牛分枝杆菌PtpA基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

为深入研究牛分枝杆菌PtpA基因在细胞免疫过程中所发挥的具体调控作用。本研究以牛分枝杆菌基因组为模板扩增得到PtpA基因，通过分子克隆的方法构建完成PtpA基因原核表达载体．并将表达载体质粒转入感受态细菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导表达后进行SDS—PAGE分析，在约35ku处可见特异性蛋白条带。以抗组氨酸标签（HIS）单抗为一抗，对表达产物进行Western—blot检测，结果显示，表达产物可与抗HIS标签单克隆抗体发生特异性结合，证明该蛋白为所需的PtpA蛋白。通过免疫新西兰大白兔获得抗PtpA血清，所得血清用间接ELISA方法测得的血清抗体效价超过1：1000000．具有较好的灵敏性。采用制备的PtpA多克隆抗体检测表达纯化的PtpA融合蛋白及真核表达的PtpA蛋白．结果可在约35ku和约20ku处产生特异性条带，表明该抗体有较强的特异性。本研究为后续PtpA基因调控细胞免疫的具体机制的研究奠定了基础。