基于Au-g-C_(3)N_(4)NS纳米复合材料的分子印迹电化学发光传感器检测叶酸

近年来,作为一种新型的二维半导体纳米材料,石墨相氮化碳纳米薄片(g-C_(3)N_(4)NS)因其优异的电化学发光(ECL)性能和良好的成膜特性在ECL传感领域备受关注。然而,g-C_(3)N_(4)NS在较高的工作电压下产生的ECL信号不稳定,而金纳米粒子(Au NPs)的引入可明显改善其发光稳定性.基于这个特点,采用原位生长法将Au NPs引入g-C_(3)N_(4)NS中,制备了一种金-石墨相氮化碳纳米复合材料(Au-g-C_(3)N_(4)NS),以其作为ECL物质固定在电极上.同时,引入具有专一识别能力的分子印迹聚合物(MIP),构建了一种检测叶酸(FA)的分子印迹-电化学发光(MIP-ECL)传感器.该传感器对FA表现出良好的选择性和灵敏响应,在优化的条件下,信号变化与FA物质的量浓度在1.0×10^(-10)~1.0×10^(-3) mol·L^(-1)的范围内呈良好的线性关系,检出限(LOD)达到0.07 nmol·L^(-1).并且探讨了检测机理,考察了传感器的稳定性和重现性,将传感器用于实际样品中FA的检测,获得满意结果.

基于Fas/FasL信号通路探究调控miR-214-3p对帕金森病大鼠的干预效果

目的研究基于Fas/Fas配体(FasL)信号通路探究调控微小RNA(miR)-214-3p对帕金森病模型大鼠的干预效果。方法选取36只清洁级SD雄性大鼠,其中8只为正常组,其余28只建立帕金森病模型,建模成功24只大鼠分为上调miR-214-3p组、下调miR-214-3p组、模型组各8只,各组脑组织中miR-214-3p表达采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测,对各组步幅距离、悬挂时间进行观察,各组脑组织中炎症因子的表达采用酶联免疫吸附试验检测,采用Western印迹检测Fas/FasL信号通路相关蛋白表达。结果与正常组相比,上调miR-214-3p组、下调miR-214-3p组、模型组miR-214-3p、甲状腺激素(TH)表达明显降低,Fas、FasL表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,上调miR-214-3p组miR-214-3p、TH表达较高,Fas、FasL表达较低,下调miR-214-3p组miR-214-3p、TH表达较低,Fas、FasL表达较高,差异有统计学意义(P<0.05);与下调miR-214-3p组相比,上调miR-214-3p组miR-214-3p、TH表达较高,Fas、FasL表达较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,上调miR-214-3p组、下调miR-214-3p组、模型组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1、IL-6表达较高,步幅距离较小,悬挂时间较短,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,上调miR-214-3p组TNF-α、IL-1、IL-6表达较低,步幅距离较大,悬挂时间较长,下调miR-214-3p组步TNF-α、IL-1、IL-6表达较高,幅距离较小,悬挂时间较短,差异有统计学意义(P<0.05);与下调miR-214-3p组相比,上调miR-214-3p组TNF-α、IL-1、IL-6表达较低,步幅距离较大,悬挂时间较长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-214-3p可有效改善大鼠帕金森病,其作用机制可能与Fas/FasL通路有关。

过量表达Fa14-3-3C促进拟南芥对低氮胁迫耐受性的研究

氮元素是植物生长发育过程必不可少的营养元素之一,对禾本科作物生长的影响更加明显。本研究采用RACE技术从高羊茅叶片中克隆获得Fa14-3-3C基因全长,并对其亚细胞定位与分子功能进行系统研究。在烟草表皮细胞中观察发现Fa14-3-3C-GFP主要定位在细胞质中与细胞膜上。将Fa14-3-3C基因在拟南芥中过量表达获得3个单拷贝转基因株系(抗性分离比为3∶1)。在低氮胁迫反应中,Fa14-3-3C过量表达株系OE-1与OE-3的根鲜重显著比野生型高,而OE-2与野生型差异不显著,通过荧光定量PCR分析发现OE-1与OE-3过量表达明显而OE-2没有过量表达,说明Fa14-3-3C对植物耐低氮胁迫调节具有剂量效应。定量观察植物根系生长发现在低氮处理早期OE-1转基因株系就显著优于野生型,主要是通过补偿根系生长的方式缓解低氮胁迫对植物的伤害。因此本研究不仅获得了耐低氮胁迫候选基因,而且验证了其在模式植物中的分子功能,为进一步通过基因工程等手段培育耐低氮胁迫种质资源奠定基础,具有重要理论研究价值与生产应用前景。

FAP-1分子对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响

目的探讨Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响.方法采用免疫印记法(Western blot)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测了经FAP-1反义寡核苷酸(FAP-1ASODN)封闭前后FAP-1蛋白与核酸在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达水平;应用四唑盐比色法(MTT法)和流式细胞术(FCM)检测了经抗Fas激活性抗体DX2诱导凋亡后FAP-1分子对SKOV3细胞凋亡行为的影响.结果FAP-1蛋白与mRNA在卵巢癌细胞株SKOV3中均有明显表达.当用DX2以不同时间和不同浓度诱导凋亡后,DX2+FAP-1ASODN组在12、24、48和72 h的细胞抑制率约为DX2组的1～2倍,细胞凋亡率约为后者的2～4倍,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);在DX2低、中、高3个浓度时,DX2+FAP-1ASODN组的细胞抑制率为(20.94±1.15)%、(34.70±1.24)%、(45.45±2.80)%,DX2组分别为(11.42±0.38)%、(18.33±1.29)%、(28.75±1.81)%,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);而在DX2组与DX2+FAP-1SODN组间无显著性差异(P＞0.05).结论FAP-1分子在卵巢癌细胞SKOV3中有明显表达,且具有抵抗Fas介导凋亡的功能,而FAP-1ASODN可以明显提高卵巢癌细胞对凋亡的敏感性,可能对卵巢癌的发病与治疗具有重要意义.

血清Hcy、CA15-3、FA、VitB12联合检测对乳腺癌女性患者病情及生存状况的评估价值

目的探究血清Hcy、CA15-3、FA、VitB12联合检测对乳腺癌女性患者病情及生存状况的评估价值。方法选取我院2011年5月~2014年5月收治的50例乳腺癌患者和在健康体检中选取的50例乳腺良性患者和50例正常女性作为此次研究对象。比较乳腺癌组和乳腺良性组、乳腺癌组和正常人组的Hcy、CA15-3、VitB12浓度水平和生存质量;比较乳腺癌组患者不同病理分期Hcy、CA15-3、FA、VitB12浓度水平。结果乳腺癌组的Hcy和CA15-3的水平明显高于正常人组和乳腺良性组(P<0.05);Ⅰ~Ⅱ期患者的Hcy、CA15-3水平均低于Ⅲ~Ⅳ期患者(P<0.05);乳腺癌组患者的生理状况、情感状况、社会/家庭状况、功能状况、附加关注及生存质量总分的得分均低于正常人组和乳腺良性组(P<0.05)。结论血清Hcy、CA15-3、FA、VitB12联合检测对乳腺癌妇女病情及生存状况具有较高的评估价值,值得临床推广。

系统性红斑狼疮患儿外周血单个核细胞IL-10、Foxp3和Fas mRNA的表达变化

目的观察系统性红斑狼疮(SLE)患儿外周血单个核细胞IL-10、叉状头转录因子3(Foxp3)、Fas mRNA的表达。方法采用实时定量RT-PCR测定30例SLE患儿(SLE组)及20例健康儿童(健康对照组)外周血单个核细胞IL-10、Foxp3、Fas mRNA表达。结果 SLE组、健康对照组IL-10 mRNA表达分别为0.78±0.12、0.12±0.03,P<0.01;Foxp3 mRNA表达分别为1.38±0.16、0.68±0.13,P<0.01;Fas mRNA表达分别为0.83±0.11、0.14±0.05,P<0.01。结论 SLE患儿IL-10、Foxp3和Fas基因mRNA呈高表达。

脊髓中间外侧神经元NOS与FAS和NT_3共存

目的 :研究脊髓中间外侧神经元除含有NOS外是否还含有Fas和NT3 .方法 :取成年猫脊髓L3 节段制作 2 0 μm厚冰冻切片并分组 .用相邻切片分别进行ABC法免疫染色和NADPH -d组织化学反应双染 .观察NOS与Fas和NT3 在脊髓中间外侧神经元是否共存 .结果 :在脊髓中间外侧神经元观察到双标反应物 ,Fas主要位于细胞核 ,胞浆弱阳性反应 ,NOS的阳性反应物则主要位于细胞浆 .相对之 ,NOS和NT3 的阳性反应物则均位于细胞浆 .神经突起内均见双标染色 .结论 :脊髓中间外侧神经元内NOS ,Fas和NT3 共存 ,进而提示这些成员可能与脊髓中间外侧神经元的某些生理功能有关 .

瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因-6及相关上下游分子表达水平及相关性的初步探究

目的:研究瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因(TSG)-6及相关上下游分子的表达水平及相关性。方法:收集78例瘢痕疙瘩样本,另取50例正常皮肤组织样本作为对照。采用免疫组化检测TSG-6的阳性表达率,采用Western blot检测TSG-6、磷酸化磷酸肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、自杀相关因子(Fas)、Fas配体(FasL)、转化生长因子(TGF)-β1及磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白表达水平,采用荧光定量PCR法检测组织样本中微小RNA(miR)-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平。结果:瘢痕疙瘩组织中TSG-6的阳性表达率、TSG-6、Fas及FasL的蛋白表达水平均低于正常皮肤组织,p-PI3K、pAKT、TGF-β1、p-Smad3、miR-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平高于正常皮肤组织(P<0.05);瘢痕疙瘩组织中TSG-6的表达水平与p-PI3K、p-AKT、TGF-β1、p-Smad3、miR-23b、miR-181a及miR-376b的表达水平呈负相关,与Fas及FasL的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论:TSG-6表达降低与瘢痕疙瘩形成有关,其机制可能涉及上游miR-23b、miR-181a、miR-376b及下游PI3K/AKT、Fas/FasL、TGF-β1/Smad通路。

人参皂苷Rg1对帕金森病模型小鼠黑质区FADD和FLIP表达的影响及其意义

目的:探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)模型小鼠黑质区凋亡信号蛋白Fas死亡结构域蛋白(FADD)、FADD样白细胞介素1-转化酶样抑制蛋白(FLIP)及Caspase-3表达的影响,阐明FADD和FLIP在PD发病机制中的作用及人参皂苷Rg1对多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法:45只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组15只。模型组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),人参皂苷Rg1组小鼠注射MPTP前先注射人参皂苷Rg1,对照组小鼠腹腔注射生理盐水。观察各组小鼠行为学变化;采用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、FLIP、FADD及Caspase-3的表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠出现典型PD症状,黑质区TH阳性细胞数明显减少(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显增加(P<0.01),胞浆染色深;FADD、FLIP及Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,人参皂苷Rg1组小鼠PD症状减轻,黑质区TH阳性细胞数明显增多(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显减少(P<0.01),胞浆染色浅;FADD、FLIP和Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.01)。FADD与Caspase-3阳性细胞数呈正相关关系(r=0.791,P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可通过影响PD模型小鼠黑质区FADD和FLIP的表达对DA能神经元起到一定的保护作用。

益气化瘀方对缺血-再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察益气化瘀方对缺血-再灌注(I/R)大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Fas及P53表达的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支,心肌缺血30 min,再灌注2、4 h制作缺血-再灌注模型。将大鼠随机分为7组,即假手术组、模型2 h组(缺血-再灌注2 h)、模型4 h组(缺血-再灌注4 h组)、通心络2 h组(缺血-再灌注2 h)、通心络4 h组(缺血-再灌注4 h)、益气化瘀方2 h组(缺血-再灌注2 h)、益气化瘀方4 h组(缺血-再灌注4 h)。造模前连续灌胃相应药物1周。免疫组化法测定Bcl-2、Bax、Caspase-3、Fas、P53蛋白表达。结果益气化瘀方可提高缺血-再灌注大鼠心肌Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)、降低缺血-再灌注大鼠心肌Bax、Caspase-3、Fas、P53蛋白表达量(P<0.05)。结论益气化瘀方可减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡,其机理可能与上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax、Caspase-3、fas、P53蛋白表达有关。

病毒性心肌炎病程中肿瘤坏死因子α和Fas mRNA表达的变化

目的 观察病毒性心肌炎(VMC)的小鼠模型中肿瘤坏死因子(TNF) -α和Fas mRNA在心肌中表达的动态变化,探讨它们在VMC中的可能作用及其机制。方法 腹腔接种柯萨奇病毒B组3 型(CVB3 )建立VMC小鼠模型。在接种病毒后第7、14 和28 天,采用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)检测小鼠心肌中TNF -α和Fas mRNA表达水平,并观察心肌形态学改变的差别。结果 与正常对照组相比,VMC小鼠TNF -α和FasmRNA表达明显增加。TNF- αmRNA表达高峰在接种后第7天,14 d后仍有大量表达,28 d后表达明显减少;Fas mRNA在接种第7天后明显增加, 14 d 后达到高峰, 28 d 后仍有一定量表达。结论 VMC小鼠心肌中TNF -α和Fas mRNA表达明显增加。TNF- α参与炎症反应和心肌损伤,Fas是引起心肌细胞坏死的重要蛋白。

基质金属蛋白酶对狼疮性肾炎Fas介导凋亡的影响

目的 :通过检测 30例活动期狼疮性肾炎 (LN)患者肾小球中PCNA、Fas、P2 7、MMP - 2、MMP - 3蛋白的表达 ,以探讨基质金属蛋白酶对狼疮性肾炎肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法 :30例患者全部行肾活检 ,分别进行常规病理检查 ,并通过连续切片和免疫组化SP法 ,测定PCNA、Fas、MMP - 2、MMP - 3在肾小球中的表达。结果 :30例患者 ,LNⅠ～Ⅱ型 10例 ,LNⅢ～Ⅳ型 2 0例 ,2组病例肾小球中MMP - 3表达无统计学差异 ,Fas、MMP - 2表达P <0 .0 5 ,PCNA表达P <0 .0 1。所有病例 ,肾小球中PCNA/P2 7比值 >1。结论 :活动期狼疮性肾炎肾小球中系膜细胞处于促凋亡状态 ,Fas介导的凋亡过程受到抑制 ,MMPs可在受体水平调节FasL抑制凋亡 ,也通过MMPs直接蛋白水解酶的作用 ,诱导细胞外基质积聚成分的改变 ,而存活信号的改变 ,会影响细胞凋亡。

苦参碱诱导人乳腺癌细胞凋亡逆转耐药及对酸化蛋白激酶B、Fas、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达的影响

乳腺癌的综合治疗除手术、放疗、内分泌外，化疗仍是最有效的治疗方法，化疗可明屈提高患者的生存率，但肿瘤的多约耐药（MDR）是临床化疗最棘手的难题，寻找高效低毒能抗肿瘤并能逆转MDR新药是目前肿瘤防治研究的热点。

左归饮煎剂对围绝经期大鼠卵巢Caspase-3和Fas表达的影响

目的:研究左归饮煎剂对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡指数(AI)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate-specific protease,Caspase)-3和凋亡相关因子(Fas)表达的影响。方法:采用围绝经期大鼠模型,分别灌胃高、中、低剂量(31.00、20.67、13.78g/kg)左归饮煎剂,每周1次,连续8周。用TdT介导原位缺口末端标记法观察卵巢细胞AI;用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢Caspase-3、FasmRNA及蛋白的表达情况。结果:高、中、低剂量左归饮煎剂可显著降低围绝经期大鼠卵巢细胞AI(P<0.01或P<0.05),显著降低围绝经期大鼠卵巢Caspase-3与Fas的表达(P<0.01)。结论:左归饮煎剂可通过抑制围绝经期大鼠卵巢细胞过度凋亡来改善卵巢功能,这种抑制作用可通过下调围绝经期卵巢Fas和Caspase-3的表达实现。

资冲颗粒含药血清对ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/FasL、IDO在人早孕绒毛膜组织中表达的影响

目的:探讨资冲颗粒对体外人早孕绒毛膜组织ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的影响。方法:对体外培养的人早孕绒毛膜组织加入2%、5%、10%的鼠资冲颗粒含药血清培养24-72h。同时,在组织培养中加入孕酮作为阳性对照组而仅有基础培养基为空白组。采用Q-PCR技术检测ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO m RNA的表达。采用特异ELISA试剂盒定量检测ανβ3和HLA-G的蛋白表达。结果:10%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L、IDO基因表达均显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。10%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3和HLA-G蛋白表达显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。结论:资冲颗粒具有增加ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的作用,可能是该中药复方治疗不孕症分子生物学机制之一。

血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 膜联蛋白A2及Fas配体水平在预测子宫内膜异位症严重程度中的作用

目的分析血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)、膜联蛋白A2(ANXA2)及Fas配体(FasL)水平在预测子宫内膜异位症严重程度中的作用。方法选取2018年10月—2019年7月浙江衢化医院收治的行腹腔镜手术的子宫内膜异位症患者为研究对象,分为Ⅰ~Ⅱ期组(29例)和Ⅲ~Ⅳ期组(30例)。随机选取同期29例良性卵巢囊肿行腹腔镜手术的患者为对照组。收集血清样本,采用ELISA法检测血清Caspase 3、ANXA2及FasL水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估3个指标在子宫内膜异位症诊断中的灵敏度与特异度。结果对照组和子宫内膜异位症组血清Caspase 3水平分别为(6.75±3.84)ng/ml和(11.68±4.79)ng/ml,血清ANXA2水平分别为(13.40±6.43)ng/ml和(17.93±10.64)ng/ml,血清FasL水平分别为(107.19±58.57)pg/ml和(137.43±81.53)pg/ml。对照组和子宫内膜异位症组血清Caspase 3、ANXA2水平比较差异均有统计学意义(t=12.718,7.952,均P<0.05),FasL水平比较差异无统计学意义(t=3.636,P>0.05)。3组血清Caspase 3、ANXA2及FasL水平比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期组血清Caspase 3、ANXA2及FasL水平显著高于Ⅰ~Ⅱ期组和对照组(均P<0.05)。ROC曲线分析显示:子宫内膜异位症组Caspase 3的截断值为9.04 ng/ml时,曲线下面积(AUC)为79%(95%CI:0.68~0.88),灵敏度为70%,特异度为72%。Ⅲ~Ⅳ期组中Caspase 3的截断值为10.70 ng/ml时,AUC为93%(95%CI:0.57~0.82),灵敏度为90%,特异度为87%。结论血清Caspase 3水平可能是子宫内膜异位症严重程度的可靠预测指标,且特异度和灵敏度较高。

幽门螺杆菌感染慢性胃炎患者ZO-1、Fas、Runx3蛋白表达变化及与组织病理特征关系

目的探讨幽门螺杆菌感染的慢性胃炎患者紧密连接蛋白-1(Zonula occluden-1,ZO-1)、Fas跨膜蛋白(Factor associated suicide,FAS)、矮小相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,Runx3)蛋白表达变化与组织病理特征的关系。方法采集2018年1月-2019年1月九江市第三人民医院消化内科95例幽门螺杆菌感染的经内镜检查确诊的慢性胃炎患者胃黏膜表面的病理样本,分为慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)组25例、慢性非萎缩性胃炎(Chronic superficial gastritis,CSG)组28例、肠化生(Intestinal metaplasia,IM)组23例、上皮内瘤变(Intraepithelial neoplasia,IN)组19例,并以无幽门螺杆菌感染的慢性胃炎患者为对照组。免疫组化分析上皮细胞ZO-1、Runx3蛋白表达变化。流式细胞术分析胃上皮细胞中的Fas受体表达水平。结果与未感染Hp的对照组相比,幽门螺杆菌感染的慢性胃炎患者ZO-1蛋白降低,IM、IN组低于其他病理类型(P<0.001);Runx3蛋白水平降低(P<0.001);Fas蛋白水平升高(P<0.001),CAG、IM、IN组Fas蛋白水平高于CSG组(P<0.001)。ZO-1蛋白水平与EDS评分呈负相关性(r=-0.572,P=0.0278),Fas蛋白表达与EDS评分呈正相关性(r=0.510,P=0.0343)。结论幽门螺杆菌感染的慢性胃炎患者胃上皮细胞ZO-1、Fas、Runx3蛋白表达变化与不同病理类型有关,ZO-1、Fas蛋白与胃黏膜损伤程度密切相关。

电针对干眼症兔结膜细胞凋亡及相关蛋白Caspase-3、Fas和Bcl-2表达的影响

目的:通过观察电针对干眼症兔结膜细胞凋亡及相关蛋白Caspase-3、Fas和Bcl-2表达的影响,从细胞凋亡角度探讨电针治疗干眼症的作用机制.方法:雄性新西兰兔随机分为正常组、模型组、电针组和假电针组.采用0.1%苯扎氯铵滴眼制作兔干眼症模型.检测各组兔泪液分泌量、泪膜破裂时间;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定(TUNEL)法检测结膜细胞凋亡情况;应用免疫组化法检测结膜细胞Caspase-3、Fas和Bcl-2蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组兔泪液分泌量降低,泪膜破裂时间缩短(均P<0.01);与模型组、假电针组比较,电针组兔泪液分泌量增多,泪膜破裂时间延长(均P<0.05).与正常组比较,模型组兔结膜细胞凋亡增加(P<0.01),Caspase-3和Fas蛋白表达增加(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01);与模型组、假电针组比较,电针组兔结膜细胞凋亡减少(均P<0.01),Caspase-3和Fas蛋白表达减少(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达增加(均P<0.01).结论:电针能抑制干眼症兔结膜细胞凋亡,下调凋亡相关蛋白Caspase-3和Fas表达,上调Bcl-2蛋白表达,该作用可能是电针治疗干眼症的作用机制之一.

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响及其机理

目的:研究甲基强的松龙(MP)对大鼠横断性脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的影响及其作用机理。方法:60只成年Wistar大鼠随机分成正常对照组、脊髓损伤组和MP治疗组,每组20只,MP治疗组在横断T10脊髓组织后30min经尾静脉给予MP治疗,损伤组和对照组未予任何治疗。MP治疗组和脊髓损伤组大鼠于脊髓损伤后8h、24h、3d和1周取材,采用透射电镜、TUNEL染色观察细胞凋亡情况,采用免疫组织化学染色观察Fas、半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8和caspase-3在SCI前后的变化情况,采用改良Tarlov评分方法观察大鼠后肢运动功能。结果:SCI后24h大鼠后肢运动功能逐渐恢复,MP治疗组大鼠的后肢运动功能恢复优于损伤组,7d后尤其明显。TUNEL染色和电镜检查证实SCI后8h即有凋亡细胞出现,其中既有神经元也有胶质细胞;3d凋亡细胞数达到高峰;7d仍有凋亡细胞存在,但已明显减少;各时间点治疗组凋亡细胞数量明显少于损伤组(P<0.05)。治疗组和损伤组在SCI后8h可以检测到少量的Fas和caspase-8阳性神经元及胶质细胞,Fas和caspase-8的表达在SCI后3d达到高峰,7d表达下降,各时间点治疗组的Fas和caspase-8灰度值明显大于损伤组,二者有显著性差异(P<0.05)。治疗组和损伤组caspase-3的表达在SCI后8h均逐渐增加(与对照组相比),7d达到高峰,治疗组灰度值大于损伤组,但二者无显著性差异。结论:MP能抑制大鼠脊髓横断性脊髓损伤后的神经细胞凋亡,但不能推迟细胞凋亡出现的高峰时间;MP抑制细胞凋亡的途径可能通过非特异性抑制Fas和caspase-8的表达来实现。

Fas/FasL信号途径参与17-羟-岩大戟内酯B诱导U251细胞凋亡

目的 :探讨Fas/Fas L信号转导途径在17-羟-岩大戟内酯B诱导人脑胶质瘤细胞U251细胞凋亡中的作用及机制。方法:以5-氟尿嘧啶(浓度为10μg/ml)为阳性对照。各组样品用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增值抑制率;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞早期凋亡率;分光光度法检测Caspase-3和Caspase-8的相对活性;Western Blot法检测Fas和Fas L的蛋白表达。结果:与空白对照组相比,10μg/ml的17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞的增殖没有显著性改变,但20μg/ml和40μg/ml的17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞的增殖有显著性抑制作用,但40μg/ml的17-羟-岩大戟内酯B对U251细胞的增殖的抑制作用没有进一步改变,故应用20μg/ml 17-羟-岩大戟内酯B做后续试验。与单独应用20μg/ml 17-羟-岩大戟内酯B组相比,经0.1μg/ml、0.5μg/ml或1μg/ml抗Fas单克隆抗体预处理后,再加入20μg/ml17-羟-岩大戟内酯B时,U251细胞增值抑制率明显减弱,并选用0.5μg/ml抗Fas单克隆抗体进行后续实验。单独应用20μg/ml17-羟-岩大戟内酯B,细胞早期凋亡率、Caspase-3及Caspase-8相对活性较空白组明显升高,Fas及Fas L蛋白表达水平明显增强;而经0.5μg/ml抗Fas单克隆抗体预处理后再加入20μg/ml17-羟-岩大戟内酯B,可使细胞早期凋亡率、Caspase-3及Caspase-8的相对活性较单独应用20μg/ml17-羟-岩大戟内酯B明显下降,Fas及Fas L蛋白表达明显减弱。结论:17-羟-岩大戟内酯B可抑制U251细胞增殖和诱导细胞凋亡;Fas/Fas L信号通路介导了17-羟-岩大戟内酯B诱导的凋亡;Fas/Fas L通路活化导致了下游caspase途径的活化。