约氏疟原虫235ku多基因家族的基因克隆和序列分析

目的克隆约氏疟原虫不同虫期235 ku棒状体蛋白(Plasmodium yoelii yoelii235 ku rhoptry proteins,Py235)的基因,并对其进行序列测定和分析。方法根据疟原虫棒状体235 ku蛋白的基因序列,设计引物。用Tri-pure与氯仿等试剂提取不同时相点的约氏疟原虫总RNA,逆转录合成cDNA,用PCR的方法扩增Py235基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入PMD18-T克隆载体,转化XL1-Blue感受态细胞,蓝白筛选白色克隆,进行体外扩增,提取质粒,进行酶切鉴定,对含有目的插入片段的克隆进行序列测定。结果从不同侵入虫期的疟原虫总RNA中成功克隆出292 bpPy235基因片段,测序结果与GeneBank报道序列具有很高的相似性。结论在疟原虫235 ku多基因家族,不同侵入虫期疟原虫Py235基因的mRNA转录与表达具有一定的遗传稳定性,但表型也有变异,从而获得侵入不同宿主细胞的功能。