葛根、粉葛炮制前后多糖和微量元素含量研究

目的:探讨不同的切制规格及炮制方法对葛根、粉葛所含多糖、微量元素含量的影响。方法:利用UV以及ICP-MS检测方法,对葛的不同品种(葛根、粉葛)、不同规格(片、丁)、不同炮制方法(煨制、醋制)中所含多糖和微量元素含量进行测定。结果:多糖类含量粉葛远高于葛根;丁块型葛基本高于片型葛;葛根丁经过煨制、醋制后没有显著变化,葛根片煨制提高、醋制降低,粉葛丁经过煨制、醋制后提高,粉葛片经煨制、醋制后降低。微量元素含量,葛根中Fe、Cu、Zn、Mg、K、Mn含量均高于粉葛,但Ca含量明显低于粉葛;Fe的含量均是片大于丁,Zn、Ca含量则是丁大于片;葛根丁中微量元素含量经过煨制后变化较大、醋制变化较小,葛根片中Fe、Cu、Zn、Mg、Mn含量煨制降低、醋制提高,粉葛丁中Fe、Zn、Mg、K、Ca含量经过煨制、醋制后降低,粉葛片中Fe、Zn、Ca含量经过煨制、醋制后降低。结论:葛根、粉葛不同的切制规格及炮制方法对其多糖和微量元素含量均可产生不同程度的影响,而该变化可为进一步深入探讨葛的炮制作用机理提供参考依据。

基于HPLC指纹图谱结合一测多评法的葛花质量控制研究

建立葛花药材的指纹图谱,并同时建立其中10个主要黄酮类成分含量的一测多评分析方法(QAMS),用于不同产地葛花药材整体质量评价。采用高效液相色谱法(HPLC)对不同产地葛花中主要化学成分进行分析,确定最佳色谱条件,建立指纹图谱;在此基础上,以葛花苷为参照峰,建立QAMS测定葛花10个黄酮类成分含量;并与外标法(ESM)测定结果比较,验证QAMS的准确性。建立了葛花药材指纹图谱,20批葛花和10批粉葛花药材的相似度均大于0.85,标定共有峰分别为18和27个。以葛花苷为参照峰,各个成分校正因子的重复性、耐用性均良好;应用一测多评法测定10个成分的含量,与外标法测定结果比较,含量无明显差异(P>0.05),相对偏差<3.0%。不同产地来源的葛花药材中10个成分含量均存在较大差异,说明应提高葛花药材的质量控制标准。所建立的指纹图谱结合一测多评分析方法简便、可行,可客观、有效的用于不同产地葛花药材质量评价,可以为葛花质量标准修订、优质葛花种质资源的选育和育种提供参考。

葛(葛根、粉葛)炮制前后黄酮类成分含量研究

目的 探讨不同的切制规格及炮制方法对葛根、粉葛中所含黄酮类成分含量的影响。方法 利用HPLC检测方法,对葛的不同品种(葛根、粉葛)、不同规格(片、丁)、不同炮制方法(煨制、醋制)中所含黄酮类成分含量进行测定。结果 黄酮类成分,葛根无论是不同规格还是不同炮制品均高于粉葛;葛根片的黄酮类成分含量明显高于丁,粉葛片和丁含量则无明显差异;煨制或醋制后,葛根片的3’-羟基葛根素、大豆苷元和3’-甲氧基葛根素含量下降,但大豆苷和葛根素含量增加;葛根丁和粉葛片煨制后葛根素含量也增加;粉葛片醋制后大豆苷含量下降;其余炮制品与生品相比5种黄酮类成分变化不明显。结论 葛根、粉葛不同的切制规格及炮制方法对其黄酮类成分含量均可产生不同程度的影响,而这些变化可为进一步深入探讨葛的炮制作用机理提供参考依据。

粉葛主要营养物质、异黄酮成分的积累规律及其相关性分析

为确定粉葛的最佳采收时期及各部位的应用价值,探索粉葛主要营养物质与异黄酮成分的积累规律及相关关系,该研究以广西藤县粉葛为材料,采用测试盒法、酶重量法、索氏抽提法、高效液相色谱法等生理生化技术,测定了成熟期不同部位异黄酮成分的含量及不同生长时期粉葛块根主要营养物质、异黄酮成分的含量,并分析了各营养物质与异黄酮成分积累的相互关系。结果表明:(1)在成熟期,粉葛不同部位的染料木素含量差异均不显著,但叶片的大豆苷元含量显著小于中藤,根头和藤的总异黄酮、葛根素、大豆苷的含量显著大于叶片和块根,并且根头和藤的葛根素含量均超过1.00%。(2)不同生长时期,粉葛的淀粉、多糖、粗蛋白、可溶性蛋白的积累在11月和12月达到最大,不溶性膳食纤维的积累在12月最小,可溶性膳食纤维在8月和12月的积累量最大,总异黄酮和葛根素在8月和9月的积累量最大。(3)总异黄酮、葛根素的积累与淀粉、多糖的积累呈显著负相关,总异黄酮、葛根素的积累与不溶性膳食纤维的积累呈显著正相关。综上结果认为:粉葛的根头、藤蔓含有丰富的总异黄酮、葛根素、大豆苷,具有很好的药用开发价值;粉葛药用的最佳采收期为8月和9月,粉葛食用的最佳采收期为11月和12月;总异黄酮和葛根素的积累与淀粉、多糖、不溶性膳食纤维有一定关系。该研究结果阐明了粉葛主要营养物质、异黄酮成分的积累规律及其相关性,为粉葛的综合开发利用以及采收时期的确定提供了参考依据。

葛根药材HPLC指纹图谱研究

目的 :对不同来源的葛根药材指纹图谱比较研究。方法 :应用RP HPLC法、KromasilC18分析柱、乙腈 水二元梯度洗脱 ,流速为 1.0mL·min-1,检测波长 2 5 0nm。结果与结论 :不同来源的葛根药材所含黄酮类成分均得到很好的分离 ,该法可用于鉴别葛根的品种 ,并为葛根注射液及含葛根药材的中药复方注射液指纹图谱研究奠定基础。

不同品种葛根药理作用的比较性研究

比较了几个品种葛根的ＬＤ＿（５０），云南葛的毒性最大，峨嵋葛和野葛次之，粉葛的毒性最小。抑制２，４－二硝基苯酚引起的大鼠体温升高，以野葛、峨嵋葛和葛根素的作用快速而明显，维持约８个小时。粉葛的作用较弱。对垂体后叶素引起的心肌缺血率，以峨嵋葛的作用最强，野葛和葛根素次之，粉葛的作用最弱。野葛和峨嵋葛的解热和抗心肌缺血作用均明显高于粉葛，葛根素是有效成分之一。

粉葛与野葛中异黄酮的HPLC指纹对照和比色测定

目的：建立粉葛与野葛药材异黄酮的HPLC指纹对照测定法、定性和定量相似性评价指标、以及粉葛与野葛总异黄酮含量的比色测定法。方法：采用C18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸溶液梯度程序洗脱测定粉葛与野葛药材异黄酮的HPLC指纹图谱,统计分析确定共有模式;以最接近共有模式的粉葛与野葛药材为指纹对照,采用夹角余弦法和相对欧氏距离法,分别从化学成分定性和含量2个方面对不同产地粉葛与野葛药材的HPLC指纹图谱进行定性与定量相似性评价。以葛根素为对照,Folin-phenol试剂为显色剂,未加供试品的溶液为空白,70℃水浴显色后,在750 nm下比色法测定粉葛与野葛药材的异黄酮总量。结果：建立的粉葛与野葛异黄酮成分HPLC指纹图谱分离好、专属性强,野葛色谱图中有20个特征指纹峰,粉葛色谱图中有11个特征指纹峰。比色法测定异黄酮总量的线性范围为12-40 mg·L^-1（r=0.999 5）,平均回收率101.1%（n=6）。结论：粉葛与野葛异黄酮指纹图谱以指纹对照品为参照,同时进行夹角余弦法定性和相对欧氏距离法定量相似性评价,重复性和耐用性良好,并且更全面和实用。Folin-phenol试剂比色法测定粉葛与野葛异黄酮总量准确灵敏。

不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定

目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用RP—HPLC法，以甲醇-水（32：68）为流动相，检测波长为250nm测葛根素含量；紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高，峰形改善；葛根素0．204—2．04μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0．9999），回收率为98．7％（n=5），精密度RSD=0．86％。总黄酮浓度在4．08—16．32μg／ml范围内与吸收度线性关系良好（r=0．9998）。结论该法灵敏、准确、简便易行，重复性好，可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。

葛根和粉葛高效液相色谱指纹图谱及化学模式识别

目的:建立并比较葛根和粉葛的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,为其质量控制提供依据。方法:采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C_(18)(4.6 mm×200 mm),流动相为乙腈-0.03 mol/L醋酸铵溶液(梯度洗脱),流速为0.9m L/min,柱温为40℃,检测波长为250 nm,进样量为20μL。收集16批次的葛根和粉葛样品进行测定,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行相似度评价,采用聚类分析和主成分分析对指纹图谱进行化学模式识别研究。结果:16批葛根和粉葛药材的指纹图谱有6个共有峰,经对照指认出葛根素、大豆苷、大豆苷元和染料木素的色谱峰。相似度分析结果显示葛根和粉葛的相似度较高,均在0.910以上;聚类分析将葛根和粉葛样品分别归为两类;主成分分析提取得到8个主成分,累计方差贡献率达到93.548%,前3个主成分得分投影结果与聚类分析基本一致。结论:葛根和粉葛所含化学成分既有一定的相似性,也存在一定差异,该方法可作为葛根和粉葛的质量控制及临床应用的依据。

葛根和粉葛对L⁃NAME诱导高血压大鼠的作用比较及机制研究

目的:阐明葛根和粉葛治疗高血压的药效区别及机制。方法:采用腹腔注射L⁃NAME的方法制作高血压大鼠模型,将大鼠分为9组:正常对照组、模型组、卡托普利组、葛根(低、中、高剂量)组、粉葛(低、中、高剂量)组。造模成功后给药组分别给予相应药物4 w,每周测定大鼠血压,4 w后腹主动脉取血并摘取心脏和胸主动脉组织。试剂盒测定血浆NO、eNOS、LDH、SOD、ANP含量,称量质量计算心脏指数,HE染色观察心脏和胸主动脉组织病理变化。结果:与模型组比较,葛根各剂量组大鼠血压、心脏指数及血浆LDH含量显著降低,血浆NO、eNOS、SOD含量显著升高,葛根中、高剂量组血浆ANP含量显著降低(P<0.05~P<0.001),而粉葛对上述指标无明显影响。组织病理学检查显示,葛根改善了大鼠心肌肥大、心肌纤维化和水肿及血管内皮细胞肿胀有破裂和中膜平滑肌细胞增生,而粉葛对心脏和血管组织无明显改善。结论:葛根对L⁃NAME诱导的高血压大鼠具有治疗作用,而粉葛对高血压大鼠无明显疗效。葛根治疗高血压的机制和提高eNOS和SOD活性及调节ANP分泌有关。

样品处理方法对皖南葛根和粉葛中总黄酮和葛根素含量的影响

目的建立葛根和粉葛中总黄酮和葛根素含量测定方法,比较室温超声法、超声加热法和加热回流法等样品处理方法对葛根和粉葛中总黄酮和葛根素含量测定结果的影响。方法总黄酮含量测定采用紫外分光光度法,在波长250 nm处测定吸光度;葛根素含量测定采用HPLC,固定相为十八烷基硅烷键合硅胶,流动相为甲醇-水(25∶75),检测波长为250 nm,流速为1.0 m L/min。结果室温超声法、加热回流法和超声加热法葛根中总黄酮含量分别为15.09%、14.48%、12.71%(n=3),葛根素含量分别为4.37%、4.09%、3.80%(n=3);粉葛中总黄酮含量分别为2.09%、2.23%、2.17%(n=3),葛根素含量分别为0.50%、0.53%、0.52%(n=3)。结论室温超声法、超声加热法可替代加热回流法分别用于葛根和粉葛中总黄酮和葛根素含量测定时供试液制备;皖南野生葛根和粉葛中葛根素含量均符合药典标准。

野葛与粉葛总黄酮提取方法的比较

目的:野葛与粉葛总黄酮提取方法的比较。方法:分别采用传统回流提取法、超声提取法、微波辅助提取法对中药野葛和粉葛中总黄酮进行提取;以葛根素为对照品,采用紫外分光光度法测定提取物中总黄酮的含量;以总黄酮的含量为考察指标,优选出适宜的提取方法。结果:3种提取方法中,野葛超声提取法总黄酮含量最高,粉葛微波辅助提取法总黄酮含量最高,但回流提取法和超声提取法提取野葛与粉葛总黄酮时没有显著性差异。结论:提取野葛与粉葛黄酮时应采用不同的提取方法。

正交试验优化葛根中葛根素的微波提取工艺

以体积分数50%的乙醇为提取剂,采用微波辅助法提取葛(Pueraria montana var.lobata)根中的葛根素,设计正交试验优化提取工艺。结果表明,优化的提取条件为料液比1∶40(m∶V,g/mL)、微波功率500W、微波处理时间5 min。此工艺条件下葛根中葛根素的提取率为3.51%。与加热回流法相比,采用微波辅助法葛根素的提取率提高了19.79%,提取时间缩短了90%。

葛根与粉葛饮片的色谱指纹图谱研究

目的建立葛根与粉葛质量比较的色谱方法,并用于二者的质量分析与评价,为其质量控制提供新依据,为其药效物质基础的分析奠定基础。方法采用薄层色谱(TLC)法对7个葛根样品和17个粉葛样品进行比较,并采用高效液相色谱(HPLC)法进行指纹图谱测定,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)软件进行分析。采用对照品对比和HPLC-MS技术对其部分色谱峰进行定性鉴别。结果建立的TLC和HPLC指纹图谱能区别葛根和粉葛。HPLC指纹图谱粉葛饮片共有峰14个,野葛根饮片共有峰19个,初步指认了葛根与粉葛HPLC指纹图谱中13和7个成分。结论该文为葛根与粉葛质量控制和临床应用提供可靠依据。

基于FTIR和HPLC的葛根化学成分整体分析与评价

目的：对不同产地葛根与粉葛的化学成分进行整体分析。方法：采用FTIR和HPLC分析方法，对FTIR分析结果进行二阶导数谱、共有峰率和变异峰率的双指标序列分析和聚类分析；以葛根素为参比峰，对各产地葛根进行HPLC指纹图谱相似度及聚类分析。结果：葛根在3400-3340、2930、1730、1630、1520、1450、1260、1160、1050-1000、930、860-840、765、580 cm-1等处有明显的吸收峰，主要为葛根素与淀粉的吸收峰。粉葛在上述吸收峰处也存在明显的吸收，说明其两者化学成分基本相似，但在红外指纹区有明显的区别，其中粉葛在1460、1420和720 cm-1处有特征裂解峰存在。葛根与其HPLC共有峰的相似度在81.4%-99.3%之间。结论：从葛根素的药用效果上考虑要优先使用葛根，FTIR的方法简便易行且能为药材提供丰富的信息。

葛属植物ISSR-PCR扩增条件的正交优化

利用正交试验设计法L9(34),从引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度和dNTP浓度4种因素3个水平,对葛资源ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对PCR反应的退火温度进行梯度筛选。结果表明,25μL最佳的葛资源ISSR-PCR反应体系是:1×PCR buffer、0.20 mmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、2.5 mmol/L Mg2+和0.5 U TaqDNA聚合酶,引物UBC809的最佳退火温度为57.9℃。

伏牛山区野葛与粉葛药材质量综合研究

以《中国药典》法测定野葛(Pueraria lobata(Willd)Ohwi)与粉葛(Pueraria thomsonii Behth)药材的水分、总灰分、浸出物、有害重金属含量,紫外分光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定葛根素和大豆苷元含量,研究了伏牛山区野葛与粉葛药材质量。结果表明,伏牛山区野葛与粉葛药材的水分、灰分含量均达到《中国药典》标准;野葛与粉葛药材的水浸出物、醇浸出物分别为42.11%,31.82%和33.24%,27.52%;有害重金属含量符合《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准》的规定;总黄酮含量分别为16.5%和5.4%;葛根素和大豆苷元分别为4.0%,1.6%和0.035%,0.038%。

葛根、粉葛药材中大豆苷元含量的测定

目的建立测定中药葛根、粉葛中大豆苷元含量的测定方法。方法采用薄层荧光扫描法。甲醇作为提取剂,以硅胶G板为薄层吸附剂,三氯甲烷-无水乙醇(10∶1)为展开剂,在激发波长λex=260 nm处扫描大豆苷元色谱峰的荧光强度。结果在0.0488～0.244μg范围内,大豆苷元标准品的点样量与其薄层荧光扫描色谱峰的面积存在良好的线性关系,(r=0.999)。以此法测得葛根、粉葛样品中大豆苷元的含量分别为0.323%和0.0598%。结论该法准确度高,稳定性、重现性良好,可用于葛根、粉葛中大豆苷元含量的定量分析。

野葛、粉葛水煎液和醇提液中3种异黄酮成分含量的比较研究

目的对野葛、粉葛饮片水煎液和醇提液中3种主要成分含量进行比较研究,探讨两种葛根主要成分的差异。方法采用高效液相色谱法测定野葛和粉葛水煎液、乙醇提取液中3’-羟基葛根素、葛根素和大豆苷元的含量。结果野葛与粉葛相比,无论在醇提液还是水煎液中,野葛中的3’-羟基葛根素、葛根素和大豆苷元这三个成分含量都高于粉葛。野葛水煎液中3’-羟基葛根素含量是野葛醇提液的6.63倍,野葛水煎液中葛根素含量是野葛醇提液的3.49倍,野葛水煎液中大豆苷元含量与野葛醇提液基本相同;但是在粉葛醇提液中这三个成分含量略高于水煎液。结论在醇提液和水煎液中,野葛的3种异黄酮成分含量均高于粉葛。

野葛和粉葛不同溶剂提取物清除DPPH自由基活性的比较

目的:比较野葛和粉葛清除DPPH自由基的活性。方法:分别用乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和石油醚对野葛及粉葛药材进行提取,DPPH法测定抗氧化活性并计算IC50。结果:野葛乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物清除DPPH自由基的IC50值分别是2.6334、17.5689、42.1171mg/m L(生药),氯仿和石油醚提取物200mg/m L(生药)浓度时DPPH自由基清除率分别为18.03%、9.48%。粉葛乙醇提取物清除DPPH自由基的IC50值是12.4629mg/m L(生药),而丙酮、乙酸乙酯、氯仿和石油醚提取物200mg/m L(生药)浓度时对DPPH自由基清除率分别为45.97%、15.03%、10.82%、7.65%。结论:野葛和粉葛各溶剂提取物均具有不同程度的清除DPPH自由基的活性,活性大小顺序均为:乙醇提取物>丙酮提取物>乙酸乙酯提取物>氯仿提取物>石油醚提取物,相同溶剂的提取物野葛清除DPPH自由基的活性较粉葛强。