PTPRA在血源性丙型肝炎病毒感染胎肝干细胞中的作用

目的采用核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)蛋白组学技术发现并鉴定血源性丙型肝炎病毒(blood borne hepatitis C virus,bb HCV)感染人胚胎肝干细胞(human fetal liver stem cells,h FLSCs)的新关键因子。方法按照bb HCV感染与否以及感染后不同时间点将细胞分为5组,去除各组细胞裂解后的高丰度蛋白,运用纳升液相色谱仪(LC-ESI-MSMS)发现并鉴定差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析,最后对所鉴定出的蛋白利用RT-q PCR和Western blot进行验证。结果对各个时间点的对照组和感染组间进行差异蛋白富集分析,得到bb HCV感染h FLSCs过程中表达差异蛋白PTPRA。针对鉴定的蛋白PTPRA,利用RT-q PCR和Western blot检测发现bb HCV感染后其表达明显升高;利用小RNA技术干涉PTPRA可以降低病毒进入细胞的量。结论 PTPRA可能在bb HCV感染侵入h FLSCs和子代病毒分泌过程中发挥着重要的作用。

羊种布氏杆菌介导巨噬细胞mmu-miR-146a-5p的差异表达及其靶基因的初步鉴定

羊种布氏杆菌(Brucella melitensis,B.melitensis)感染巨噬细胞后,运用高通量测序技术挖掘出mmu-miR-146a-5p差异表达。利用TargetScan和miRDB数据库分别进行mmu-miR-146a-5p靶基因的在线预测,结果分别有224和125个,利用韦恩分析发现,2个数据库的在线预测结果交集有70个;进一步利用PicTar数据库进行mmumiR-146a-5p靶基因的在线预测,并与韦恩分析结果取交集;转染mmu-miR-146a-5p mimics至巨噬细胞中,通过荧光定量PCR方法检测预测靶基因的相对表达量,发现Ptpra与Tfdp2表达量显著降低,结果初步表明,mmu-miR-146a-5p的靶基因为Ptpra与Tfdp2。该试验为进一步研究mmu-miR-146a-5p在羊种布氏杆菌感染巨噬细胞过程中的作用奠定了基础。