石韦对小鼠免疫功能及异基因皮片移植排斥的抑制作用

目的研究石韦对小鼠免疫功能和同种异基因皮片移植的影响。方法分别给小鼠灌胃高、中、低3个剂量石韦水煎液,研究其对正常小鼠和由左旋咪唑引起的免疫亢奋模型小鼠脾脏重量指数、巨噬细胞的吞噬活性、淋巴细胞转化、IgM分泌量的影响;观察石韦对小鼠同种异基因皮片移植的影响。结果石韦可抑制正常小鼠巨噬细胞吞噬活性、T淋巴细胞转化率和IgM的分泌量(P<0.05)。3个剂量的石韦均可调节免疫亢奋小鼠脾脏重量指数、巨噬细胞吞噬活性、T淋巴细胞转化率恢复至正常水平,中剂量组可以显著降低IgM的分泌量至正常水平。小鼠移植皮片的存活时间:石韦低剂量组为(16.13±1.13)d,中剂量组为(15.62±1.01)d,高剂量组为(14.89±2.01)d,显著长于对照组的(9.75±0.89)d。结论石韦可抑制正常小鼠的免疫功能,调节免疫亢奋小鼠免疫功能恢复至正常水平,减轻机体对同种异基因皮片移植的排斥反应。

HPLC同时测定石韦中绿原酸、槲皮素和山柰酚含量

目的：建立高效液相色谱法同时分离测定石韦中绿原酸、槲皮素、山柰酚3种有效成分的方法。方法采用Phenomenex C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）；以甲醇-乙酸（pH＝3.0）作为流动相,梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；紫外检测波长：254 nm；柱温：35℃。结果绿原酸、槲皮素、山柰酚分别在0.00024～3.00μg（r＝0.9999）、0.00016～2.00μg（r＝0.9999）、0.00016～2.00μg（r＝0.9999）范围内呈良好的线性关系,最低检测限（S/N＝3）依次为3.29、0.43、0.33 ng/mL,平均回收率分别为97.73%、98.07%、96.92%。结论本方法操作简单、准确、灵敏度高,为石韦中绿原酸、槲皮素、山柰酚的测定及分离提供了依据。

石韦提取物抗氧化及抑制亚硝化作用研究

研究石韦不同溶剂提取物的总酚、总黄酮含量和抗氧化及抑制亚硝化活性,并分析其相关性。采用福林酚比色法和硝酸铝络合分光光度法分别测定各提取物中总酚、总黄酮的含量,以DPPH法、ABTS法和普鲁士蓝法分别测定各提取物的自由基清除能力和铁离子还原力,采用盐酸萘乙二胺法和α-萘胺法分别测定石韦各提取物对亚硝酸盐的清除率和对亚硝胺合成的阻断率,采用Pearson法分析总酚、总黄酮含量与抗氧化及抑制亚硝化活性的相关性。结果表明:石韦不同溶剂提取物的总酚和总黄酮含量存在显著性差异,其中正丁醇提取物的总酚、总黄酮含量均最高,分别为29.85±2.15和37.23±2.41 mg/g。各提取物均具有较强的抗氧化和抑制亚硝化活性,以正丁醇提取物的效果最显著,其DPPH自由基清除能力(IC50=44.14±1.21μg/mL)、ABTS自由基清除能力(IC50=97.47±12.10μg/mL)和还原能力(822.08±24.82μmoL Vc/g),以及对亚硝酸盐的清除能力(IC50=7.071±0.231 mg/mL)、对亚硝胺合成的阻断能力(IC50=15.010±1.224 mg/mL)均最强,并显著强于其他提取物(P<0.05)。相关性研究显示,石韦各提取物的抗氧化活性和抑制亚硝化活性与其总酚和总黄酮含量呈显著正相关(P<0.05),表明总酚类和总黄酮类物质是石韦发挥作用的物质基础。通过对石韦不同提取物的总酚和总黄酮含量的测定、抗氧化和抑制亚硝化作用评价及相关性分析,为石韦的进一步开发利用提供实验数据和参考依据。

石韦化学成分及其生物活性

目的研究石韦Pyrrosia Lingua(Thunb.)Farwell的化学成分及其生物活性。方法石韦85%乙醇提取物采用硅胶柱、D101和Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法、琼脂平板打孔法分别测定其抗肿瘤、抗菌活性。结果从中分离得到7个化合物,分别鉴定为22,28-epoxyhopane(1)、hop-22(29)-en-28-ol(2)、hopan-28,22-olide(3)、cyclolaudenone(4)、4-(3′,4′-dihydroxyphenyl)-butan-2-one-4′-O-β-D-glucoside(5)、2-hydroxy-4-[(3S)-3-hydroxybutyl]phenyl-β-D-glucopyranoside(6)、β-sitosterol(7)。化合物2~3对Hela细胞有微弱抑制作用;化合物1~2对MCF-7细胞有微弱抑制作用;化合物3对HepG 2细胞有微弱抑制作用。结论化合物3~6为首次从该植物中分离得到,化合物1~3有一定的生物活性。

基于网络药理学和分子对接探讨多基源品种石韦抗炎作用机制的异同

目的运用网络药理学和分子对接方法探讨多基源品种石韦抗炎作用机制的异同。方法首先对药物和疾病潜在靶点进行挖掘和筛选,选取药物靶点与疾病靶点的交集基因,根据网络拓扑参数筛选石韦、有柄石韦和庐山石韦有效成分抗炎的核心靶点。然后使用Cytoscape 3.6.1软件构建“成分-靶点-疾病”网络。通过DAVID数据库进行GO富集分析和KEGG通路分析。最后将筛选出的活性成分进行分子对接。结果筛选出石韦、有柄石韦和庐山石韦相同的潜在活性成分有蔗糖、绿莲皂苷元、β谷甾醇和香草醛酸;其相同的核心靶点有PTGS1、PRSS1、SREBF1、NOS3、AR等14个,相同的信号通路有胆碱能突触信号通路、神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路。石韦发挥抗炎作用特有的潜在活性成分为山奈酚-3-阿拉伯呋喃糖苷、高丽槐素、槲皮素,4-o-葡萄糖苷、异热马酮、原儿茶酸、槲皮素,特有的核心靶点为PRKCA、ALOX5、RELA、AHSA1、CYP3A4等24个,以及特有的TNF信号通路、乙型肝炎、细胞凋亡、鞘脂信号通路、NF-κB信号通路等29个。有柄石韦发挥抗炎作用特有的潜在活性成分为植物醇、酞酸二乙酯、十六烷、二氢咖啡酸、癸醛、圣草酚、正十六烷酸、邻苯二甲酸二异丁酯,特有的核心靶点为LPL、NFE2L2、NQO1、GSK3B,以及特有的PPAR信号通路、催乳素信号通路、雌激素信号通路。庐山石韦发挥抗炎作用特有的信号通路为精氨酸生物合成、cGMP-PKG信号通路、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢。分子对接结果表明,活性成分均与关键靶点有较强的结合能力。结论石韦、有柄石韦、庐山石韦多基源品种抗炎的活性成分和作用机制相似性小、差异性较大。提示多基源品种石韦在临床抗炎有各自的特色,要区别对待。