疟疾传播阻断疫苗Pys25重组蛋白免疫活性的实验研究

为探讨约氏疟原虫传播阻断疫苗Pys25重组蛋白的免疫效果及其效应,我们以酵母菌表达的Pys25重组蛋白皮下免疫DBA/2小鼠,采用ELISA检测免疫后不同时间小鼠血清中的特异性抗体水平,并通过IFA观察免疫血清对有性阶段虫体发育的阻断效应。初次免疫后2周,小鼠血清中特异性IgG抗体水平开始升高,并于加强免疫后2周达到峰值;感染血液与免疫血清共同培养后,配子体向合子和动合子的发育明显受阻,并且其传播阻断效应与免疫血清呈剂量依赖性。实验表明,酵母菌表达的Pys25重组蛋白具有良好的免疫原性,其免疫血清可显著抑制有性阶段原虫的进一步发育。

约氏疟原虫Pys25、Pys21抗原的表达及其传播阻断免疫的研究

目的 :观察约氏疟原虫有性发育阶段虫体抗原Pys2 5、Pys2 1的表达及其单克隆抗体的传播阻断效应。方法 :分别用抗Pys2 5和抗Pys2 1单抗 (McAb4和McAb10 )被动免疫感染约氏疟原虫的小鼠 ,通过直接蚊喂养试验 ,观察抗Pys2 5McAb4和抗Pys2 1McAb10对疟原虫在蚊体内发育过程的影响 ;应用间接免疫荧光和Westernblotting试验 ,检测疟原虫有性发育阶段虫体抗原Pys2 5和Pys2 1表达的动态变化。结果 :与抗Pys2 1McAb10比较 ,抗Pys2 5McAb4具有更完全的传播阻断效应。Pys2 5和Pys2 1抗原蛋白存在于从配子体到动合子的整个发育过程中 ,但Pys2 5在合子表面的表达显著早于Pys2 1。结论 :约氏疟原虫Pys2 5和Pys2 1均是传播阻断免疫的靶抗原 ;抗Pys2 5McAb4具有更强的传播阻断活性与Pys2 5在合子表面的早期表达有关。

约氏疟原虫Pys25和Pys48抗原的表达与产物活性初步研究

通过家蚕杆状病毒表面展示技术获得约氏疟原虫有性阶段候选抗原Pys25(217AA)和Pys48(455AA),以期建立一种新的鼠疟模型。首先利用大肠杆菌原核表达系统表达这两种抗原,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,同时利用家蚕杆状病毒表面展示技术,并改造pFastBac Dual载体,在其Ph启动子前端加入哺乳动物启动子CMV,并将目的蛋白基因与杆状病毒囊膜蛋白gp64基因片段融合表达,融合蛋白展示在病毒粒子表面。用其免疫Balb/c小鼠,在小鼠体内,CMV启动子启动融合蛋白表达,共同刺激小鼠产生多克隆抗体。通过间接ELISA检测,两种抗原抗体效价均能达到1∶12 800。本实验为后期免疫阻断效应研究、多时期多价疫苗的构建及鼠疫模型的建立提供了实验基础。