Qβ噬菌体A_2基因的克隆与生物活性分析

目的通过基因重组技术构建Qβ噬菌体A2基因表达载体,并对其生理学活性进行分析。方法采用PCR技术从Qβ基因组中扩增A2基因,克隆到pBAD表达载体中构建pBADA2重组质粒;对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析;转化宿主细胞JM109,SDS-PAGE检测Arabinose诱导后A2蛋白的表达;光电比浊法测定大肠杆菌生长曲线鉴定pBADA2在不同宿主细胞中的溶菌性。结果经菌落PCR筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pBADA2构建成功,并在JM109中获得高表达,其表达水平随Arabinose的浓度增加而增高,Arabinose在0.2%时达到高峰。OD660显示pBADA2具有溶菌性,可快速溶解大肠杆菌JM109、HB101和594,而对BE110没有溶解活性。结论构建成功高效表达A2蛋白的重组载体pBADA2,表达的蛋白具有良好的溶菌性,为新型抗菌药物开发奠定了理论和实践基础。

Qβ噬菌体RNA复制酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

构建了带有Qβ噬菌体RNA复制酶cDNA基因的重组表达质粒 pKK -Rep ,采用电泳分析的方法考察了不同浓度的IPTG、不同的葡萄糖浓度对 pKK -Rep在E .coliJM 10 9中表达RNA复制酶蛋白的影响。结果表明 ,0 .0 1mmol/LIPTG可以有效诱导 pKK -Rep表达RNA复制酶蛋白 ,但表达的RNA复制酶蛋白大多数为不溶性蛋白。在培养基中添加 0 .0 2 %的葡萄糖对该RNA复制酶蛋白的组成型表达无明显影响 ,但当葡萄糖浓度增加至 0 .0 4 %～ 1.0 %时 ,这种组成型表达量显著降低。采用MDV -poly(+ )RNA作为模板来体外检测可溶性表达蛋白的活性 ,结果表明其具有体外特异扩增RNA模板的活性。

Qβ噬菌体A_2基因的克隆与生物活性分析

[目的]通过基因重组技术构建Qβ噬菌体A2基因表达载体,并对其生理学活性进行分析。[方法]采用PCR技术从Qβ基因组中扩增A2基因,克隆到pBAD表达载体中构建pBADA2重组质粒;对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析;转化宿主细胞JM109,SDS-PAGE检测Arabinose诱导后A2蛋白的表达;光电比浊法测定大肠杆菌生长曲线鉴定pBAD A2在不同宿主细胞中的溶菌性。[结果]经菌落PCR筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pBAD A2构建成功,并在JM109中获得高表达,其表达水平随Arabinose的浓度增加而增高,Arabinose在0.2%时达到高峰。OD660显示pBAD A2具有溶菌性,可快速溶解大肠杆菌JM109、HB101和594,而对BE110没有溶解活性。[结论]构建成功高效表达A2蛋白的重组载体pBADA2,表达的蛋白具有良好的溶菌性,为新型抗菌药物开发奠定了理论和实践基础。