细胞角蛋白8GFP/Puro双标干涉慢病毒系统的构建及对细胞凋亡的影响

目的构建细胞角蛋白8(CK8)的双标慢病毒干涉载体,获得高滴度慢病毒颗粒,感染HCT116细胞建立稳定株,检测CK8敲低对细胞凋亡的影响。方法将CK8的siRNA序列插入慢病毒表达载体GV248,并与包装质粒PMD、SPA共转染293T细胞,36、48 h分两次收集慢病毒上清,应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染HCT116细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞,Western blotting检测干涉效果。采用Annexin V/PI染色检测干涉CK8对化疗药物顺铂诱导的细胞凋亡的影响。结果与结论成功构建CK8干涉慢病毒载体并得到干涉稳定株,在HCT116细胞中干涉CK8使细胞对顺铂引起的凋亡更加敏感。