Ultrasonically Assisted Extraction of Isoflavones from Stem of Pueraria lobata （Willd.） Ohwi and Its Mathematical Model

Ultrasonically assisted extraction of isoflavones from the stem of Pueraria lobata （Willd.） Ohwi has been carried out with an ultrasonic extracting apparatus （20kHz, electrical power input to the transducer in 0-650W）. The influence of the electrical power input and extraction time on the＇extraction yield is investigated in water, n-butanol, and 95% （by volume） and 50% （by volume） ethanol aqueous solution. The experimental results indicate that the yields of total isoflavones are higher in ultrasonically assisted extraction than those obtained from con-ventional extraction.Moreover,a mathematical model is proposed,by introducing the electrical power input to index the ultrsound intensity,to describe the behavior of ultrasonically assisted extraction.It is found that the model calcuations are in good agreement with the experimental data.

Extraction Technology of Total Flavonoids from Pueraria lobata (Willd.) Ohwi and Content Determination of Pueraria lobata (Willd.) Ohwi at Different Altitudes

[Objectives]To optimize the extraction technology of total flavonoids from Pueraria lobata( Willd.) Ohwi. [Methods]The ultraviolet-visible spectrophotometry was used to determine the content of total flavonoids in Pueraria lobata( Willd.) Ohwi. With the puerarin as index,the reflux extraction and single factor test were employed to investigate the effects of temperature,time,ethanol concentration and solid-liquid ratio on the content of total flavonoids in Pueraria lobata( Willd.) Ohwi,respectively. Under the optimal extraction technology,the content of total flavonoids in Pueraria lobata( Willd.) Ohwi at different altitudes was determined.[Results] The optimum extraction process was as follows: 70%ethanol; solid-liquid ratio of 1∶ 30; 1 h reflux extraction. Under these conditions,the extraction rate of flavonoids in Pueraria lobata( Willd.) Ohwi was 11. 48%,the total flavonoids content of different kudzu parts was in the order of roots > stems > leaves,and the total flavonoids content of the sample at about an altitude of 1000 m was significantly higher than at the altitudes of 1400 m and 1700 m.[Conclusions]It was suggested that the Pueraria lobata( Willd.) Ohwi should not be cultivated as medicinal plant in too high mountains,and the stems and leaves of Pueraria lobata( Willd.) Ohwi could be used as raw materials for extracting total flavonoids.

基于HPLC指纹图谱结合一测多评法的葛花质量控制研究

建立葛花药材的指纹图谱,并同时建立其中10个主要黄酮类成分含量的一测多评分析方法(QAMS),用于不同产地葛花药材整体质量评价。采用高效液相色谱法(HPLC)对不同产地葛花中主要化学成分进行分析,确定最佳色谱条件,建立指纹图谱;在此基础上,以葛花苷为参照峰,建立QAMS测定葛花10个黄酮类成分含量;并与外标法(ESM)测定结果比较,验证QAMS的准确性。建立了葛花药材指纹图谱,20批葛花和10批粉葛花药材的相似度均大于0.85,标定共有峰分别为18和27个。以葛花苷为参照峰,各个成分校正因子的重复性、耐用性均良好;应用一测多评法测定10个成分的含量,与外标法测定结果比较,含量无明显差异(P>0.05),相对偏差<3.0%。不同产地来源的葛花药材中10个成分含量均存在较大差异,说明应提高葛花药材的质量控制标准。所建立的指纹图谱结合一测多评分析方法简便、可行,可客观、有效的用于不同产地葛花药材质量评价,可以为葛花质量标准修订、优质葛花种质资源的选育和育种提供参考。

基于网络药理学探讨丹参-葛根药对治疗心肌纤维化的作用机制

目的采用网络药理学探讨丹参-葛根药对治疗心肌纤维化的活性成分及作用机制。方法从中药系统药理学分析平台获取丹参-葛根药对活性成分和作用靶点,通过GeneCards数据库获取心肌纤维化的相关靶点,使用Venny 2.1软件获取两者共同靶点;运用STRING数据库和Cytoscape 3.7.1软件构建共同靶点的蛋白-蛋白互作(PPI)网络并进行拓扑学分析;采用ClusterProfiler R功能包对共同靶点进行基因本体(GO)功能和KEGG通路富集分析;最后使用Cytoscape 3.7.1软件构建“活性成分-靶点-通路”网络并分析。结果筛选得到丹参-葛根药对候选活性成分30个,活性成分和心肌纤维化共同靶点41个。共同靶点PPI网络的平均点度值为19.7,平均介数为19.1,度值和介数均超过平均值的靶点共有14个。KEGG显著富集到73条通路,其中与心肌纤维化相关的通路有6条。“活性成分-靶点-通路”网络显示,丹参中的木犀草素、丹参酮IIA和葛根中的葛根素、β-谷甾醇等活性成分通过共同调控脂质与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的AGE-RAGE、血流剪切力与动脉粥样硬化、缺氧诱导因子-1(HIF-1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介数-17(IL-17)等信号通路起到抗心肌纤维化的功效。结论揭示了丹参-葛根药对多成分、多靶点、多通路治疗心肌纤维化的作用特点,为进一步研究丹参-葛根药对治疗心肌纤维化的作用机制提供理论依据和新的思路。

葛根、粉葛炮制前后多糖和微量元素含量研究

目的:探讨不同的切制规格及炮制方法对葛根、粉葛所含多糖、微量元素含量的影响。方法:利用UV以及ICP-MS检测方法,对葛的不同品种(葛根、粉葛)、不同规格(片、丁)、不同炮制方法(煨制、醋制)中所含多糖和微量元素含量进行测定。结果:多糖类含量粉葛远高于葛根;丁块型葛基本高于片型葛;葛根丁经过煨制、醋制后没有显著变化,葛根片煨制提高、醋制降低,粉葛丁经过煨制、醋制后提高,粉葛片经煨制、醋制后降低。微量元素含量,葛根中Fe、Cu、Zn、Mg、K、Mn含量均高于粉葛,但Ca含量明显低于粉葛;Fe的含量均是片大于丁,Zn、Ca含量则是丁大于片;葛根丁中微量元素含量经过煨制后变化较大、醋制变化较小,葛根片中Fe、Cu、Zn、Mg、Mn含量煨制降低、醋制提高,粉葛丁中Fe、Zn、Mg、K、Ca含量经过煨制、醋制后降低,粉葛片中Fe、Zn、Ca含量经过煨制、醋制后降低。结论:葛根、粉葛不同的切制规格及炮制方法对其多糖和微量元素含量均可产生不同程度的影响,而该变化可为进一步深入探讨葛的炮制作用机理提供参考依据。

基于Citespace的粉葛研究进展可视化分析

基于文献计量学方法,通过Citespace软件绘制知识图谱,以“粉葛”和“甘葛藤”为主题词,将采集到的1993~2022年377篇文献作为研究对象,对文献的发文量、作者、发文机构、期刊分布、等进行信息挖掘,并通过关键词聚类图谱、时间图谱、突现词分析等方法进行可视化分析。结果表明,粉葛相关文献年发文量总体呈现上升趋势,2020以来呈现快速增长态势。从事粉葛研究的主要机构包括江西中医药大学、广西农业科学院、广西大学等,合作单位和合作团队呈现明显的“地缘”和“学缘”特征。目前,粉葛相关文献40%发表在核心期刊上,其中,中医药类和食品加工类期刊收录的粉葛相关文献较多。研究内容从理论走向实践,研究热点从粉葛品质鉴定、粉葛栽培技术转向粉葛生药学、产业经济调研等;目前,淀粉、产量、多糖等成为突现关键词;关键词时区图结果显示葛根素、总黄酮、HPLC等关键词贯穿整个粉葛研究阶段,成为该领域的研究基石,反应了粉葛研究存在的一定问题。

葛根调控PPARs信号通路改善脂肪细胞胰岛素抵抗的体外研究

目的通过体外研究探讨葛根改善脂肪细胞胰岛素抵抗的关键分子机制。方法优化建立胰岛素抵抗(IR)-3T3-L1细胞模型,以5%、10%和15%葛根含药血清干预24 h后,采用ELISA法检测脂肪细胞上清液中脂联素(ADPN)含量;油红O染色法观察脂肪细胞的形态变化。分子对接预测葛根化学成分与过氧化物酶体增殖物激活受体家族(PPARs)的结合活性。采用Western Blot法检测脂肪细胞PPARγ/α蛋白及其磷酸化表达水平,并采用试剂盒检测其PPARγ/α活性;以PPARγ/α特异拮抗剂GW9662/GW6471分别干预后,采用qPCR法检测PPARγ/α及其调控基因的转录水平。结果与IR模型组比较,5%、10%和15%葛根含药血清组细胞外泌ADPN含量显著增加(P<0.05,P<0.01),小脂肪细胞数量增多,胞内脂滴变小。分子对接显示葛根中多个活性成分与PPARγ和PPARα有较强结合活性,而与PPARδ结合相对较弱。与IR模型组比较,5%、10%和15%葛根含药血清能显著上调PPARγ和PPARα蛋白表达(P<0.001),下调p-PPARγ(Ser112)蛋白表达(P<0.001),而p-PPARα(Ser12)蛋白条带检测不到,提示非磷酸化活性状态PPARγ和PPARα表达上调,与检测到的PPARγ/α活性显著增强(P<0.001)相吻合。GW9662/GW6471分别拮抗后,与非拮抗对照组比较,10%葛根含药血清组细胞PPARγ及其靶基因ADPN、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA表达均显著下调(P<0.001);PPARα及其靶基因中链脂酰辅酶A脱氢酶(MCAD)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)mRNA表达均显著下调(P<0.05,P<0.001)。此外,与IR模型组比较,10%葛根含药血清组细胞的胰岛素受体(InsR)、胰岛素受体底物1(IRS1)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、PPARδ和诱导细胞死亡的DFF45样效应因子B(CIDEB)mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.001)。结论葛根可能通过激活PPARγ/α表达及活性功能,协调调控脂肪细胞糖脂代谢,改善其IR。

野葛花不同发育期射干苷和染料木素含量经时对比研究

目的阐明野葛花不同发育期(花蕾、花)射干苷、染料木素含量的经时变化特征,为该药材的合理采收、资源利用提供参考。方法分别以不同发育期野葛花花、花蕾为样品。采用高效液相色谱法测定射干苷、染料木素的含量,Inertsil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水(15∶85),流速为1.0 ml·min^(-1),柱温40℃,检测波长265 nm,进样量为10μl。结果射干苷和染料木素的线性范围分别为0.8~52.0 mg/L、0.7~44.0 mg/L,r均为1.0000,平均加样回收率为98.56%[相对标准偏差(RSD)=1.97%]、101.08%(RSD=1.76%)。不同采收期的野葛花花蕾和花样品中射干苷的含量花蕾>花,染料木素的含量花蕾<花,射干苷和染料木素的含量最高点均为立秋后样品。结论野葛花立秋后采收较优。

野葛根异黄酮成分的超声萃取及抗氧化作用

采用超声法分别以95%乙醇、甲醇、70%乙醇和水为溶剂在不同时间水平从野葛根中萃取异黄酮活性成分,并用定性、定量的分析方法测定了野葛根提取物中异黄酮成分及其质量分数;同时,测定了在最佳条件下提取的葛根异黄酮对DDPH自由基的清除率。结果表明:以甲醇为溶剂超声萃取30分钟提取野葛根异黄酮成分效果最佳,提取率为20.6%,总黄酮质量分数为50.03%;采用超声萃取法从野葛根中提取异黄酮活性成分具有省时、节约能源、总黄酮提取率和产品纯度高的优点;葛根异黄酮具有较强的抗氧化作用,是一种天然的抗氧化剂。

秦岭太白野葛根异黄酮成分的研究

目的：对秦岭太白野葛根（ＰｕｅｒａｒｉａＬｏｂａｔａ）的异黄酮成分进行分离鉴定。方法：以甲醇冷浸提取物，硅胶柱层析分离，理化常数和光谱数据确定异黄酮类化合物的结构。结果：分得６个异黄酮成分，分别鉴定为芒柄花素（Ⅰ）、大豆苷元（Ⅱ）、３＇－甲氧基葛根素（Ⅲ）、８－碳－芹菜糖（１→６）葡萄糖大豆苷（Ⅳ）、大豆苷（Ⅴ）和葛根素（Ⅵ）。结论：化合物（Ⅰ），（Ⅲ）和（Ⅳ）系首次从该植物中分得。

葛根高效液相指纹图谱的研究

目的 采取高效液相色谱法建立野葛的指纹图谱 ,为野葛药材质量控制提供依据。方法 Agilent高效液相色谱仪 ,Zorbax XDB- C1 8(4.6 mm× 2 5 0 mm ,5μm)色谱柱 ,甲醇和水梯度洗脱 ,流速 0 .5 m L /min,检测波长 2 5 0nm。结果 精密度和重复性试验中各共有峰相对峰面积的 RSD均小于 5 % ,符合有关规定。

葛藤不同类型叶耐旱结构的比较解剖学研究

选取葛藤栅栏组织厚度/叶肉组织厚度、栅栏组织直径、海绵组织直径、气孔密度、表皮毛密度、维管束密度、主脉厚角组织层数等旱生指标,对葛藤的3个引种类型叶的旱生结构进行比较解剖研究,结果表明3个类型的相对抗旱顺序为:美国葛藤优势最强,粉葛次之,药葛最差.

广西粉葛产业现状分析及其发展建议

【目的】调研分析广西粉葛产业发展现状及存在的问题,并提出发展建议,为加快广西粉葛产业健康可持续发展提供参考。【方法】对广西粉葛产业进行实地调研,收集相关资料(2018—2020年),围绕广西粉葛种植区域、种植面积、主要品种、产量、加工等方面综合分析广西粉葛产业的发展现状及存在问题。【结果】广西是我国最大的粉葛产区,种植面积达10201 ha,其中梧州、桂林和贵港为广西粉葛产业主产区,种植面积占全区粉葛种植总面积的70.6%。广西从事粉葛种植及加工的企业及合作社众多,且发展了粉葛+花生、粉葛+沙姜、粉葛+苦瓜和粉葛+毛节瓜等间作或套种种植模式。通过线下及电商销售葛根鲜薯、葛根粉、葛根茶、葛根面、葛根酒、葛根蛋黄酥和葛根粒等葛根产品,经济效益良好,行业发展势头迅猛。但同时,广西粉葛产业存在产品知名度不高,缺乏地理标志产品等具有标识性的品牌;选育种工作滞后,选育成功的优良品种不多,缺乏优良的高葛根素粉葛品种;栽培技术和产品质量参差不齐,机械化程度极低;葛根产品以食用为主,综合利用程度不高;加工线较少、加工设备较落后;粉葛基础研究薄弱等问题,严重制约了广西粉葛产业的可持续发展。【建议】加强桂字号品牌打造,培育龙头企业;加强粉葛优良新品种的引进、选育及推广;建立标准化、规模化种植示范基地;加强生产加工技术的改造,加快产业链一体化发展;加强粉葛基础研究。

葛根淀粉老化动力学的研究

利用宽角X 射线粉末衍射和差示扫描量热法研究了储存于不同温度下 ,随储存时间延长 ,葛根淀粉的老化度、老化速率等老化动力学问题。结果表明 ,完全糊化的葛根淀粉储存于 - 2 2℃ ,4℃和 2 8℃ ,均会发生老化作用而具有明显的X 射线衍射峰。所形成的老化淀粉衍射峰的衍射强度有较大差异。在 4℃储存时衍射峰的强度最大 ,2 8℃储存时衍射峰的强度最小 ,表明储存于 4℃时老化度最大 ,储存于 2 8℃时老化度最小 ,- 2 2℃的老化度居两者之间。在储存初期 (0～ 4d) ,老化度与储存时间基本呈正相关。根据Avrami方程计算的结果 ,储存于 4℃时的老化速率是 - 2 2℃储存时的 1.6倍 ,是 2 8℃储存时的 3.4倍。试验结果为生产具有较高储存稳定性和良好品质的葛根淀粉类食品提供理论依据。

葛根对小白鼠免疫功能的影响

从免疫学方面探讨中药葛根的强身健体作用。方法 :用 10 0 %葛根水浸出液定期给小鼠灌胃 ,然后检测小鼠抗体产生能力、淋巴细胞转化率、巨噬细胞吞噬的功能。结果 :用药组小白鼠以上免疫学指标均有显著增强作用 ,与对照组相比有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。未见有副作用。结论 :口服葛根可明显增强机体免疫功能。

UHPLC法同时测定不同产地葛根中5种活性成分的含量

目的：建立同时测定不同产地葛根中3＇-羟基葛根素、葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷和大豆苷元5个成分含量的UHPLC法。方法：采用Agela Venusil MP C18（100 mm×2.1 mm,3μm）色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,检测波长250 nm。结果：3＇-羟基葛根素、葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷和大豆苷元分别在12.41-248.24ng（r=0.9999）、58.82-1 176.47 ng（r=0.9997）、12.65-252.94 ng（r=0.9999）、12.14-242.82 ng（r=0.9998）、1.82-36.30 ng（r=0.9997）进样量范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率为99.03%-100.32%,RSD值为0.26%-1.37%。结论：本方法简便可靠、快速,可有效控制葛根的质量。

葛藤的饲用价值及其在攀西地区畜牧业中的应用

葛藤的根、茎、枝、叶不但富含蛋白质、碳水化合物等易消化吸收的营养物质,而且还具有防治动物疾病的作用,是饲药合用、牲畜和家禽喜食的优质牧草和饲料。研究了葛藤的饲用价值和饲用方法,提出了在攀西地区畜牧业中的应用建议。

葛根淀粉生产工艺的研究

采用Ｃａ（ＯＨ）２水溶液代替清水作为浸泡剂，可以有效地提高淀粉的抽提率及淀粉的品质，也使功能性保健因子葛根总黄酮在淀粉中的保留量大为提高。正交试验研究的结果表明，葛根淀粉生产的最优工艺条件为：料液比１∶４，浆料ｐＨ８．５，浸泡时间３ｈ，浸泡温度３０℃。

葛根资源遗传多样性和性状关联分析

通过研究葛根资源的遗传多样性和葛根表型性状与分子标记的关联分析,为葛根的分子育种和指纹图谱构建提供理论依据。鉴定分析了127份不同来源葛根资源的10个表型性状,并用ISSR标记研究127份葛根资源的遗传多样性,对ISSR标记与表型性状进行关联分析。表型性状鉴定结果显示葛根资源的10个性状变异大、多样性较好。利用ISSR标记获得多态性条带109条,平均每个引物扩增5.73条、平均Nei's基因多样性0.2085、平均Shannon's指数0.3378,最远遗传距离为0.46。ISSR分子标记聚类分析将127份资源聚为两大类,群体结构分析和PCo A分析结果类似将127份资源分为2个亚群。GLM分析发现3个与茸毛性状关联标记,MLM分析未发现与表型性状关联的标记。本研究收集的资源遗传多样性较好,葛根分子标记聚类结果与地域关系不大,综合GLM和MLM关联分析结果,本试验未发现与表型关联位点。

不同采集时间野葛不同部位总黄酮和葛根素含量比较

The contents of flavonoids and puerarin in Pueraria lobata(Willd.) Ohwi were measured by UV-spectrophotometry and HPLC.The results showed that contents of flavonoids and puerarin in P.lobata were related to different parts and gathering season.The flavonoids and puerarin content from vines gathered in autumn and winter were the highest,reached to 5.18%-6.12% and 0.982%-1.718% respectively.The vine is regarded as the available medicinal resources and is worth exploiting.