AMD3100对胆管癌CXCR4基因、蛋白表达及QBC939细胞增殖能力的影响

目的:探讨CXCR4基因在胆管癌组织标本及人胆管癌细胞株QBC939中的表达情况,分析AMD3100应用对CXCR4基因表达及QBC939细胞的生物学行为变化。方法:收集人胆管癌组织标本,培养人胆管癌细胞株QBC939,加入不同浓度的AMD3100抑制剂。采用RT-PCR和Western blot方法,分别检测人胆管癌标本及转染AMD3100抑制剂前后QBC939胆管癌细胞株中CXCR4基因和蛋白的表达。应用CCK-8试剂盒对转染后细胞增殖活性进行检测。通过克隆形成实验观察AMD3100对细胞克隆形成的抑制。结果:CXCR4基因及其蛋白在胆管癌组织标本及人胆管癌细胞株QBC939中均高度表达。不同浓度AMD3100抑制剂对QBC939胆管癌细胞株的增殖抑制活性取决于AMD3100抑制剂的孵育浓度、孵育时间。其中,转染不同浓度抑制剂24 h,并未对细胞增殖造成影响;转染48 h后,0.1μg·ml^(-1)AMD3100无明显影响,1μg·ml^(-1)、5μg·ml^(-1)的AMD3100抑制剂明显抑制了细胞的增殖;转染72 h后,各浓度均对细胞增殖有明显抑制作用。克隆形成实验分析显示,抑制CXCR4基因表达明显延长了克隆体形成时间,使克隆体体积和数目减少。结论:AMD3100抑制剂影响人胆管癌细胞株QBC939的增殖能力,抑制CXCR4基因和蛋白的表达。

体外分层渗透共培养研究胆管癌细胞株QBC939对正常内皮细胞的作用

目的在体外分层渗透共培养体系中研究胆管癌细胞对正常内皮细胞的作用。方法建立胆管癌细胞株QBC939与正常内皮细胞的体外分层渗透共培养体系，以同期单独培养的正常内皮细胞为对照，用免疫荧光法检测内皮细胞与胆管癌细胞共培养后，内皮细胞Factin，pp125FAK，蛋白水解酶MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达变化，用Realtime PCR，Western印迹检测内皮细胞共培养前后，pp125FAK，MMP-2、MMP-9、uPA的mRNA及蛋白表达变化。结果与同期单独培养的正常内皮细胞对照相比，内皮细胞Factin表达增强，pp125FAK、MMP-2、MMP-9、uPA的mRNA及蛋白表达增加（P〈0．01）。结论胆管癌细胞能通过旁分泌作用导致内皮细胞骨架系统改变，并能诱导内皮细胞蛋白水解酶的基因表达及蛋白合成，表明肿瘤细胞对邻近内皮细胞还可以通过肿瘤细胞的内分泌、旁分泌等作用分泌各种细胞因子，作用于内皮细胞上的特异性受体，发挥其对内皮细胞mRNA表达的调控作用，而导致内皮细胞发生形态、行为的改变。

siRNA干扰波形蛋白对肝门部胆管癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的探究波形蛋白(Vimentin,VIM)在肝门部胆管癌进展过程中的作用。方法设计可干扰波形蛋白表达的siRNA(siRNA-VIM1、siRNA-VIM2、siRNA-VIM3)及一组阴性对照siRNA-NC,将siRNA转染进入肝门部胆管癌QBC939细胞株内,观察抑制VIM表达后对QBC939细胞克隆数目及细胞分裂的影响;将QBC939细胞接种于裸鼠皮下,成瘤随机分组后将siRNA-VIM组、siRNA-NC组及生理盐水组(Control)每日于瘤体内注射药物干预,15 d后取出各组瘤体测量体积,对各组瘤体进行HE染色验证造模情况并用qRT-PCR法及免疫组织化学染色法(Immunohistochemistry,IHC)检测瘤体内VIM的表达。结果(1)siRNA-VIM1组、siRNA-VIM2组及siRNA-VIM3组与siRNA-NC组相比VIM表达均受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05),其中siRNA-VIM2组效果最好。(2)siRNA-VIM1组、siRNA-VIM2组及siRNA-VIM3组与siRNA-NC组相比,细胞克隆数目以及细胞分裂数目呈现出显著减少的趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)比较各组肝门部胆管癌荷瘤裸鼠的肿瘤体积,siRNA-VIM组肿瘤体积小于Control组和siRNA-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)qRT-PCR和免疫组化结果显示,与Control组和siRNA-NC组相比,siRNA-VIM组的VIM表达显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)HE染色结果显示,siRNA-VIM组与Control组和siRNA-NC组相比,肿瘤细胞减少。结论抑制VIM表达是抑制肝门部胆管癌进展的机制之一,VIM在肝门部胆管癌的进展中起一定作用,深入研究VIM在肿瘤进展中的机制,对肿瘤的靶向治疗具有重要意义。