精制蛇毒酶的毒理学研究

目的观察精制蛇毒酶的安全性。方法小鼠100只,随机分成两组,尾静脉注射或腹腔注射精制蛇毒酶后观察动物出现的急性毒性反应,计算半数致死量(LD50)。小鼠120只,随机分为4组,各30只;家兔40只,随机分成4组。观察不同剂量组小鼠连续腹腔给药90 d,家兔静脉给药45 d(隔天一次)的健康状况。在给药后第91天采血,检测丙氨酸氨基转移酶、尿素氮和血常规,并对肝肾组织作病理学检查。结果精制蛇毒酶小鼠尾静脉给药的半数致死量(ivLD50)为6.695 U.kg-1,90%的可信限为5.434～7.956 U.kg-1;小鼠腹腔给药的半数致死量(ipLD50)为4.599 U.kg-19,0%的可信限为3.735～5.462 U.kg-1;各剂量小鼠和家兔肝、肾功能及血常规指标与空白组比较均差异无统计学意义(均P>0.05),病理组织学检查未见明显异常。结论在实验剂量范围内,精制蛇毒酶属低毒性。乳膏中蛇毒酶的含量为1.25×10-2 U.g-1,按成人用量0.05 g.cm-1(6.25×10-4 U.cm-1酶活力)局部用药,其用量安全可靠。

眼镜蛇毒中降压因子的提取及生物活性的研究

目的:从广西眼镜蛇蛇毒中分离纯化血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI),命名为降压因子(hypotensive factor,HF),并测定其生物活性。方法:采用Sephacryl S-100凝胶过滤,CM Sepharose F.F.离子交换层析分离纯化HF,高效液相鉴定纯度,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子量,紫外分光光度法测定HF对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性。用离体兔子十二指肠平滑肌测定HF增强缓激肽(bradykinin,BK)的效应。结果:纯化的广西眼镜蛇蛇毒HF经SDS-PAGE检测显示单一条带,测得其相对分子量约为8.2kDa,由12种氨基酸组成,蛋白回收率为5.70%。HF对ACE有明显的抑制作用,其抑制作用与剂量呈正相关。IC50为1.02μg/ml。HF能增强BK对离体兔子十二指肠平滑肌的收缩效应。结论:成功地从广西眼镜蛇蛇毒中纯化出降血压成分。该成分与血管紧张素转换酶抑制剂作用相似,对血管紧张素转换酶有明显的抑制作用。

优选精制蛇毒酶凝胶剂基质组成及制备工艺

目的室温条件下优选精制蛇毒酶凝胶剂基质组成及制备工艺。方法以凝胶剂的稳定性及外观性状为考察指标,以卡波姆-940、氮酮、丙三醇-丙二醇和吐温-80为可变因素,选用L9(34)表进行正交实验。结果最优的基质组成是:卡波姆-940 2.0g,氮酮1.0g,丙三醇-丙二醇为7g∶3g,吐温-80 1.5g。结论按该法制备的凝胶剂符合中国药典2005年版软膏剂的有关规定。

精制蛇毒酶对小鼠急性毒性研究

目的:观察精制蛇毒酶的急性毒性。方法:采用简化机率法对小鼠尾静脉注射和腹腔注射进行急毒实验,计算半数致死量(LD50)。结果:精制蛇毒酶尾静脉给药的半数致死量(ivLD50)为6.695u﹒kg-1,95%的可信限为6.695±1.498u﹒kg-1;腹腔给药的半数致死量(ipLD50)为4.677u﹒kg-1,95%可信限为4.677±0.793u﹒kg-1。结论:在实验剂量下,精制蛇毒酶低毒、安全。

3种固定化尖吻蝮蛇毒金属蛋白酶的比较

【目的】筛选出一种最优的固定化尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒金属蛋白酶(Snake venom metalloproteinase,SVMP)的方法。【方法】采用D380大孔树脂、海藻酸钠-壳聚糖、溶胶-凝胶等3种载体固定化SVMP,用分光光度法检测固定化金属蛋白酶和游离金属蛋白酶的酶活性,计算它们的酶搭载率、酶活回收率,并检验它们的温度耐受性、pH耐受性和重复使用性,并由此筛选出最优固定化方法。【结果】溶胶-凝胶固定化酶、海藻酸钠-壳聚糖固定化酶和D380大孔树脂固定化酶的酶搭载率分别为91.47%,78.14%和49.44%;D380大孔树脂固定化酶、海藻酸钠-壳聚糖固定化酶和溶胶-凝胶固定化酶的酶活回收率分别为39.00%,39.53%和41.17%;重复使用4次后,溶胶-凝胶固定化酶的酶活回收率最高;溶胶-凝胶固定化酶pH耐受性最优,对温度的耐受性也最高。【结论】溶胶-凝胶固载体固定尖吻蝮蛇SVMP的效果最优。