Q型人血清对氧磷酶在杆状病毒感染的昆虫细胞中的表达

目的 研究对氧磷酶与心血管疾病的关系。方法 采用BAC TO BAC杆状病毒系统表达Q型人血清对氧磷酶 (PON 1) ,在已获得人PON 1全长cDNA的基础上 ,通过PCR扩增 ,得到上游含EcoRⅠ酶切位点 ,下游不含终止密码子而含HindⅢ酶切位点的PON 1基因 ,将其克隆到带有 6×His·Tag的pFASTBACⅡCD14质粒中 ,构建杆状病毒转移载体pFASTBACⅡ PON 1。将含有PON 1基因的重组质粒pFASTBACⅡ PON 1转化DH10BAC感受态细胞 ,使目的基因通过同源重组插入BacmidDNA中。PCR鉴定正确后再转染入sf9昆虫细胞中 ,产生有感染力的重组杆状病毒。用乙酸苯酯为底物测定表达上清液中的酶活性。结果 比较不同感染复数(MOI)和不同感染时间PON 1在培养上清液中的表达情况 ,确定感染复数MOI为 6～ 8,感染时间 96～10 8h为PON 1的最佳表达条件 ,产率约为 4 .5mg·L- 1上清液。免疫印迹法表明重组蛋白有与抗 6×His单克隆抗体结合的抗原性。顺磁共振实验证明 ,基因工程产人重组血清对氧磷酶rhPON 1能有效清除Fe2 +诱导亚油酸脂质过氧化产生的脂质自由基 ,清除率为 5 5 .9%。结论 BAC TO