宏基因组二代测序技术辅助诊断中枢神经系统贝氏柯克斯体感染性血管炎1例

Q热是由贝氏柯克斯体感染引起的人畜共患病,临床表现多样且无特异性,贝氏柯克斯体颅内感染罕见,经常被误诊和漏诊,导致部分患者预后不佳。此文报告1例宏基因组二代测序(mNGS)技术辅助诊断的中枢神经系统贝氏柯克斯体颅内感染性血管炎病例,提示mNGS技术在Q热快速诊断中起到重要作用,通过早期诊断,精准治疗,明显改善患者预后。在此基础上回顾国内外相关文献,总结贝氏柯克斯体颅内感染的临床表现和诊治经验,供国内外同行参考。

6例急性Q热的临床特征分析

目的分析急性Q热的流行病学、临床特征和诊治方法,以期为该病诊治提供参考。方法收集2022年5月至2023年8月南通市第三人民医院确诊的6例急性Q热患者的流行病学史、既往病史、临床表现、实验室检查、宏基因组学二代测序(metagenomic next-generation sequencing,mNGS)结果、影像学表现及诊治过程等资料,对其进行回顾性分析。结果6例急性Q热患者均为男性,年龄为45~59岁。4例患者发病前有多次野外钓鱼史,1例发病前有掏鸟窝史,1例居住地周围有羊群。发病时间呈全年散发。所有患者临床表现均有高热,热型以弛张热为主(5例),其他主要伴随症状有乏力(6例)、畏寒(5例)、肌肉酸痛(5例)、纳差(4例)。实验室检查中2例患者外周血白细胞计数减少,3例患者血小板计数减少;所有患者谷丙转氨酶、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶均升高,4例患者肌酸激酶升高;所有患者C反应蛋白、降钙素原、铁蛋白、D-二聚体均明显升高;3例患者红细胞沉降率轻度升高。6例患者均行胸部CT检查,未见肺炎;5例患者行心脏超声检查,未见心内膜炎。6例患者的血液或骨髓标本均通过m NGS检出贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb),确诊为急性Q热后,给予多西环素单药(2例)或多西环素联合莫西沙星(4例)治疗,所有患者好转出院。结论急性Q热的临床表现、影像学及实验室检测缺乏特异性,部分患者缺乏明确的流行病学史,对可疑患者行mNGS可以快速明确诊断,多西环素、莫西沙星治疗效果明显。

1例贝纳柯克斯体椎体骨髓炎患者的药学监护

目的通过对1例贝纳柯克斯体椎体骨髓炎患者的病例介绍,探讨临床药师开展特殊感染患者的药学监护的切入点及在罕见病原体导致感染患者治疗过程的作用。方法分析临床药师参与1例由贝纳柯克斯体引起腰椎感染患者的治疗过程,协助医生分析患者病史及病原学特点,提出敏感药物治疗方案,并对其持续进行药学监护,协助医生评估治疗效果,并持续调整药物治疗方案。结果及结论临床药师协助医生制定治疗方案,以特殊病原菌引起罕见部位感染为切入点,对患者开展药学监护,保障患者病情稳定好转。临床药师参与治疗团队可有效保障患者用药安全。

一例主动脉瓣感染性心内膜炎致瓣膜赘生物患者的综合诊治

1例36岁青年男性因胸闷、气促10余天入院,超声心动图提示主动脉瓣重度关闭不全、主动脉瓣赘生物、二尖瓣重度关闭不全、左房左室增大。经多学科会诊讨论,以患者主动脉瓣赘生物为切入点,将患者瓣膜病病因聚焦在血培养阴性的感染性心内膜炎(IE)和非细菌性血栓性心内膜炎,并与风湿性心脏瓣膜病相鉴别。最终经外科主动脉瓣置换术取赘生物行组织病理学、生物培养及病原微生物高通量宏基因组二代测序,最终确诊为贝纳特柯克斯体导致的主动脉瓣感染性心内膜炎(Q热IE)。

1例肾移植术后Q热血流感染伴肾周脓肿患者抗感染方案分析

本文报道1例肾移植术后Q热血流感染伴肾周脓肿的病例。结合患者病史特点,临床药师建议多西环素联合亚胺培南西司他汀抗感染治疗。在治疗过程中,临床药师加强对抗菌药物相关不良反应、药物之间相互作用及患者自身肾功能不全等方面的药学监护,患者体温、炎症指标等均好转,且未出现明显的不良反应。

微滴式数字PCR定量检测伯氏考克斯氏体方法的建立及应用

为建立伯氏考克斯氏体(Coxiella burnetii,Cb)微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR, ddPCR)检测方法,研究以Cb IS1111基因为靶基因,并针对基因保守区域设计了特异性引物和探针,以使反应的条件更加完善,从而构建了ddPCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性及重复性作出了评估。结果显示,所采用的ddPCR方法最低可检测的浓度为0.52 copies/μL,敏感性较高;与动物布鲁氏菌、牛结核分枝杆菌、土拉杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌无交叉反应,特异性强;组内重复和组间重复变异系数均小于10%,重复性好。使用本实验建立的方法检测了42份疑似感染的临床样品,检测结果与荧光PCR鉴定结果一致。表明建立的ddPCR方法的特异性强、敏感性高、重复性和准确性好,可用于Cb的快速检测和精准定量,对Cb感染的防控具有重要意义。

贝氏柯克斯体耐受渗透脱水研究模型的建立

目的基于无生命培养体系,探索建立贝氏柯克斯体耐受脱水的实验室研究模型。方法梯度调整贝氏柯克斯体无生命培养体系中的渗透压条件,利用qPCR定量测定不同渗透压下贝氏柯克斯体在培养周期内基因组拷贝数变化并描记生长曲线,进一步利用相差显微镜、透射电子显微镜对真核细胞以及无细胞培养方法所得贝氏柯克斯体进行形态学分析,并感染BGMK细胞测定不同渗透压培养所得贝氏柯克斯体的感染性VFU。结果贝氏柯克斯体可在高渗透压条件的无生命培养基中适应性生存7 d以上,经高渗透压培养后的菌体脱水收缩且大小类似于小贝氏体,同时感染后24 h的VFU较对照组降低。结论成功建立了贝氏柯克斯体耐受高渗压脱水的研究模型,为下一步用蛋白质组学等方法研究贝氏柯克斯体在自然环境中耐受干燥脱水的遗传学机制奠定了基础。

Q热动物模型研究概况

Q热是由贝氏柯克斯体感染所致的一种人兽共患病,在自然界中广泛传播。动物模型是研究传染病的病原学、发病机制以及评价疫苗有效性的重要工具。近年来,无脊椎动物、啮齿动物和非人灵长类动物等多种动物模型已被用于Q热的相关研究。本文对Q热不同动物模型的研究现状进行了综述,讨论了不同模型的优缺点,总结了未来建模工作的需求和标准。

内蒙古规模化羊场羊流产病原与抗体的检测分析

为了诊断引起内蒙古羊场怀孕母羊流产的病原因素,通过对流产母羊血清、流产胎儿和胎衣等样本进行抗体检测、病理剖检、PCR扩增、核苷酸序列比对、同源性分析和构建系统进化树等方法进行检测分析。结果布鲁氏菌检出率最高(34.28%),流产衣原体次之(28.57%),伯氏柯克氏体与布鲁氏菌的混合感染和3种病原体的混合感染检出率最低(2.86%)。说明检测羊场中均存在流产衣原体、伯氏柯克氏体和布鲁氏菌单独感染或混合感染的情况,且3种病原体保守性较高,为检测羊场及周边其他羊场疫病防控提供了科学依据。

贝氏柯克斯体感染致心内膜炎1例

贝氏柯克斯体是导致Q热的病原体。Q热是一种人畜共患病,在我国报道较少。Q热临床表现多样,最严重的表现为血培养阴性的心内膜炎,如果未能及时识别并适当地抗菌治疗,会延误患者病程,严重者甚至死亡。本文介绍1例心内膜炎病例,患者血培养阴性,应用基因测序而诊断。本文报告该病例流行病学、临床表现、诊断和治疗过程。

基于贝氏柯克斯体急性期抗原A的间接ELISA方法建立及应用

为开发快速有效的Q热血清学诊断技术,以贝氏柯克斯体急性期抗原A(acute disease antigen A,AdaA)为诊断靶标分子,构建了基于该重组抗原的间接ELISA方法,完成了来自福建某牛场的200份临床牛血清样本检测,并对检测结果进行了评估。结果表明:以商品化ELISA试剂盒ID Screen■Q热为金标准,建立的间接ELISA检测特异性为94.4%(152/161),检测敏感性为84.6%(33/39),与感染牛的常见病原体如衣原体、布氏杆菌、副结核杆菌无交叉。应用该诊断方法检测发现,福建某牛场约有21%(42/200)的牛为Q热阳性。该结果证实,基于AdaA的间接ELISA方法具有较高的特异性及敏感性,有良好的应用价值,可以用于牛Q热的血清学监测。

多西环素治疗急性Q热失败1例

Q热是由伯氏考克斯氏体引起的一种世界范围内高致病性的人畜共患疾病。Q热临床表现不典型,常规实验室及影像学检查缺乏特异性,多数患者症状轻微且可自愈。Q热不是我国法定传染病,国内缺乏相关的诊治指南,是一种长期以来被忽视和诊断不足的疾病。本文报告1例病例,通过血液宏基因组二代测序(mNGS)诊断为急性Q热,经14 d多西环素治疗发热不退,后经米诺环素治疗3 d病情好转,旨在提高临床医生对急性Q热的认识,缩短疾病诊治时间。

外周血宏基因组二代测序辅助诊断Q热血流感染1例

Q热血流感染是由贝纳柯克斯体引起的感染,临床病例罕见,临床表现缺乏特异性,传统检测方法不易获得其病原学证据,误诊率极高,严重时可引起患者全身多个脏器受累,危及生命,早期诊断与精准治疗仍是临床面临的巨大挑战。宏基因二代测序技术在少见、罕见病原体感染诊断方面展现出了巨大潜力,使Q热病原菌检出率不断提高。本文报道通过外周血宏基因组二代测序成功诊断Q热血流感染1例,并及时给予合理抗菌药物治疗,患者预后良好,以期为临床提供参考。

氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分Q热疫苗的免疫原性及免疫保护性研究

目的实验评价氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体残存组分(CMR)疫苗的免疫特性及免疫保护性。方法采用国内分离贝氏柯克斯体新桥株制备CMR疫苗,用CMR免疫Balb/c小鼠;采用间接免疫荧光法检测CMR免疫小鼠血清特异性抗体水平和用淋巴细胞增殖试验评价CMR疫苗体外刺激小鼠脾细胞增殖的能力;以贝氏柯克斯体攻击免疫小鼠和用贝氏柯克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠血和脾脏样本。结果CMR免疫第4周起,小鼠血清中检出高水平的特异性抗体,CMR加氢氧化铝佐剂免疫小鼠的血清特异性抗体显著高于未加佐剂组。CMR在体外刺激正常小鼠和免疫小鼠脾淋巴细胞增殖水平显著高于对照组,WCV则抑制正常脾淋巴细胞增殖。三种剂量(30μg、10μg、1μg/只)CMR免疫小鼠血和脾脏样本贝氏柯克斯体含量显著低于未免疫组,以30μg组及加佐剂免疫小鼠的样本含菌量更显著低于对照组。结论采用我国分离株制备的CMR疫苗能诱导机体产生高效特异性体液免疫和细胞免疫应答,使机体抵抗大剂量的贝氏柯克斯体感染,具有良好的免疫原性和免疫保护性;氢氧化铝佐剂能显著增强CMR疫苗的免疫保护效能。

Q热血清学检测方法的研究进展

Q热是由贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)引起的急性自然疫源性传染病。本病呈世界性流行,人类和动物普遍易感,已经成为当前分布最广的人兽共患病之一。文章综述了Q热的病原学、流行病学以及血清学检测方法的研究进展,为Q热的进一步研究与防控提供科学依据。

44例被误诊为普通性肺炎的Q热柯克斯体肺炎病人的回顾性分析

通过对44例被误诊为普通性肺炎的Q热柯克斯体肺炎患者的回顾性分析,加强对Q热柯克斯体感染引起肺炎重要性的认识。收集2001年11月至2002年6月从全国选择出的12所三甲医院CAP患者共500例。使用ELISA试剂盒分别检测患者急性期及恢复期Q热柯克斯体特异性IgG抗体含量,对检测出的Q热柯克斯体的患者的性别、年龄等情况进行统计分析。然后把Q热柯克斯体感染患者按照是否合并细菌感染分成两组:单纯Q热柯克斯体感染组与混合细菌感染组。把单纯Q热柯克斯体感染组与在这同一批流行病学调查中检测出的单纯肺炎链球菌感染患者分别从一般情况、住院情况、临床表现、治疗结局、影像学表现、实验室检查等方面进行比较。共检测出Qfever感染阳性44例,可疑阳性病例4例;单纯Q热柯克斯体感染与肺炎链球菌感染患者在年龄、性别、住院时间、基础疾病及肺炎PORT分级方面均无差别,但在BMI方面有显著差别,单纯Q热柯克斯体感染患者BMI指数较肺炎链球菌感染患者高;在临床表现上,两者在咳嗽、咳痰、湿罗音的严重程度上均无差别,但在喘息方面两者有明显差别,Q热柯克斯体感染患者喘息明显加重(p<0.01),单纯Q热柯克斯体感染患者收缩压较肺炎链球菌感染患者高,而发热较肺炎链球菌感染患者轻(p<0.0001);在实验室检查方面,单纯Q热柯克斯体感染患者血小板计数明显较肺炎链球菌感染患者高(p<0.05);在治疗结局上单纯Q热柯克斯体感染与肺炎链球菌感染患者治疗结局无明显差别;影像学方面两者在受影响的肺叶数方面亦无明显差异;在治疗上,抗生素治疗对单纯Q热柯克斯体感染患者的影响,结果发现无论是否正确使用抗生素,在缩短住院时间方面均无显著性差别。高BMI患者易感染Q热柯克斯体,Q热柯克斯体肺炎患者发热体温较低而喘息明显,实验室检查中血小板明显偏高,抗生素治疗对缩短单纯Q热柯克斯体感染患者住院时间方面无明显效果。

Q热贝氏柯克斯体间接ELISA检测方法的建立

本研究以Q热贝氏柯克斯体弱毒株Ⅱ相全菌为包被抗原建立Q热贝氏柯克斯体间接ELISA检测方法,通过方阵滴定法对抗原包被浓度和二抗反应浓度的确定及各项反应条件的优化,确定其阴阳性临界值为0.44。用本方法与IDEXX Q热抗体检测试剂盒对393份牛临床血清进行检测,检出的血清阳性率分别为11.45%和6.10%,符合率为94.66%。结果表明,本试验建立的检测Q热贝氏柯克斯体的间接ELISA法具有较好的特异性及较强的敏感性,可初步应用于Q热贝氏柯克斯体抗体的临床检测。

Q热诊断技术研究进展

Q热是由贝氏柯克斯体引起的一种自然疫源性人兽共患病。本文论述了Q热诊断中常见的血清学和病原学诊断技术,包括补体结合试验(CFT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光法(IFT)、细胞培养、PCR技术、环介导等温扩增(LAMP)、重组酶聚合酶扩增(RPA)和基因芯片等,并对各种技术优缺点进行比较分析,以期为该病的诊断与防控提供参考。

Q热疫苗研究

Q热(Q fever)为一种世界性分布的重要人兽共患病,疫苗接种是预防Q热的最有效手段。专性细胞内寄生的贝氏柯克斯体是Q热的病原体,灭活I相贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)免疫保护效能几乎为100%,但是其免疫副反应强。氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体(CMR)和三氯醋酸提取贝氏柯克斯体可溶性抗原(TCA)Q热疫苗保留灭活Q热疫苗的免疫保护效能,且免疫副反应显著减轻。但CMR和TCA Q热疫苗均需要用鸡胚大量培养贝氏柯克斯体,需要在高等级生物防护实验室采用复杂步骤提取、纯化贝氏柯克斯体,这些使Q热疫苗的生产成本高、批量生产难。近十年来,国内外Q热疫苗研究着力于分子疫苗,并已经由研究贝氏柯克斯体保护性抗原转移到筛选能诱导特异性细胞免疫应答的CD4+和CD8+T细胞表位上,以期望T细胞表位在机体内高效表达,诱导机体产生良好的抗Q热保护性免疫应答。

甘肃南部部分地区Q热分子流行病学调查研究

为了解甘肃南部部分地区人群、媒介及宿主动物中Q热贝氏柯克斯体感染情况,采用布旗法和夹夜法分别采集蜱、野栖鼠标本,并收集当地居民及家畜血液标本.应用巢式PCR方法扩增蜱及野栖鼠标本中Q热立克次体,共检测6种蜱1 273只,其中若蜱1 126只,成蜱147只蜱标本,若蜱67组中有5组检测到Q热病原体DNA片段.成蜱中17只检测阳性;42只野栖鼠中2个鼠种3只检测阳性;采用间接免疫荧光法进行血清Q热抗体检测.共检测当地居民血清446份,抗体阳性29份;不同职业阳性率存在差异,以牧民的阳性率为最高.共检测家畜血液标本326份,其中牛56份,阳性5份;羊270份,阳性29份,无显著差别.饲养牛羊、牛羊不明原因流产、接生时保护措施3个因素与血清阳率有关,其中前两个因素为危险因素,后者为保护因素.