PPARγ激动剂对肾病大鼠血清和肾组织Angptl4以及尿蛋白排泄的影响

目的观察PPARγ激动剂对嘌呤霉素肾病大鼠血清和肾组织Angptl4以及尿蛋白排泄的作用并探讨其机制。方法雄性SD大鼠60只,腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷(PAN,150mg/kg)制作微小病变大鼠肾病模型,对照组腹腔注射等体积生理盐水,随机分成生理盐水对照组(生理盐水灌胃治疗)、PAN组(PAN注射后行生理盐水灌胃治疗)、Pio0组(PAN注射当天开始吡格列酮灌胃治疗)、Pio4组(PAN注射第4天后开始吡格列酮灌胃治疗)、Pio10组(PAN注射第10天后开始吡格列酮灌胃治疗),吡格列酮灌胃治疗剂量为10mg/(kg·d)。各组大鼠分别在造模后4、10、21d收获大鼠并留取24h尿液、血标本及肾组织标本,测定24h尿蛋白、血清总蛋白、血肌酐、总胆固醇、三酰甘油,ELISA法测定大鼠外周血Angptl4水平,RT-PCR及Western blot法测定肾组织Angptl4mRNA和蛋白表达水平。结果在嘌呤霉素注射后第10天,Pio0、Pio4组与PAN组相比,大鼠尿蛋白量明显降低(P<0.05);肾组织中Angptl4 mRNA和蛋白表达量较PAN组明显下降(P<0.05),外周血Angptl4表达量较PAN组增多(P<0.05)。结论 PPARγ激动剂可能通过增加肾病大鼠血清Angptl4的表达和减少肾脏组织Angptl4表达来降低蛋白尿,起到保护肾脏的作用。

基于非靶向尿液代谢组学技术的毛蕊花糖苷治疗嘌呤霉素氨基核苷肾病幼龄大鼠相关生物标志物研究

通过非靶向尿液代谢组学技术研究毛蕊花糖苷对嘌呤霉素氨基核苷肾病(purinomycin aminonucleoside nephropathy,PAN)幼龄大鼠的内源性代谢特征,初步探讨其潜在的作用机制。采用全自动生化仪检测各组大鼠尿液生化指标含量;采用超高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap MS)联合主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discrimination analysis,OPLS-DA)等寻找筛选潜在生物标志物及相关核心代谢通路。使用MetaboAnalyst 5.0平台绘制工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线来评估核心代谢物临床诊断效能。结果显示,毛蕊花糖苷显著降低PAN幼龄大鼠尿蛋白/尿肌酐比值。PAN幼龄大鼠模型非靶向尿液代谢组学共筛选出17种差异代谢物,涉及到的通路有苯丙氨酸代谢以及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成;毛蕊花糖苷干预PAN幼龄大鼠共筛选出13种差异代谢物,涉及到的通路有苯丙氨酸代谢以及精氨酸和脯氨酸代谢,其中,毛蕊花糖苷治疗后可显著回调的差异代谢物有亮氨酰脯氨酸和苯乙酮。这些通路主要揭示了毛蕊花糖苷干预PAN幼龄大鼠的主要作用机制为氨基酸代谢。ROC曲线进一步分析出的2种核心生物标志物亮氨酰脯氨酸和苯乙酮的曲线下面积均大于0.9。综上所述,毛蕊花糖苷可能通过回调内源性差异代谢物调控氨基酸代谢相关通路治疗PAN幼龄大鼠,这将有助于初步阐明毛蕊花糖苷治疗儿童慢性肾小球肾炎的干预机制。同时提取出的特征性生物标志物对于评估毛蕊花糖苷治疗儿童慢性肾小球肾炎具有较高的诊断价值。

白细胞介素27在肾小球足细胞损伤的作用及他克莫司对其的影响

目的研究嘌呤霉素(PAN)致肾小球足细胞损伤中白细胞介素27(IL-27)mRNA和蛋白表达的变化,探讨他克莫司(FK506)在肾小球足细胞损伤中的保护作用机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为3组:对照组、PAN组和FK506组。3组足细胞经处理8 h、24 h、48 h后在显微镜下观察细胞形态,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)观察IL-27水平的变化,并收集培养的足细胞行实时荧光定量PCR(qPCR)检测IL-27 mRNA表达的变化,采用Western blot检测IL-27蛋白表达的变化。结果1.足细胞形态:在各个时间点(8 h、24 h、48 h),PAN组细胞体积较对照组缩小,形态改变;FK506组较PAN组体积偏大并饱满,趋于正常。2.IL-27的水平:在各个时间点(8 h、24 h、48 h),PAN组[(110.00±3.52)ng/L、(302.00±6.23)ng/L、(397.00±8.92)ng/L]均高于对照组[(90.00±5.12)ng/L、(85.00±4.21)ng/L、(88.00±4.20)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.05);FK506组[(96.00±4.17)ng/L、(107.00±4.86)ng/L、(112.00±6.24)ng/L]均低于PAN组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。3.IL-27 mRNA表达量:在各个时间点(8 h、24 h、48 h),PAN组(1.25±0.11、1.57±0.08、1.73±0.13)均高于对照组(1.02±0.02、1.10±0.04、0.96±0.02),差异均有统计学意义(均P<0.05);FK506组8 h时(1.10±0.06)无明显升高,24 h和48 h时(1.21±0.04、1.30±0.09)表达量稍有升高;与PAN组比较,FK506组均低于PAN组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。4.IL-27蛋白的表达量:在各个时间点(8 h、24 h、48 h),PAN组(0.94±0.04、1.56±0.07、1.63±0.04)均高于对照组(0.83±0.04、0.85±0.03、0.83±0.05),差异均有统计学意义(均P<0.05);FK506组(0.84±0.05、0.89±0.04、0.91±0.06)与PAN组比较,8 h无明显差异,24 h后IL-27蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),48 h后IL-27蛋白表达下降更为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-27参与肾脏疾病的发病,FK506通过降低IL-27的表达,抑制肾小球足细胞的损伤,为临床应用FK506治疗肾脏病提供一定依据。