基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术结合化学计量学方法的不同干燥处理杜仲叶成分分析

采用基于液质联用的非靶向代谢组学技术结合化学计量学数据自动解析软件AntDAS-LCHRMS分析了4种不同干燥处理(冻干、热泵烘干、电热烘干、晒干)杜仲叶样本中的化合物。杜仲叶样本数据由超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)分别在正、负离子模式下进行采集,经AntDAS-LCHRMS软件解析,共鉴定出71种差异性化合物,经标准品验证确定40种化合物,包括环烯醚萜类、有机酸类、黄酮类、氨基酸类、核苷类、维生素类等9类物质。其中,正、负离子模式下均可识别并验证的化合物有车叶草苷、绿原酸、芦丁、异槲皮苷、车叶草苷酸、京尼平苷等25种化合物。层次聚类分析(HCA)及主成分分析(PCA)结果均显示,相同处理的杜仲叶样本各自聚成一类,不同处理的杜仲叶样本可明显区分。热图分析进一步揭示了不同干燥处理杜仲叶样本中差异性化合物的含量变化。晒干处理样本中苯丙氨酸及色氨酸等氨基酸类物质的水平较高;冻干及热泵烘干处理样本中有机酸类、环烯醚萜类、糖类等含量较高;电热烘干样本中核苷类、黄酮类物质的含量较高;黄酮类物质在冻干、热泵烘干及晒干样本中差异较小。研究结果为不同干燥处理杜仲叶的成分分析、品质评价及其开发应用提供了科学依据,也可为其他复杂药用植物体系的化学成分分析提供参考。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的芪龙壮儿口服液指纹图谱研究

目的:建立芪龙壮儿口服液UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS正、负离子两种检测模式下的指纹图谱,为该制剂的质量控制提供参考和依据。方法:采用Thermo Accucore aQ RP18(2.1 mm×150 mm,2.6μm)色谱柱进行色谱分离,加热电喷雾离子源正、负离子同时检测。根据一级准分子离子精确质荷比、二级质谱碎片离子信息、文献报道和对照品比对鉴定共有峰成分。结果:构建了芪龙壮儿口服液正、负离子模式下的指纹图谱共有模式并分别确认了24(正离子模式)和17(负离子模式)个共有指纹峰。10批芪龙壮儿口服液指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别大于0.986(正离子模式)和0.968(负离子模式)。在正离子模式下鉴定了15个共有峰,其中9个共有峰采用对照品确认;负离子模式下鉴定了12个共有峰,其中9个共有峰采用对照品确认。结论:所建立的芪龙壮儿口服液正、负离子两种模式下的指纹图谱,结合共有峰的高分辨质谱定性分析,从正、负两个维度较为全面地表征了该制剂的化学成分指纹特征,为芪龙壮儿口服液的质量评价提供了依据和方法。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的静宁方入脑、入肠及粪便成分分析

目的基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对静宁方给药后的大鼠入脑、入肠及粪便中的成分进行分析和鉴定。方法采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS,以0.1%甲酸-乙腈(A)和0.1%甲酸-水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1),进样量5μL,加热电喷雾离子化源(HESI),正、负离子扫描。结合对照品比对、文献报道、数据库比对等方式对成分进行分析鉴定。结果共鉴定出42种成分,其中脑、回肠、结肠、粪便中分别鉴定出9、33、20、27种成分。结论本实验初步阐明静宁方入脑、入肠及粪便成分,为阐明其药效物质基础及作用机制提供了依据。

参仙升脉口服液化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS快速分析

目的探究参仙升脉口服液的化学物质基础。方法利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)对参仙升脉口服液的化学成分进行整体、系统辨识。采用Thermo Accucore aQ C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)梯度洗脱,洗脱程序为0-13 min,5%-60%B;13-27 min,60%-95%B;27-30 min,95%B,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30°C;质谱分析离子化方式为加热电喷雾离子化(H-ESI),扫描模式为正、负离子切换,扫描范围m/z 120-1800,碰撞能量30 eV、50 eV、70 eV。结果共鉴定出160个化学成分,包括29个黄酮类成分,24个有机酸类成分,21个生物碱类成分,19个萜类成分,15个苯丙素类成分,12个皂苷类成分和40个其他类成分;其中6个化学成分(芦丁、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚)经对照品比对确认。结论该研究借助UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术实现了参仙升脉口服液化学成分准确、快速、系统的分析和鉴定,为其化学物质基础的阐明和质量控制提供了重要依据。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS雀嘴茶醇提液的成分及活性研究

基于超高效液相色谱串联四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速分析雀嘴茶醇提液的成分,对其体外抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性进行研究。结果表明:从雀嘴茶醇提液中鉴定出1 321个代谢物,其中有1 085个代谢物包括11个超类匹配到人类代谢数据库中,含量较高的活性代谢物,包括新甘草苷、扁蓄苷、醋硝香豆素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷桂皮鞣质B1等苯丙素类和芳香聚酮类、咖啡因等有机杂环化合物类、阿糖腺苷等核苷酸及其衍生物以及1-咖啡酰-β-D-葡萄糖、3-O-阿魏酰奎尼酸、绿原酸、2-O-咖啡酰熊果苷等咖啡酰类。雀嘴茶醇提液的DPPH·清除率可达93.56%,ABTS^(+)·清除率可达99.04%,OH·清除率可达94.82%,总还原能力随着醇提液中总多酚浓度的增加而升高且效果极为接近阳性对照抗坏血酸;对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制率分别可达81.50%和58.58%。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的退黄合剂化学成分快速表征

目的建立一种高效快速的超高效液相色谱串联四极杆轨道阱质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)法,对退黄合剂的化学成分进行表征。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为2μL,柱温为40°C。质谱采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式,质谱扫描范围为m/z 100~1500。结果通过对照品、数据库及参考文献共鉴定出退黄合剂中77种化学成分,其中包括黄酮类30种、多酚类18种、有机酸10种、萜类9种、蒽醌类9种、其他类1种。结论所建立的方法可高效、快速地鉴定退黄合剂的化学成分。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的复方一枝蒿颗粒化学成分快速鉴定

目的:采用超高效液相色谱-四极杆-静电轨道场离子阱质谱法对复方一枝蒿颗粒的化学成分进行分析。方法:采用Thermo Scientific Syncronis C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(–1),柱温为45℃,进样量为2μL。在正负离子模式下采集复方一枝蒿颗粒的质谱数据,根据高分辨质谱提供的精确相对分子质量和碎片离子信息,结合对照品比对和相关文献报道对复方一枝蒿颗粒的化学成分进行分析。结果:共分析鉴定出90个化合物,包括2个氨基酸类、8个萜类、25个有机酸类、11个含氮类、44个黄酮类成分。其中,16个成分通过与对照品比对确认。结论:分析鉴定了复方一枝蒿颗粒的化学成分,为其质量控制及药效物质基础研究提供了依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS的三种基原溪黄草及其干预小鼠肝纤维化的血清化学研究

目的应用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术研究三种基原溪黄草及其在肝纤维化小鼠口服给药后的血清化学成分。方法采用Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm);流动相为0.1%甲酸水(A)-甲醇(B),梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30℃。通过结合高分辨质谱数据及质谱裂解规律,对三种基原溪黄草药材样本及其给药小鼠血清的化学成分进行表征。结果在三种基原溪黄草药材中鉴定出40个化合物,主要包括二萜类、黄酮类、酚酸类化合物。在小鼠血清中鉴定出2个入血成分以及2个可能的代谢产物。结论本研究初步鉴定了三种基原溪黄草在四氯化碳致肝纤维化小鼠中的入血成分及部分代谢产物,为其用于治疗肝纤维化的药效物质基础提供了理论参考。

基于UHPLC-Q Exactive HRMS的轮状病毒肠炎湿热证患儿粪便代谢组学特征研究

目的从代谢组学角度探讨轮状病毒肠炎湿热证患儿的粪便代谢组学特征。方法收集20例轮状病毒肠炎湿热证患儿(RV湿热证组)和20例健康儿童(健康组)的粪便样本,采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive HRMS)技术采集粪便代谢指纹谱,结合正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)的模式识别方法进行数据分析,寻找差异性内源性代谢物。结果OPLS-DA模式识别可有效区分RV湿热证组与健康组,且模型可靠性高。筛选并鉴定出11种差异性代谢物,涉及咖啡因代谢、烟酸盐和烟酰胺代谢、卟啉和叶绿素代谢、不饱和脂肪酸代谢、花生四烯酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、嘧啶代谢、色氨酸代谢,以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等9条代谢通路。结论轮状病毒肠炎湿热证患儿与健康儿童间存在差异性代谢产物,这些代谢化合物的异常表达可能是轮状病毒肠炎湿热证的重要发病机制,也是潜在的干预靶点。

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定北沙参中12个成分的含量

目的:建立UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定北沙参中12个成分的含量。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T_(3)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速为0.4 mL/min;柱温为40℃;质谱采用电喷雾离子源,一级正负离子全扫描模式。对北沙参中补骨脂素、佛手柑内酯、花椒毒素、欧前胡素、异欧前胡素、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C、咖啡酸、水杨酸和阿魏酸进行含量测定。结果:上述12个成分在各自的浓度范围内线性关系良好;精密度、重复性及稳定性试验RSD均良好,平均加样回收率为86.89%~114.13%,RSD为1.02%~2.63%。16批样品中成分的含量差异较大。结论:该方法可用于快速、准确测定北沙参中12个成分的含量,可为北沙参质量评价提供参考。

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定大黄-桃仁药对中16种成分及其溶出规律探究

目的建立UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法同时测定大黄-桃仁药对中16种成分的含量,并探讨不同配比药对中其溶出规律。方法分析采用BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源,一级负离子全扫模式。测定单煎液、大黄-桃仁药对不同配比合煎液中,以及单药组、药对组温浸不同时间16种成分的含量。结果16种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9994),加样回收率95.39%~104.90%,RSD≤4.14%,单煎液和不同配比大黄桃仁药对煎液中16种成分的溶出量差异明显。大黄总蒽醌苷类和桃仁氰苷类成分的含量随着大黄占比减少具有先增加后降低的趋势。在温浸试验中,除没食子酸、番泻苷B、番泻苷A、大黄素外,其他12种成分含量在单药组与药对组的组间差异显著。结论该方法可用于快速、准确测定大黄-桃仁药对中16种成分的含量。大黄-桃仁药对中的糖苷及相对应苷元含量受到大黄占比的影响。

UHPLC-Q Exactive高分辨质谱联用法分析淫羊藿中的化学成分

目的采用UHPLC-Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术鉴定分析淫羊藿药材成分。方法采用Thermo Hypersil GLOD C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,体积分数0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为40℃,电喷雾正、负离子模式扫描。结果共分析和鉴定出79个化合物,包括黄酮类、生物碱类、有机酸类和木脂素类化合物,其中16个化合物经与对照品比对鉴定。鉴定的黄酮类包括46个异戊烯基黄酮醇类化合物,异戊烯基黄酮醇类负离子模式二级特征碎片为m/z 367、351、513、353和323。初步鉴定化合物41、54、76、65和69为新的异戊烯基黄酮。结论淫羊藿中异戊烯基黄酮醇类多具有淫羊藿素或8-异戊烯基山奈酚苷元母核结构,该结果为淫羊藿成分的系统分析提供了数据支持。

UHPLC⁃Q⁃Orbitrap⁃HRMS法分析舒眠胶囊化学成分

目的采用UHPLC-Q-Orbitrap-HRMS法分析舒眠胶囊化学成分。方法该药物提取物的分析采用Waters Acquity UPLC BEH C 18色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱;在正负离子模式下采集数据,结合对照品、文献、数据库进行鉴定。结果共鉴定出69种成分,包括有机酸、黄酮、皂苷、单萜、核苷、生物碱等,其中18种经对照品比对,并明确各成分药材来源归属。结论该方法可准确高效地鉴定舒眠胶囊中化学成分,为该制剂的药效物质基础及质量控制研究提供基础。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的白术内酯I在大鼠体内代谢产物的鉴定及代谢途径分析

目的采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)鉴定白术内酯I在大鼠体内的代谢产物,并探讨其可能的代谢途径。方法SD大鼠单次灌胃给予白术内酯I后,收集大鼠血浆、尿液、粪便样品。以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱。在电喷雾电离源(ESI源)正、负离子模式下分析大鼠生物样本。根据质谱提供的准分子离子峰、碎片离子及准确相对分子质量,鉴定白术内酯I体内代谢产物。结果共鉴定出大鼠体内代谢产物30个,其中血浆样品中5个,尿液样品中17个,粪便样品中16个。氧化、水合、脱饱和、硫酸化、葡萄糖醛酸化、甘氨酸结合、半胱氨酸结合等是白术内酯I体内主要的代谢途径。结论首次阐明了白术内酯I在大鼠体内的代谢产物及代谢途径,为其进一步的药效学评价和开发利用提供参考,此外也为单体药物代谢产物鉴定提供了一种综合研究方法。

基于UHPLC-Q-Orbitrap-HRMS技术的司卡摩尼亚脂化学成分分析

采用UHPLC-Q-Orbitrap-HRMS技术建立司卡摩尼亚脂中化学成分的快速分析方法。采用Full MS/dd-MS扫描模式采集质谱数据,根据获得的精确分子量、二级碎片信息,归纳总结裂解途径,结合文献报道和Compound Discover数据库预测,从司卡摩尼亚脂甲醇提取物中共鉴定出92个化合物,包括72个醚溶性树脂糖苷和树脂酸类成分、12个羟基肉桂酰基奎宁酸类和8个醚不溶性树脂酸类。其中,8个醚不溶性树脂酸类(化合物10、12、13、16、17、18、19、20)和2个三聚体奎宁酸类(化合物14、15)为本药材中首次发现的化合物。研究结果为今后司卡摩尼亚脂药材及其产品质量标准的建立提供科学依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS和网络药理学探讨益气祛风方治疗糖尿病肾病作用机制

[目的]借助超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱仪(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)技术结合网络药理学和分子对接技术,分析益气祛风方防治糖尿病肾病(DN)的物质基础和作用机制。[方法]采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS鉴定益气祛风方的主要化学成分,采用网络药理学方法构建“主要成分-核心靶点-信号通路”网络,进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,对主要活性成分与核心靶点进行分子对接。[结果]从益气祛风方共鉴定出115个化学成分,获得40个核心靶点,主要涉及磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、脂质及动脉硬化、糖基化终产物及受体(AGE-RAGE)信号通路、趋化因子信号通路及低氧诱导因子(HIF)1信号通路等。分子对接结果表明生松素、荠苧黄酮、槲皮素、N-乙酰多巴胺二聚体-1、N-乙酰多巴胺二聚体-2等成分与部分核心靶点有较好的结合活性。[结论]本研究初步鉴定了益气祛风方治疗DN潜在的有效成分并预测了其作用靶点,为进一步研究中医“从风论治”法和益气祛风方治疗糖尿病肾病的作用机制提供了新的思路。

UHPLC-Q-Orbitrap-HRMS法分析补肾降浊颗粒的化学成分

采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱对复方中药制剂补肾降浊颗粒中的化学成分进行定性分析。样品采用WATERS ACQUITY UPLC BEH C18柱(1.7μm,2.1mm×50 mm)进行分离,以乙腈和0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,电喷雾质谱检测,正、负离子模式下采集数据,通过化合物的精确相对分子质量、质谱裂解规律以及文献报道的质谱数据进行对比分析,共鉴定出173个化合物,包括萜类45个,有机酸类36个,黄酮类26个,糖和苷类21个,酚类18个,苯丙素类10个,生物碱3个,其他类14个。所建立的方法首次对补肾降浊颗粒的化学成分进行快速表征,结果准确,可为进一步的药效物质基础和质量控制提供依据。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的桃核承气汤化学成分快速鉴定

目的通过UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术联合分子网络方法快速鉴定桃核承气汤的化学成分。方法采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采集正负离子模式下高分辨质谱数据,并根据MS/MS碎片模式相似性创建分子网络。依据保留时间、高分辨精确分子量、MS/MS碎片等信息,结合对照品数据鉴定桃核承气汤全方化学成分。结果桃核承气汤中共鉴定出83种化学成分,黄酮类23种,有机酸类12种,蒽醌类10种,皂苷类10种,苯丙素类8种,生物碱类7种,氨基酸类4种,其他9种。其中,穿心莲内酯、大豆苷元、淫羊藿素、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷4种成分为桃核承气汤复方中首次发现的化合物。结论桃核承气汤成分多样,主要含有黄酮类、蒽醌类、皂苷类、有机酸类等成分,该研究可为桃核承气汤成分分析、质量控制、临床应用等提供参考。

UHPLC-Q-Exactive-MS/MS结合网络药理学分析泻肺利水汤的化学成分及治疗心力衰竭的作用机制

目的通过UHPLC-Q-Exactive-MS/MS结合网络药理学和分子对接方法探讨泻肺利水汤治疗心力衰竭的主要活性成分、靶点及作用机制。方法利用UHPLC-Q-Exactive-MS/MS快速鉴定泻肺利水汤水提物的化学成分,SwissADME筛选可能具有活性的成分,SwissTargetPrediction数据库预测成分潜在的作用靶点,GeneCards、OMIM、DrugBank、TTD等数据库筛选心力衰竭疾病相关靶点。将药物靶点与疾病靶点取交集,构建“药物-活性成分-靶点”调控图,构建蛋白互作网络,筛选出核心基因,利用R语言对核心作用靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析,最后利用分子对接技术进行初步验证。结果共鉴定化合物82个,黄酮类37个,酚酸类10个,香豆素类7个,生物碱类5个,皂苷类5个,其他类18个;网络药理学研究筛选出活性成分37个,药物-疾病共同靶点135个;PPI及网络分析显示TNF、AKT1、EGFR、VEGFA、ESR1等5个靶点为主要作用靶点,PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、癌症中的蛋白聚糖、Rap1信号通路为主要信号通路。分子对接结果表明,主要活性成分及核心靶点之间具有良好的亲和力。结论本研究初步揭示了泻肺利水汤是通过多成分、多靶点、多通路的机制治疗心力衰竭,为其进一步开发利用及临床应用提供了生物学信息基础。

基于UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术结合分子网络快速筛查3种蓟属药用植物化学成分

目的基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术快速筛查大蓟、小蓟、杭蓟化学成分。方法采用Waters Acquity UPLC BEH-C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱。在Parallel Reaction Monitoring(PRM)模式下采集大蓟、小蓟、杭蓟醇提物质谱数据。根据保留时间信息、高分辨质谱分子离子质量和MS/MS多级碎片信息鉴定3种蓟属药用植物中的化学成分;最后基于各成分MS/MS碎片的相似度值而创建GNPS分子网络,利用软件Cytoscape 3.6.1可视化结构相似的分子簇。结果在此模式下快速筛查到3种植物71种化合物。其中包括22种有机酸类化合物、24种黄酮类化合物、3种醌类化合物、5种三萜类化合物、3种挥发油类化合物及14种其他类化合物。结论采用UHPLC-Q-Exactive-Plus-Orbitrap-MS技术为蓟属药用植物的定性分析和质量控制提供了一种快速、灵敏、准确的方法,为今后进一步阐明其药效、质量标准及资源开发利用提供了科学依据。