约氏疟MIF影响小鼠脾CD8^+DC分泌细胞因子

目的研究约氏疟原虫巨噬细胞迁移抑制因子(PyMIF)对宿主小鼠树突状细胞(DC)表型和功能的影响,为阐明PyMIF对寄主免疫反应的作用机理提供理论依据。方法制备及纯化小鼠MIF及PyMIF重组蛋白,磁珠分选法得到小鼠脾DCs两种主要亚群CD8+DC及CD4+DC,在体外培养的情况下,流式细胞仪检测CD8+DC及CD4+DC TLR4、CD40、CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ等细胞表面分子表达,用ELISA方法检测细胞因子IL-12、TGF-β1的分泌。结果 PyMIF未改变脾DCs细胞表面CD40、CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ等分子水平,但可以下调脾DCs表面TLR4水平;此外,在CD8+DC,PyMIF能够拮抗LPS刺激所引起IL-12分泌的上升,由(433±48)pg/mL降至(373±30)pg/mL(P<0.05),并促进未成熟DCs分泌TGF-β1,由(136±4)pg/mL升至(182±7)pg/mL(P<0.05),而对CD4+DC分泌细胞因子并无影响。结论 PyMIF不参与DCs成熟过程,但有助于感染后宿主体内免疫抑制环境的产生,以逃避宿主免疫攻击有利于自身的存活。

重组约氏疟MIF对小鼠BM-DC细胞表型与功能的影响

目的探索约氏疟原虫来源重组巨噬细胞迁移抑制因子(PyMIF)对小鼠骨髓树突状细胞(BM-DC)表型和功能的影响。方法分离小鼠骨髓细胞,并经GM-CSF和IL-4诱导,培养得到BM-DC;经PyMIF刺激后,流式细胞术检测其TLR2、TLR4、CD80、CD86、CD40和MHCⅡ分子表达,ELISA方法检测IL-12和IL-10分泌;经PyMIF刺激的BM-DC与CD4+T或CD8+T细胞共培养,检测T细胞CD69表达和IL-2分泌情况,并检测CD8+T细胞对靶细胞杀伤能力。结果 PyMIF可下调小鼠骨髓来源树突状细胞TLR-4的表达(平均荧光强度标准化后比值由1±0.001下降到0.81±0.02,P<0.05);但不能影响BM-DC细胞表面分子TLR2、CD80、CD86、CD40和MHCⅡ的表达,也不改变BM-DC分泌IL-12及IL-10的功能。与PyMIF刺激的BM-DC共孵育后,CD8+T的CD69表达下降(平均荧光强度标准化后比值由2.6±0.8下降到2.0±0.7,P<0.05),但未改变CD4+T细胞CD69表达I、L-2分泌,及CD8+T细胞IL-2分泌。结论 PyMIF可能是通过下调BM-DC细胞TLR4表达来抑制免疫细胞对疟原虫的识别,使之逃逸机体的攻击而存活。