Optimization of Pulsed-field Gel Electrophoresis Procedure for Bacillus cereus

In order to develop a rapid and reliable method for B. cereus genotyping, factors influencing PFGE results, including preparation of bacterial cells embedded in agarose, lysis of embedded cells, enzymatic digestion of intact genomic DNA, and electrophoresis parameters allowing for reproducible and meaningful DNA fragment separation, were controlled. Optimal cellular growth （Luria-Bertani agar plates for 12-18 h） and lysis conditions （4 h incubation with 500 μg/mL lysozyme） produced sharp bands on the gel.

浙江省伤寒副伤寒沙门菌耐药及分子分型

目的了解浙江省伤寒副伤寒沙门菌耐药及分子分型特点,为伤寒副伤寒防制工作提供依据。方法采用WHO推荐的改良K-B纸片法,对209株甲型副伤寒沙门菌和5株伤寒沙门菌进行14种抗生素敏感性试验;运用脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)方法对119株甲型副伤寒沙门菌进行分子分型及流行病学特征分析。结果209株甲型副伤寒沙门菌对红霉素、萘啶酸和利福平100%耐药,对阿米卡星100%敏感,对环丙沙星的敏感率仅为58%;5株伤寒沙门菌对红霉素和利福平100%耐药,对头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星、氨苄西林、阿米卡星和阿莫西林/克拉维酸100%敏感;不同地区间的甲型副伤寒沙门菌对大部分药物敏感率一致,只有多西环素存在较大差异;119株甲型副伤寒沙门菌共产生20种PFGE带型,并主要集中在2种同源性较高的型别。结论2008年浙江省伤寒副伤寒以甲型副伤寒菌株为优势株,不同地区甲型副伤寒沙门菌对大部分抗生素敏感率一致;高发地区(台州)的菌株PFGE带型比较分散,可能与菌株变异有关。

2005―2014年佛山市霍乱弧菌病原学特征分析

目的分析比较分离自病例与环境的霍乱弧菌的病原学特征,为霍乱防治工作提供实验依据。方法选取分离自霍乱病例（患者和密切接触者）和环境（水体和海水产品）的霍乱弧菌,采用血清学、药物敏感性试验、多重PCR检测毒力基因和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型等方法,分析不同来源的霍乱弧菌在菌型分布、药物敏感性、毒素基因携带以及分子分型方面的异同。结果 2005―2014年佛山市共分离各类来源霍乱弧菌39株,其中病例来源菌株6株、环境来源菌株33株。2种来源菌株的菌型构成均以O1群稻叶型为主;病例来源菌株以产毒株为主,ctx A毒力基因携带率为66.67%,携带8种毒力基因阳性率为50.00%;环境来源菌株以非产毒株为主,ctx A毒力基因携带率为21.21%,携带8种毒力基因阳性率为6.06%。药物敏感性试验结果显示,不同来源的菌株对萘啶酸均有较高的耐药率（〉50.00%）;病例来源菌株对复方新诺明的耐药率（83.33%）高于环境来源菌株（18.18%）。PFGE聚类分析结果显示,39株霍乱弧菌可分为35个PFGE型别,菌株PFGE带型相似度为72.5%~100.0%。结论佛山市霍乱弧菌血清型、毒力基因和遗传特征复杂多样,霍乱防控形势严峻,需要加强霍乱弧菌常规药敏和菌株型别变异情况的监测。