含PxIxIT模序烟曲霉KpsF基因作用初探

目的构建烟曲霉KpsF基因缺陷株,初步了解KpsF基因在烟曲霉生长及与钙调磷酸酶相互作用关系。方法PCR扩增烟曲霉KpsF基因及其上、下游各约1.0kb的DNA片段,以pyrG为筛选标记,原生质体法构建KpsF基因缺陷株ΔKpsF;观察ΔKpsF一般生长状况;实时荧光定量PCR方法检测Ku80(对照组)和ΔKpsF(实验组)在含有不同浓度CaCl_2的液体GMM培养基中钙调磷酸酶催化亚基(CnaA)相对表达水平。结果烟曲霉ΔKpsF和Ku80径向生长差异无统计学意义(P>0.05);表型未见明显差别;ΔKpsF在10mmol/L CaCl_2GMM液体培养基的CnaA相对表达量显著高于对照组Ku80(P<0.01),而100mmol/L CaCl_2的CnaA相对表达量却没有明显变化(P>0.05)。结论 KpsF基因缺陷对烟曲霉的径向和表型生长没有明显影响,对CnaA表达量的影响与Ca^(2+)浓度有关。在低浓度Ca^(2+)条件下,KpsF可能参与对钙调磷酸酶的负反馈调节作用,而在高浓度的Ca^(2+)条件下,这种负反馈调节作用受到抑制。

具有PxIxIT模序的钙调磷酸酶底物或靶蛋白的研究进展

钙调磷酸酶(CaN)广泛存在于真核生物中并且在进化上相对保守,是临床常用的免疫抑制剂环孢素A(CsA)和他克莫司(FK506)的靶蛋白,它能识别各种底物,并且控制真核细胞中的各种发育和生理功能相关的传导路径。在CaN的多种底物中有类似PxIxIT模序存在,并且该模序内任何一个氨基酸的精细变动可以同各底物相应的生理信号传导相对应。由此可见,PxIxIT模序在真核生物生理功能的正常发挥中有着重要的作用。该文对与CaN相互作用并且具有类似PxIxIT模序的底物与靶蛋白进行了综述。