Box-Behnken响应面法优化葛根异黄酮提取纯化工艺及损伤心肌细胞治疗作用研究

目的:采用Box-Behnken响应面优化葛根异黄酮最佳提取工艺,并研究葛根异黄酮对损伤心肌细胞的治疗作用。方法:在单因素实验的基础上,以料液比、提取时间、溶剂浓度为考察因素,以3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷的含量为评价指标,采用Box-Behnken响应面法设计实验,以葛根异黄酮总提取率为考察指标,通过分析回归方程模型,优选最佳提取工艺并验证工艺;采用MTT法检测葛根异黄酮对损伤心肌细胞的治疗作用。结果:Box-Behnken响应面法优化得到葛根异黄酮最佳提取工艺为:料液比为30 mg·mL^(-1),提取时间为100 min,乙醇体积分数为73%,葛根异黄酮的总提取率平均值为41.6 mg·g^(-1),与预测值42.08 mg·g^(-1),相对误差0.81%;葛根异黄酮对H 2O_(2)损伤的缺氧复氧模型和Na 2S_(2)O 4损伤的缺血再灌注模型OD值分别为0.7436±0.0292和0.7457±0.0094,细胞存活率分别为81.32%和73.41%。结论:优选葛根抗氧化活性异黄酮最佳工艺稳定,预测模型效果良好,且葛根异黄酮对心肌缺血有良好的治疗作用。

葛根异黄酮抑制XOD和GLUT9分别发挥减少尿酸生成、促进尿酸排泄双重途径的机制

目的:分析葛根异黄酮抑制XOD和GLUT9分别发挥减少尿酸生成、促进尿酸排泄的可能机制。方法:2021年8月~2022年4月,采用随机数字表法将40只SPF级雄性昆明小鼠分为健康组(1次d频率250 mg/kg剂量灌胃羧甲基纤维素钠)、模型组(HUA小鼠1次d频率250 mg/kg剂量灌胃羧甲基纤维素钠)和低(HUA小鼠1次d频率125 mg/kg剂量灌胃葛根异黄酮)、中(HUA小鼠1次d频率250 mg/kg剂量灌胃葛根异黄酮)、高(HUA小鼠1次d频率500 mg/kg剂量灌胃葛根异黄酮)剂量组,每组各8只。比较各组干预前和干预后(30 d)血清和尿液中尿酸(SUA)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)含量的统计学差异,比较各组干预后(30 d)肾脏组织中黄嘌呤氧化酶(XOD)和人葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)、环氧化酶-2(COX-2)、肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)、白细胞介素-1(IL-1β)含量的统计学差异。结果:干预后比较,模型组肾脏炎症因子(COX-2、TNF-ɑ、IL-1β);血液和尿液3项指标(SUA、BUN、SCr);XOD、GLUT9含量均高于健康组(P<0.05);低、中、高剂量组肾脏炎症因子(COX-2、TNF-ɑ、IL-1β);血液和尿液3项指标(SUA、BUN、SCr);XOD、GLUT9含量均低于模型组,且有低>中>高剂量组,两两分组的比较均有统计学意义(P<0.05)。干预后相比干预前,血液或尿液3项指标(COX-2、TNF-ɑ、IL-1β)含量均有下降,组内比较的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:葛根异黄酮能治疗HUA小鼠能通过抑制XOD、GLUT9表达,继而发挥减少尿酸生成、促进尿酸排泄作用,同时有利于缓解疾病的炎症程度。

葛根异黄酮通过调控LKB1/AMPK/PGC⁃1α信号通路对去卵巢大鼠心肌损伤的保护作用

目的研究葛根异黄酮对去卵巢大鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇组(0.1 mg/kg)和葛根异黄酮低、中、高剂量组(55、110、220 mg/kg)。模型组和各给药组大鼠切除双侧卵巢,假手术组大鼠仅切除卵巢周边小块脂肪组织。手术后2周开始给药,每天1次,每周6 d,连续灌胃给药16周。第16周末,通过PowerLab检测血流动力学[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均压(MBP)、左室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVMP)、等容收缩期左心室内压力最大上升和下降速率(±dp/dt_(max))];HE染色观察心脏组织病理变化;生化分析仪检测血浆中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及葡萄糖(Glu)水平;比色法检测心肌组织中三磷酸腺苷(ATP)水平;RT-qPCR法检测心肌组织中葡萄糖转运蛋白4(GLUT 4)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(CPT-1α)、酰基辅酶A-羧化酶(ACC)、肝激酶B1(LKB 1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活酶因子1α(PGC-1α)mRNA表达;Western blot法检测心肌组织中能量代谢相关蛋白LKB1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α表达。结果与模型组比较,葛根异黄酮组SBP、DBP、MBP、LVSP、LVMP降低(P<0.05,P<0.01),-dp/dt_(max)升高(P<0.05,P<0.01);去卵巢所致大鼠心肌纤维溶解、间隙增宽及炎性浸润情况得到改善;LDH、CK活性降低(P<0.05);心肌组织ATP水平升高(P<0.05,P<0.01);TC、TG、LDL-C及Glu水平降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平升高(P<0.05,P<0.01);心肌组织GLUT4、LDHA、CPT-1α、ACC、LKB1、AMPK、PGC-1αmRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);心肌组织LKB1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论葛根异黄酮对去卵巢所致的大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制与改善心肌组织能量代谢相关蛋白,调控LKB1/AMPK/PGC-1α能量代谢相关信号通路有关。

葛根异黄酮调控LncRNA TTTY15对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探讨葛根异黄酮对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响与机制。方法采用高糖诱导人肾小管上皮细胞HK-2建立糖尿病肾病模型,随机分为NG组、HG组、HG+葛根异黄酮L组、HG+葛根异黄酮M组、HG+葛根异黄酮H组、HG+si-NC组、HG+si-TTTY15组、HG+葛根异黄酮+pcDNA组、HG+葛根异黄酮+pcDNA-TTTY15组;噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;利用试剂盒检测超氧化物歧物酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-10水平;qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测TTTY15表达量。结果与NG组比较,HG组细胞增殖抑制率和细胞凋亡、TTTY15表达及MDA、TNF-α、IL-1β水平显著升高,SOD活性和IL-10水平显著降低(P<0.05);与HG组比较,HG+葛根异黄酮L组、HG+葛根异黄酮M组、HG+葛根异黄酮H组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率降低、TTTY15表达量及MDA、TNF-α、IL-1β水平显著降低,SOD活性和IL-10水平显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;与HG+si-NC组比较,HG+si-TTTY15组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及MDA、TNF-α、IL-1β水平显著降低,SOD活性和IL-10水平显著升高(P<0.05);与HG+葛根异黄酮+pcDNA组比较,HG+葛根异黄酮+pcDNA-TTTY15组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及MDA、TNF-α、IL-1β水平显著升高,SOD活性和IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论葛根异黄酮可通过抑制TTTY15表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、氧化应激、炎症反应从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

葛根异黄酮组成、结构及功效机制研究进展

葛根是我国重要的药食两用食品,在我国有着丰富的产量和广大的受众人群。异黄酮类物质是葛根中含量最丰富、功效最多的活性成分,本文全面综述葛根异黄酮的组成、结构,系统阐述其降“三高”、抗氧化、解酒护肝、缓解绝经性骨质疏松、改善认知等功效及作用机制,分析葛根异黄酮研究的热点、存在的问题以及其对相关药物与食品开发的重要意义,为葛根基础研究与相关成果转化提供一定的思路和指导。

葛根异黄酮的生物学功能及其在畜禽生产中的应用

葛根异黄酮是药食同源天然植物葛根的主要活性成分,包括葛根素、大豆苷元、大豆苷等成分,具有抗氧化、抗炎、抗微生物、降糖降脂等生物学功能。作为一种植物提取物,葛根异黄酮在提高畜禽生长性能和免疫功能、调控脂质代谢、改善肉品质等方面起着积极的作用,本文对葛根异黄酮的主要生物学功能及其在畜禽生产中的应用进行了综述,旨在为开发葛根异黄酮作为畜禽绿色无公害饲料添加剂提供依据。

葛根异黄酮抗缺血性脑卒中的活性筛选与研究

利用PC12细胞建立糖氧剥夺(OGD)体外脑卒中损伤模型,采用该模型对葛根异黄酮抗缺血性脑卒中活性进行筛选和验证。评价指标包括:细胞存活率检测、细胞内活性氧(ROS)含量检测、乳酸脱氢酶(LDH)释放率检测、细胞内钙离子(Ca^(2+))浓度检测和细胞凋亡程度检测,并利用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bcl-xL/Bcl-2asociated death promoter,BAD)的表达水平。结果显示,与模型组比较,葛根异黄酮保护组能够抑制细胞凋亡,降低细胞内ROS水平,降低LDH释放、抑制细胞内Ca^(2+)累积,并且Bcl-2表达水平升高,BAD表达水平降低,Bcl-2与BAD蛋白表达量比值上调。表明葛根异黄酮能减轻氧糖剥夺/复氧(OGD/R)造成的PC12细胞损伤,提升细胞存活率,葛根异黄酮可能具有一定的抗缺血性脑卒中活性。其作用机制可能与抑制神经细胞的凋亡,减少神经元丢失相关。

葛根中3个异黄酮类化合物对ox-LDL诱导的脂质沉积和LPS诱导的炎症的影响

目的探究葛根中葛根素、大豆苷和大豆苷元3种异黄酮类成分对ox-LDL诱导的脂质沉积和LPS诱导的炎症的影响。方法采用MTT法确定药物浓度和作用时间。以ox-LDL诱导Raw264.7细胞建立泡沫细胞模型,油红O染色后观察细胞泡沫化情况,酶法检测TC和TG的含量。以LPS诱导Raw264.7细胞建立炎症模型,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)水平。结果经ox-LDL诱导后,模型组细胞内出现大量红色脂滴,细胞泡沫化明显,与模型组比较,3个化合物各浓度组的泡沫细胞中脂滴变小、颜色变浅。ox-LDL诱导后泡沫细胞中TC和TG水平显著升高,与模型组比较,3个化合物均可显著降低泡沫细胞中TC和TG水平。LPS诱导后模型组细胞内TNF-α和IL-1β大量分泌,与模型组比较,3个化合物均可显著抑制模型细胞TNF-α的分泌,葛根素和大豆苷元能显著抑制模型细胞IL-1β的分泌。结论葛根素、大豆苷和大豆苷元能明显抑制ox-LDL诱导的脂质沉积和LPS诱导的炎症因子分泌。

葛根素和葛根总异黄酮的雌激素样活性

目的:研究葛根素和葛根总异黄酮的雌激素样活性。方法:去卵巢大鼠、幼年小鼠、成年小鼠和雌激素化小鼠灌胃给予葛根素和葛根总异黄酮150～600mg/kg,连续5～9天后,阴道脱落细胞检查和子宫重量法判断雌激素样作用。结果:葛根素和葛根总异黄酮能明显增加去卵巢大鼠阴道涂片中角化细胞数量,部分恢复去卵巢大鼠的性周期;使去卵巢大鼠和幼年小鼠子宫重量明显增加,这种作用呈明显的剂量依赖性。对正常成年小鼠的子宫生长无明显影响,在合用雌二醇时,葛根素和葛根总异黄酮均使雌二醇的促子宫生长作用明显减弱。结论:葛根素和葛根总异黄酮对雌激素低下动物显示弱雌激素活性,对正常雌激素水平动物无明显雌激素样活性,而在合用雌二醇时,则部分抑制雌二醇的促子宫生长作用,提示葛根素和葛根总异黄酮具有雌激素受体部分激动剂的特性。

秦岭太白野葛根异黄酮成分的研究

目的：对秦岭太白野葛根（ＰｕｅｒａｒｉａＬｏｂａｔａ）的异黄酮成分进行分离鉴定。方法：以甲醇冷浸提取物，硅胶柱层析分离，理化常数和光谱数据确定异黄酮类化合物的结构。结果：分得６个异黄酮成分，分别鉴定为芒柄花素（Ⅰ）、大豆苷元（Ⅱ）、３＇－甲氧基葛根素（Ⅲ）、８－碳－芹菜糖（１→６）葡萄糖大豆苷（Ⅳ）、大豆苷（Ⅴ）和葛根素（Ⅵ）。结论：化合物（Ⅰ），（Ⅲ）和（Ⅳ）系首次从该植物中分得。

葛根异黄酮对去卵巢大鼠骨矿密度和骨强度的影响

目的 研究葛根总异黄酮 (TIP)对雌激素缺乏引起的骨质疏松症的防治作用。方法 10月龄 SD大鼠 ,手术切除双侧卵巢后 7d,每天 ig TIP10 0和 2 0 mg/kg,并设假手术组 (Sham)、模型对照组 (OVX)和尼尔雌醇阳性组(E3)。在给药 4和 7个月时 ,测定大鼠全身骨矿总量 (BMC)和骨矿密度 (BMD)及骨生物力学强度等。结果 (1)和OVX组相比 ,TIP大剂量组在给药 4个月时 BMC和 BMD分别提高 14.6 %和 12 .1% ,7个月时分别提高 6 .8%和14.2 % ;小剂量组 4个月时分别提高 7.8%和 6 .9% ,7个月时分别提高 8.6 %和 14.9%。 (2 ) TIP大、小剂量组股骨相对体积质量分别提高 3.8%和 3.4% ;胫骨相对体积质量分别提高 6 .8%和 6 .3% ;股骨 Ca盐密度均提高 15 %以上。 (3) TIP大、小剂量组股骨最大负荷分别提高 16 .1%和 9.1% ;结构强度分别提高 19.4%和 12 .5 %。 (4) TIP使大鼠子宫重量明显增加。结论 TIP对去卵巢引起的大鼠骨质疏松症具有明显的防治作用 ,这种作用可能和它的弱雌激素样活性有关。

葛根素及葛根异黄酮对小鼠急性醉酒预防和解酒效果的研究

目的 :研究葛根素及葛根异黄酮对小鼠急性防醉解酒的效果。方法:将小鼠随机分成5组,标记为对照组、葛根粗提物组、葛根异黄酮组、60%葛根素组、99%葛根素组。禁食(不禁水)1 2 h后,每组灌胃等剂量的对应物50%丙二醇水溶液(对照组灌胃50%丙二醇水溶液),30 min后灌胃等剂量56°红星二锅头,观察其醉酒时间与醒酒时间以研究不同含量葛根素对小鼠急性防醉解酒的效果,并在给酒后持续检测小鼠血液中的乙醇含量,以表征不同时段小鼠的醉酒程度。将另一批小鼠随机分为4组,禁食(不禁水)12 h后,分别按100、200、300、400 mg/kg(以体质量计,葛根异黄酮中葛根素含量约为22.13%)剂量灌胃,醉酒时间与醒酒时间以研究葛根素防醉解酒的最佳给药量。结果:随着所给药物中葛根素含量的增高,小鼠急性醉酒的醉酒时间逐渐延长,醒酒时间逐渐缩短。随着葛根素含量的增高,药品解酒防醉的效果越好,但在300 mg/kg(以体质量计)之后,变化趋于缓和。结论:葛根素对小鼠急性防醉解酒有较好的预防效果,葛根中其他异黄酮类物质与葛根素有相似的防醉解酒功效。

微波萃取葛根总异黄酮的工艺研究

该文研究了利用微波萃取葛根异黄酮的工艺。结果表明 :用 77%的乙醇 ,固液比为 1∶ 14 ,在体系温度低于60℃的条件下 ,微波间歇处理 3次 ,葛根总黄酮的浸出率达 96%以上。与传统的热浸提相比 ,不仅产率高 ,而且速度快 ,节能。

利用大孔吸附树脂纯化葛根异黄酮的研究

对 6种商品化大孔树脂吸附纯化葛根异黄酮的性能进行对比筛选 ,发现AB 8树脂最适合葛根异黄酮的纯化。试验结果表明 ,洗脱剂乙醇的体积分数为 70 % ,工作液流速为2BV/h ,浸提浓缩液 pH值为 5时 ,采用AB 8大孔吸附树脂串联柱对葛根异黄酮进行纯化效果最优 。

野葛根异黄酮成分的超声萃取及抗氧化作用

采用超声法分别以95%乙醇、甲醇、70%乙醇和水为溶剂在不同时间水平从野葛根中萃取异黄酮活性成分,并用定性、定量的分析方法测定了野葛根提取物中异黄酮成分及其质量分数;同时,测定了在最佳条件下提取的葛根异黄酮对DDPH自由基的清除率。结果表明:以甲醇为溶剂超声萃取30分钟提取野葛根异黄酮成分效果最佳,提取率为20.6%,总黄酮质量分数为50.03%;采用超声萃取法从野葛根中提取异黄酮活性成分具有省时、节约能源、总黄酮提取率和产品纯度高的优点;葛根异黄酮具有较强的抗氧化作用,是一种天然的抗氧化剂。

葛根异黄酮、淀粉的提取及葛产品开发研究进展

葛根是一种药食同源的天然植物。从葛根中提取的异黄酮和淀粉具有很好的保健功能、药理功能和加工功能;以葛根为原料生产加工的葛类食品,具有很高的营养价值。本文对葛根资源、化学成分及其功能等作一综述,并对葛根异黄酮、葛根淀粉的提取及开发应用状况进行了全面和最新的介绍与评述,以期为葛根进一步的开发和利用提供参考。

王不留行黄酮苷和葛根异黄酮对哺乳母猪泌乳性能及血清激素和抗氧化指标的影响

本试验旨在探讨王不留行黄酮苷和葛根异黄酮对哺乳母猪泌乳性能及血清激素和抗氧化指标的影响。试验采用2×2双因子随机设计,主效应分别为王不留行黄酮苷(0、2 g/kg)、葛根异黄酮(0、2.5 g/kg)及二者互作。选择胎次和预产期相近的经产长白母猪24头,随机分为4个组(对照组、王不留行黄酮苷组、葛根异黄酮组和混合组),每组6头猪。预试期7 d,正试期21 d。结果表明:1)混合组母猪平均日采食量显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,各添加组哺乳第2周仔猪平均日增重均有升高的趋势,混合组显著高于对照组(P<0.05)。各添加组常乳中胰岛素样生长因子I含量显著高于对照组(P<0.05),且各组间均差异显著(P<0.05)。2)混合组第1、10、21天血清中生长激素,第21天雌激素和第1、10、21天催乳素含量均显著高于对照组(P<0.05)。3)各添加组第10、21天血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于对照组(P<0.05),第10、21天血清中丙二醛含量显著低于对照组(P<0.05)。混合组第1、10、21天的血清中总超氧化物歧化酶活性显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,在本试验条件下,添加王不留行黄酮苷和葛根异黄酮提高了母猪的泌乳量,血清中催乳素、生长激素含量及总超氧化物歧化酶活性,使母猪泌乳性能、血清激素和抗氧化指标得到提高。

葛根中有效成分总异黄酮提取工艺研究

对提取葛根总异黄酮的不同工艺路线进行了探索，提出了一条优化的工艺路线。实验中以分光光度法为检测手段，以葛根素为检测指标。

葛根异黄酮抑制去卵巢大鼠胫骨骨矿和微量元素丢失

目的 :研究葛根总异黄酮 (TIP)对去卵巢引起的骨质疏松症大鼠骨骼骨矿和微量元素含量的影响。方法 :5 2只雌性SD大鼠分为假手术、模型、尼尔雌醇 (CEE3 )、TIP 10 0和TIP 2 0共 5组。除假手术组外均切除双侧卵巢 ,7d后分别灌胃给予 0 .5 %CMC Na(假手术和模型组 )、CEE3 1.0mg·kg 1·wk 1、TIP 10 0和 2 0mg·kg 1·d 1,连续 7个月。化学法测定胫骨钙和磷含量 ,原子吸收分光光度法测定铁、锌、镁、锰、铜、钴、铬和钼等微量元素的含量。结果 :大鼠在去卵巢后胫骨的表观密度及灰密度分别下降了 5 .8%和 11.4 % ,钙、磷、铁、锌和镁等元素的含量也显著减少。经TIP 10 0和 2 0mg·kg 1·d 1治疗 7个月后 ,胫骨表观密度增加 7.5 %和 7.1% ,灰密度增加 9.6 %和 4 .6 % ;钙密度增加 9.8%和 6 .1% ,磷密度增加 10 .1%和 6 .2 % ,对钙磷比值无明显影响。铁、锌和镁含量恢复到接近正常水平 ,锰和钼含量略高于正常组 ,而铜比正常组高 39%和 75 % ,铬比正常组高313%和 2 6 5 % ,钴含量则无明显变化。结论

葛根异黄酮降低雌性去势大鼠血胆固醇水平

目的:研究葛根异黄酮对雌激素缺乏大鼠脂质代谢的影响。方法:10月龄雌性SD大鼠手术切除双侧卵巢后1周口服葛根异黄酮,连续7个月,在第1.5、4.0和7.0个月时测定血清或肝脏的脂质水平。结果:双侧卵巢切除后大鼠血清TC水平明显上升,TC和HDL-C比值明显提高,TG水平无明显改变。口服葛根异黄酮使血清TC水平明显下降,HDL-C水平略有下降,二者的比值显著降低,血清TG水平在1.5月时明显下降,4.0和7.0无明显影响。肝脏甘油三酯水平显著降低,胆固醇水平有轻微的增加趋势。结论:葛根异黄酮降低去卵巢大鼠血清TC和肝脏甘油三酯水平。