野葛(Pueraria lobata)愈伤组织诱导及组织培养

以野葛茎尖分生组织为外植体,通过不同激素与MS培养基配比试验,筛选出野葛茎尖分生组织愈伤组织诱导与植株再生的最适培养基,建立野葛植株再生体系。试验结果表明:茎尖分生组织在MS+2,4-D 0.5 mg/L培养基上启动诱导愈伤组织,再转移到MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L继续诱导,愈伤组织诱导率高,繁殖能力旺盛。在MS+6-BA 1 mg/L培养基上愈伤组织分化率100%,生长能力较强。在MS+NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导生根率达到60%。

京西葛组织培养及快速繁殖研究

通过京西葛茎段的离体培养和快速繁殖实验,探讨了京西葛不定芽的诱导、分化、增殖及生根的最佳培养条件。结果表明:以优良京西葛的具腋芽茎段为外植体,经2.2%NaClO灭菌25～30min后成活率可达50%;适于京西葛不定芽诱导的培养基为MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L,诱导分化率为88.89%;适于不定芽分化及继代培养的培养基为MS+NAA0.15mg/L+6-BA0.3mg/L+2,4-D0.2mg/L,继代芽分化率为83.33%,继代倍数达6～7倍;适于生根的培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L,生根率达100%。本研究最终建立了京西葛的组织培养体系并初步建立起一套较为完善的快速繁殖技术体系。

野葛叶片和茎段高频再生体系的建立

探讨几种因子对野葛叶片和茎段高频再生体系建立的影响。采用植物组织培养、正交实验和单因子实验的方法。野葛叶片和茎段的最佳消毒方式为70%酒精处理30 s后再用0.1%HgCl2处理15 min;野葛叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+NAA 1.0 mg.L-1+2,4-D 2mg.L-1,野葛茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+NAA0.5 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1+2,4-D 2 mg.L-1;暗培养更有利于野葛愈伤组织的诱导;野葛叶片和茎段愈伤组织诱导的最佳蔗糖浓度均为30 g.L-1;野葛叶片愈伤组织的最佳出芽培养基为MS+NAA 1.0 mg.L-1+6-BA3.0 mg.L-1,而野葛茎段愈伤组织的最佳出芽培养基为MS+NAA0.5 mg.L-1+KT2 mg.L-1;光照培养更有利于野葛叶片和茎段愈伤组织芽的再分化;野葛叶片愈伤组织再生芽生根的最佳培养基为MS+NAA0.5 mg.L-1+PP3330.5 mg.L-1,而野葛茎段愈伤组织再生芽生根的最佳培养基为MS+NAA0.5 mg.L-1+PP3333.0 mg.L-1;野葛叶片和茎段愈伤组织再生芽生根的最佳蔗糖浓度均为30 g.L-1;叶片再生苗移栽的最佳PP333浓度为1.0 mg.L-1,茎段再生苗移栽的最佳PP333浓度为3.0 mg.L-1;叶片和茎段再生苗的最佳移栽基质均为蛭石:珍珠岩(2:1)。

葛根与葛藤化学成分的比较分析

本文对葛根、葛藤的总异黄酮及异黄酮单体、氨基酸、无机元素进行了系统测定、结果表明，二者化学成分的种类、含量相似，为葛根寻找新的药用资源提供了科学依据。

葛藤与葛根中异黄酮类成分的比较

分析比较了野葛〔Ｐｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａ（Ｗｉｌｄ．）Ｏｈｗｉ〕的藤（葛藤）和根（葛根）的主要异黄酮类活性成分。从葛藤中首次分离得到３个化合物，经化学方法和光谱鉴定，证实为大豆甙元（Ａ）、大豆甙（Ｂ）和葛根素（Ｃ）。采用双波长薄层扫描法测定葛藤与葛根中上述３种异黄酮化合物的含量，葛藤中大豆甙元、大豆甙和葛根素的含量分别为０．１９５％，３．９３３％和２．４８１％；葛根中则分别为０．０５９％，０．７１４％和４．３１５％。

响应面法优化超声提取野葛茎中葛根素的工艺

为了研究野葛茎中葛根素的超声提取工艺条件,在单因素试验的基础上,根据星点试验设计原理,选取提取温度、乙醇浓度、超声时间和液料比作为自变量进行试验设计,利用响应面法对结果进行分析。结果表明:提取温度、乙醇浓度和超声时间对野葛根茎中葛根素的提取率均有显著影响,最佳提取工艺条件为:提取温度57℃、乙醇浓度69%、超声时间45 min、液固比21∶1,在此工艺条件下,葛根素提取率预测值为3.532%,验证值为3.524%。

正交试验设计优化野葛藤中异黄酮的提取工艺

目的优选野葛藤中异黄酮的提取工艺。方法以葛藤异黄酮得率为评价指标,通过正交试验设计优化葛藤异黄酮的提取工艺,并对最佳提取工艺进行工艺验证。结果葛藤异黄酮的最佳提取工艺为:乙醇浓度为50%,料液比1:20,超声提取时间30min,超声温度为20℃,异黄酮的提取率可达3.86%。结论采用正交试验设计优化对葛藤异黄酮提取条件进行优化合理可行。

野葛的吸尘能力和茎抗力及繁殖的研究

对野葛 ( Pueraria lobata)的吸尘能力、茎抗力强度及繁殖能力进行了研究 ,结果表明 :野葛吸尘能力为2 .3 96g/50 g鲜叶 ,为对照植物冬青叶的 6.75倍、牡荆叶的 2 .62倍 ;茎节间抗力为 2 4 50 0 N/m2 ,节上抗力为980 0 N/m2 ,加上根系的固土能力 ,其抗滑坡能力可达 3 92 0 0 N/m2 ;其野生繁殖能力也很强 ,且生长迅速 .野葛可以作为净化空气、保持水土和抗滑坡的优良植物 ,并有较高的经济价值和药用价值 .

野葛高频植株再生体系相关因子的优化

对野葛高频植株再生体系相关因子进行优化,结果表明,野葛带芽茎段再生体系的最佳消毒方式为70%酒精处理30s后用0.1%HgCl2处理15min;最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 5.0mg/L;最佳培养条件为:蔗糖浓度30g/L,pH 6.0,液体培养,培养温度25℃,光照培养。

葛藤大豆甙元提取条件的优选

本文用正交试验法，对提取大豆甙元的诸因素进行了研究。采用８５％乙醇回流提取４次．５％Ｈ２ＳＯ４保温水解８ｈ，大豆甙元得率为３．２％。

一年生葛茎的化学成分与纤维特性研究

为充分利用葛麻纤维,采用化学法分析湖南和江西不同地区一年生野葛茎和人工栽培粉葛茎及葛麻的化学成分,探讨制麻技术对纤维性能的影响,并通过电镜扫描、显微镜观察等对葛麻表面形态结构、单纤维特性进行表征。结果表明:野生鲜葛茎的干物质总含量高于粉葛的,且干物质总量、不溶性纤维含量均随生长期延长而增加,粉葛的各项指标在地域和品种间均存在差异,在12月采收的3个粉葛中,太空粉葛茎的粗脂肪、粗蛋白、灰分和可溶性纤维的质量分数均较高,江西粉葛的均较低;碱处理法所得葛麻的残胶率明显小于自然发酵法的残胶率,其断裂强度较大,且葛麻表面的纤维结构较清晰;碱处理法所得不同原料葛麻的理化特性和化学成分在地域间、品种间均表现出明显差异,总体上野葛麻的断裂强度较高,野葛和粉葛均有随生长期延长而断裂强度增加的趋势,胶质等非纤维成分达17.5%~33.3%;野葛的纤维素含量均达80%以上,且不同生长期间的纤维素含量没有明显差异,粉葛的纤维素含量低于野葛的,且12月采收的样品纤维素含量显著低于9月采收样品的;葛麻单纤维的公制支数为3098.2~3866.7 m/g,单纤维线密度为2.6~3.2 dtex,野葛麻的平均直径和公制支数优于粉葛麻的;葛麻的纤维素含量、半纤维素含量与葛麻单纤维的理化特性具有密切关联。

葛藤天敌紫茎甲生物学习性初步观察

对葛藤天敌紫茎甲的形态特征进行了观察,对紫茎甲的生活史、幼虫对葛藤的取食变化动态进行了研究,提出了紫茎甲对葛藤取食的分级标准,并且用于紫茎甲取食作用的评价。结果表明:紫茎甲一年发生1代;在8月份取食株率为80％,取食指数达33.2,另外,紫茎甲幼虫取食形成的虫瘿的大小(体积)与幼虫数呈显著的非线性相关。

野葛藤总黄酮提取的工业化生产和实验室工艺验证比较

目的验证比较生产车间和实验室制备的葛藤提取物的内在质量,探讨实验制备与工业化生产工艺之间的差异。方法采用紫外-可见分光光度法和HPLC法,以葛根素、大豆苷、大豆苷元等成分的含量为评价指标,测定葛藤提取物含量,通过HPLC法制作的葛藤提取物指纹图谱比较和分析各提取物中异黄酮成分组成和含量。结果工业化生产和实验室制备的不同批次间葛藤提取物样品的异黄酮含量相近,差异较小,质量稳定。结论葛藤提取物实验室制备工艺转化为产业化工艺流程可靠可行,为工业化生产提供了保障。

葛藤茎挥发油成分分析及葛根总黄酮提取工艺研究

文章以野葛藤茎及葛根为原材料,通过水蒸气蒸馏-乙醚萃取法提取葛藤茎挥发油成分,并用气相色谱-质谱联用(GC/MS)分析其挥发油成分。以总黄酮的得率为指标,芦丁作为对照样品,亚硝酸钠-硝酸铝法为黄酮类化合物分析方法,采用超声波辅助提取葛根总黄酮。通过单因素实验考察乙醇浓度、固液比、超声功率、提取时间、提取温度对得率的影响,并选用正交实验确定了葛根总黄酮的提取工艺。结果表明,从葛藤茎中成功分离并鉴定出10种主要挥发性成分,其占总成分的83.94%,其中醇类占49.68%,酯类占15.85%,烷类占5.81%,酚类占12.60%。其中蓝桉醇的含量最高,占31.30%。芦丁样品做出的标准曲线方程为Y=11.146X-0.006,R^(2)=0.9992。葛根提取物的精密度和稳定性实验的RSD分别是0.227%、1.23%,平均加标回收率达到98.6%,RSD为1.86%。葛根总黄酮最佳提取工艺为提取温度80℃、乙醇浓度40%、提取时间20 min、固液比1∶50(g/mL)、超声输出功率300 W。在此条件下提取1次,得到葛根总黄酮的得率为1.47%。该实验为以后研发新的葛根及葛藤茎产品提供了理论依据。

葛根总皂苷调控NAMPT-Sirt1轴诱导BMSCs向髓核样细胞分化

目的研究葛根总皂苷(TSPL)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的影响及其作用机制。方法体外建立大鼠腰椎间盘退变模型,分为假手术组、模型组、30 mg/kg TSPL治疗组和50 mg/kg TSPL治疗组。原代培养的BMSCs分为BMSCs组,BMSCs-TSPL(10、20、30、40、50μmol/L)组,BMSCs-TSPL(30μmol/L)-FK866[烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)特异性抑制剂,2.5μmol/L]组,BMSCs-TSPL(30μmol/L)-SRT2104(Sirt1激活剂,10μmol/L)组。二甲基亚甲基蓝比色法检测细胞和组织中糖胺聚糖含量,qPCR和Western blot检测髓核样细胞COL2A1、Aggrecan、Sox9、Tie2以及Sirt1的mRNA和蛋白表达量。WST-8法检测细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腺苷三磷酸(ATP)和NAMPT水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠椎间盘L5~S1组织中糖胺聚糖含量减少(P<0.05);与模型组相比,TSPL治疗组大鼠糖胺聚糖含量增加,且50 mg/kg TSPL效果优于30 mg/kg TSPL(P<0.05);与BMSCs组相比,TSPL单独或联合SRT2104处理增加BMSCs中糖胺聚糖、COL2A1、Aggrecan、Sox9和Sirt1的mRNA和蛋白表达量及NAD^(+)、ATP和NAMPT含量,而降低Tie2的mRNA和蛋白表达量(P<0.05);与BMSCs-TSPL组相比,BMSCs-TSPL-FK866组COL2A1、Aggrecan、Sox9和Sirt1的mRNA和蛋白表达量及糖胺聚糖、NAD^(+)、ATP和NAMPT含量降低,而BMSCs-TSPL-SRT2104组上述指标水平增加(P<0.05)。结论TSPL可通过NAMPT-Sirt1轴诱导大鼠BMSCs向髓核样细胞分化。

HPLC法测定不同生长年限的葛根不同部位中葛根素的含量

目的：建立测定不同生长年限的葛根不同部位中葛根素含量的方法。方法：采用高相液相色谱法。色谱柱为Dikma Diamonsil C18,流动相为甲醇-水（25∶75,V/V）,流速为1.0 ml/min,柱温为室温,检测波长为250 nm。结果：葛根素的进样量在0.18~1.98μg范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系（r=0.999 8）;精密度、稳定性试验的RSD〈2%,重复性试验的RSD〈3%;平均加样回收率为97.01%,RSD=1.71%（n=6）。葛根木质部与韧皮部的葛根素含量相近,茎部最少,且三年生葛根的葛根素含量最高。结论：葛根素含量与生长年限及不同部位有关。该方法操作简单、结果可靠,适用于葛根药材的质量控制。