能恢复。

羊膜移植联合眼表润滑剂及配镜治疗初发性翼性胬肉

目的 研究羊膜移植联合眼表润滑剂及配镜对初发性翼状胬肉的治疗效果。方法 初发性翼状胬肉患者 15 0只眼 ,行胬肉逆行切除及羊膜移植术 30只眼 ,术后予以润滑剂点眼及配镜辅助治疗 ;行单纯切除术 12 0只眼作为对照。结果 随访 10～ 16月 ,羊膜移植组 30只眼中 2只眼复发 ,复发率为 6 .7% ;单纯切除组 12 0只眼中 2 4只眼复发 ,复发率为 2 8.3% ,P <0 .0 1。结论 羊膜移植、眼表润滑剂。

深低温保存角膜缘干细胞羊膜片的异体移植

目的 :探讨深低温冷冻保存角膜缘干细胞羊膜片的活性及异体移植疗效。方法 :将兔角膜缘干细胞移植到羊膜上 ,经简化程序降温后置 - 196℃深低温保存 ,并将兔对侧眼制成碱烧伤模型。第 30天～第 4 5天后抽样取出冷冻保存的植片分别行电镜检查及兔角膜缘干细胞异体移植 ,并收稿日期 :2 0 0 2 -0 3 -18;修回日期 :2 0 0 2 -0 7-15基金项目 :浙江省教委课题基金 (sjy0 0 0 0 6)。作者简介 :韩真真 ( 195 0 -) ,女 ,浙江温州人 ,主任医师。研究方向 :眼表疾病和角膜病。通信作者 :韩真真 (E -mail:zuixianmei@sina .com)。于术后第 1个月时进行印迹细胞学检查。结果 :电镜检查显示冷冻保存的角膜缘干细胞超微结构形态正常 ,线粒体轻微水肿。移植术后第 1个月时 ,角膜上皮稳固愈合 ,混浊角膜渐转透明 ,新生血管减少 ,角膜印迹细胞学检查显示角膜上皮细胞正常 ,未见杯状细胞。结论 :深低温保存的角膜缘干细胞羊膜片能有效用于眼表的重建 。

自体角膜缘干细胞与干燥羊膜移植治疗翼状胬肉的对比观察

目的观察并比较自体角膜缘干细胞与干燥羊膜移植治疗翼状胬肉的效果。方法随机将36名（40只眼）翼状胬肉患者分为自体角膜缘干细胞与干燥羊膜移植组。患者首先进行翼状胬肉单纯切除，之后分别进行自体角膜缘干细胞及干燥羊膜移植。术后给予抗感染、抗炎症治疗。所有病例随访观察6～24个月，观察两组术后角膜上皮愈合及翼状胬肉复发情况并进行统计学分析。结果自体角膜缘干细胞移植组术后角膜上皮（6．22±1．90）d愈合，干燥羊膜移植组术后角膜上皮（8．36±2．61）d愈合（P〈0．01）。自体角膜缘干细胞移植组术后1例复发，干燥羊膜移植组术后2例复发（P〉0．05）。结论自体角膜缘干细胞与干燥羊膜移植均能降低翼状胬肉术后复发率，其中自体角膜缘干细胞移植更易于角膜创面愈合。

人CTLA4Ig腺病毒载体的构建及其生物学功能研究

目的:通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体,研究其生物学活性,并用于基因治疗诱导心脏移植耐受。方法:通过基因重组技术,将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中。然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组,经过293细胞包装,构建CTLA4Ig腺病毒载体。用RT-PcR、SDS-PAGE及Western blot等技术,检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌,通过体外实验,观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制作用。通过大鼠体内实验,检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后,CTLA4Ig在体内的表达。结果:CTLA4Ig腺病毒载体构建成功。体外实验证实,CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液,能够抑制异基因脾细胞的单向MLR。体内实验表明,经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体,能够诱导移植耐受,延长心脏移植物的存活。结论:构建的CTLA4Ig腺病毒载体,体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白。该蛋白可抑制T细胞的活化,CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受。

中波紫外线照射延长同种皮肤移植存活

目的 :探讨中波紫外线 ( UV- B)照射延长同种皮肤移植存活机制。方法 :雄性 BALB/c小鼠为受体 ,C57BL/6J小鼠为供体 ,建立同种皮肤移植模型 ,观察 UV- B照射同种皮肤移植存活时间 ;采用 3 H- Td R掺入法和流式细胞仪 ( FACS)来检测受体胸腺淋巴细胞增殖反应和脾脏 T细胞亚群变化。结果 :与对照组相比 ,UV- B照射组同种皮肤移植存活时间明显延长 ( P<0 .0 1 ) ;淋巴细胞增殖反应出现延迟 ,CD4+ 和 CD8+ 细胞增高也延迟。结论 :UV- B照射可能通过抑制移植皮肤内抗原递呈细胞 ( APC)的活性 ,使辅助性 T淋巴细胞 ( TH)活化受到抑制 ,从而阻断直接致敏途径 ,使皮肤移植存活时间延长。

自体角膜缘干细胞移植与羊膜移植治疗翼状胬肉疗效比较

目的比较自体角膜缘干细胞移植与羊膜移植治疗翼状胬肉的临床疗效。方法将61例(68眼)患者随机分为两组,分别采用角膜缘干细胞移植术[35例(38眼)]和羊膜移植术[26例(30眼)]治疗,术后随访3个月至2年。结果角膜缘干细胞移植组1眼复发,复发率2.63%,羊膜移植组3眼复发,复发率10.00%,两组比较有显著差异(P<0.05)。结论胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植或羊膜移植是治疗翼状胬肉的有效方法、可降低复发率减少术后并发症,自体角膜缘干细胞移植较羊膜移植术后不适症状时间短,复发率低,效果更佳。

羊膜移植在翼状胬肉治疗中的应用

目的 :探讨保存及新鲜人羊膜移植在翼状胬肉治疗中的作用。方法 :采用新鲜及保存的人羊膜移植治疗翼状胬肉 39例 ,术后随访 3～ 38月。结果 :39例翼状胬肉 ,术后均未见羊膜植片发生排斥反应 ,1例发生植片滑脱 ,复发率 2 .6%。结论 :羊膜取材方便 ,疗效显著 ,选择性地利用新鲜及保存羊膜 。

生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植在难治性翼状胬肉中的疗效研究

目的探讨生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植术在治疗难治性翼状胬肉中的疗效。方法对31例(31只眼)难治性翼状胬肉患者实施了生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植术,术后随访3～8个月。结果植片无排斥反应发生,术后2周左右溶解吸收,角巩膜创面修复好、光滑。无1例复发。结论生物羊膜联合自体角膜缘上皮干细胞移植术对难治性翼状胬肉是一个简易、安全、有效的手术方式。

羊膜移植联合结膜瓣移植治疗复发性翼状胬肉的疗效观察

目的探讨不使用丝裂霉素C（MMC）的羊膜移植联合带蒂结膜瓣移植术治疗复发性翼状胬肉的临床疗效。方法选取2010年1月至2013年6月于我院行羊膜移植联合带蒂结膜瓣移植术并经半年以上随访的复发翼状胬肉患者42例42眼,年龄26~74岁,观察期6~24个月。根据病例记载,对翼状胬肉有无复发、手术前后有无眼球运动障碍和睑球粘连、手术至复发的时间、术前既往手术次数等内容进行回顾性分析。结果 42眼经长期随访观察,3级大胬肉的30眼中29眼（97%）未确认复发或复发后形成较小的胬肉,复发程度得到控制。同时,术前伴有睑球粘连和眼球运动障碍的病例术后分别有47%（17眼中8眼）和56%（25眼中14眼）得到改善。复发多见于术后6个月内,术后1年以上复发的仅有1例。在复发的8眼中有3眼（38%）需要再次手术。结论本术式未联合应用MMC,在过去反复多次手术病例的81%中有效防止了复发。即使在复发的病例中胬肉的大小也得到了很好的控制。但仍有需要再次手术的病例,本术式也有一定的局限。存在重度睑球粘连和眼球运动障碍的病例有必要考虑联合MMC的术式。另外,应在根据客观检查判断睑球粘连和眼球运动障碍程度的基础上,结合复视这一主观检查作为术式选择时的指标。

兔骨髓基质细胞同种异体移植修复骨缺损的实验研究

目的 :观察同种异体骨髓基质细胞移植治疗骨缺损的效果。方法 :取新生新西兰大白兔四肢长管骨骨髓 ,分离后加入条件培养液体外培养 ,冻存复苏的细胞以明胶海绵吸附后回植于异体兔的桡骨缺损处作为实验侧 ,对侧以明胶海绵吸附生理盐水作为对照侧。分别于术后 2、4、8、 1 2周取材 ,观察其修复骨缺损的能力和免疫排斥反应。结果 :植入异体骨髓基质细胞明胶海绵复合体未见明显的免疫排斥反应 ;术后 1 2周实验侧全部骨性愈合 ,对照侧由纤维组织填充。结论

羊膜移植联合丝裂霉素治疗翼状胬肉的临床疗效分析

目的:探讨术中应用羊膜移植联合丝裂霉素C降低翼状胬肉术后复发的效果。方法:将原发性翼状胬肉40只眼切除胬肉后,术中运用羊膜移植联合0.2mg/ml丝裂霉素,观察其术后的复发率和并发症。结果:随访6～18个月,39只眼角膜光滑,37只眼结膜光整不充血,2只眼轻度充血,1只眼复发,复发率为3％。结论:术中应用羊膜移植联合丝裂霉素能够达到进一步降低胬肉复发的目的,同时也避免了严重并发症的发生。

自体角膜缘干细胞移植与新鲜羊膜移植治疗翼状胬肉临床比较

[目的]比较自体角膜缘干细胞移植和羊膜移植两种手术方法治疗翼状胬内的临床效果。[方法]1组35例胬内切除联合自体角膜缘干细胞移植，2组26例胬内切除联合新鲜羊膜移植，术后随访3～24月，比较两种术式术后移植片反应和复发情况。[结果]1组病例术后7例（20％）1～2周内有结膜水肿增厚，1例（2．8％）12月内复发；2组病例术后12（46％）例出现结膜充血水肿，3例（11．8％）6月内复发；全部患者无术后睑球粘连。[结论]胬内切除联合自体角膜缘干细胞移植或新鲜羊膜移植是治疗翼状胬内的有效方法，可降低复发率，减少术后并发症。自体角膜缘干细胞移植效果更佳。

复发性翼状胬肉33眼手术疗效观察

目的:观察复发性翼状胬肉不同手术方法的术后再复发率及并发症。方法:我院2006-11/2009-02对31例33眼复发性翼状胬肉患者(伴有睑球粘连,眼球运动不同程度受限者12眼)施行翼状胬肉切除、丝裂霉素创面贴敷、自体结膜(带蒂或游离)移植或羊膜移植手术,手术方式:彻底切除净胬肉组织,裸露巩膜创面以0.2g/L丝裂霉素C溶液浸湿的棉片贴敷3min后,用生理盐水冲洗干净。巩膜创面覆盖方法:上或(和)下方结膜转位移植26眼,颞上方结膜游离移植2眼,羊膜移植5眼。结果:随访9mo～3a,胬肉未复发28眼;轻度复发(鼻侧球结膜及结膜下组织充血增厚,但未长入角膜缘或长入角膜缘内≤2mm)5眼,复发率15%,其中结膜转位移植4眼,羊膜移植1眼;睑球粘连轻度复发3眼;术后并发结膜肉芽肿1眼,眼部干痛、有时红卡等不适症状5眼,无1例发生角膜、巩膜溶解。结论:翼状胬肉切除联合自体结膜移植或羊膜移植及丝裂霉素创面贴敷的手术方式能明显降低复发性翼状胬肉的术后再复发率。

生物羊膜移植治疗翼状胬肉的临床疗效观察

目的：评价生物羊膜移植和自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的临床疗效。方法：把240例245眼住院治疗的翼状胬肉病人随机分为治疗组及对照组。治疗组采用翼状胬肉切除联合生物羊膜移植术;对照组采用翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术。治疗组120例122眼,对照组120例123眼。观察两组术后眼表情况、角结膜上皮愈合情况、患者自觉症状、复发率以及视力变化。结果：术后1周眼表情况评估,治疗组优良115眼,占94.3%。对照组优良95眼,占77.2%。术后观察角结膜上皮愈合时间,治疗组为3-7 d,3 d愈合率占73.1%,对照组为3-10 d,3 d愈合率占53.6%。治疗组愈合时间明显短于对照组;术后1周患者自觉症状治疗组好于对照组;术后随访24月,治疗组复发率为7%,对照组为13%。结论：翼状胬肉切除联合生物羊膜移植治疗翼状胬肉,术后眼表情况、患者自觉症状优于自体角膜缘干细胞移植术;24月随访总复发率显著低于对照组,经SPSS12.0软件处理,自由度3,χ2=98.45,P〈0.01,差异有统计学意义。两组视力提高不明显,部分提高原因主要是消除了翼状胬肉导致的角膜散光,但经SPSS12.0软件处理,自由度2,χ2=1.66,P〉0.05,差异无统计学意义。