瓜果腐霉Pythium aphanidermatum PAM1菌株中除草活性物质的分离和纯化

为了对瓜果腐霉PAM1菌株中的除草活性物质进行分离纯化和结构分析,本试验通过有机溶剂超声波提取、硅胶柱层析和高效液相色谱相结合的方法对除草活性化合物进行分离,利用质谱、红外光谱和核磁共振等技术对所得到的化合物进行了结构分析。结果表明:从瓜果腐霉PAM1菌株的乙酸乙酯粗提物、甲醇粗提物中分别获得了保留时间为16.37和8.55min的化合物1和化合物2,2个化合物对马唐叶片均表现出较强的除草活性。化合物1的核磁图谱显示其分子中含有不饱和键、羟基和羧基,质谱图提示其分子量为578,推断其可能的分子式为C37H70O4;化合物2可能的分子量为453。瓜果腐霉菌丝提取得到的2个化合物均为长链脂肪酸类化合物。

瓜果腐霉毒素除草活性物质的初步分离

为分离纯化瓜果腐霉毒素中的除草活性物质,本研究利用吸附树脂对瓜果腐霉毒素进行了吸附,利用薄层层析对其粗毒素样品进行了初分离,在展开剂乙酸乙酯-甲醇-石油醚-乙酸为30∶5∶25∶1时,可以分离出5个条带,生物测定结果表明,其中M1和M2条带的除草活性较强。对M1进行了HPLC分析,结果表明,该样品可分离出2种除草活性组分,其保留时间分别为9.89 min和14.98 min,其中保留时间为14.98 min的组分与已报道的邻苯二甲酸二甲酯相同。

瓜果腐霉的液体发酵工艺及代谢产物活性测定

本试验对具有除草活性的瓜果腐霉PA1-M1菌株进行了液体发酵工艺探讨,并对其发酵产物进行了除草活性和抑菌活性测定。结果表明:PA1-M1菌株以振荡方式、中酸性发酵为适宜,其培养滤液粗提物和菌丝粗提物对马唐根和芽的IC50分别为0.36 mg/mL、0.46 mg/mL和7.36 mg/mL、4.09 mg/mL。此外,培养滤液粗提物对小麦赤霉病菌表现出了一定程度的抑菌活性。

树脂吸附法分离瓜果腐霉毒素中的除草活性物质

本试验以对禾本科杂草具有除草活性的瓜果腐霉菌株PAM1为试验材料,研究了X-5、AB-8、H-103和S-8等4种大孔吸附树脂对其除草活性物质的吸附性能,结果表明X-5树脂能够较好地吸附该除草活性物质。选用50%乙醇、95%乙醇、乙酸乙酯和丙酮4种溶剂为供试洗脱溶剂,采用2种洗脱方案,对其最佳洗脱溶剂进行了选择,生长抑制作用和种子萌发试验结果表明,以方案1洗脱为最佳。

瓜果腐霉菌丝中除草活性物质的初步研究

将瓜果腐霉进行液体发酵,其菌丝用等体积乙酸乙酯和甲醇进行依次萃取,甲醇萃取液旋转蒸发去溶剂后进行硅胶柱层析,以乙酸乙酯和石油醚(V/V=3:1和V/V=2:1)的混合液进行梯度洗脱,每50 mL收集为一个馏分,共收集到40个馏分。生物测定结果表明,以乙酸乙酯和石油醚(V/V=2:1)洗脱得到的馏分21 24对供试杂草马唐表现出了较强的活性,其对马唐的生长抑制作用均为4级。合并馏分21 24,以乙酸乙酯和石油醚(V/V=2:1)的混合液为展开剂进行等度洗脱,每50 mL收集为一个馏分,共收集到20个馏分。生物测定结果表明,馏分3对马唐有较强的抑制活性。HPLC分析发现,该馏分主要含有3个组分,其保留时间分别为12.7、14.0和30.5 min。