中药木回春对QGY—7703人肝癌细胞DNA合成的影响

目的 中药木回春全外抗肝癌作用研究。方法 采用^3H-TdR掺入法检测木回春对QGY-7703人肝癌细胞DNA合成的影响。结果 实验组QGY-7703细胞DNA合成量较对照组皆有明显减少。差异显著（P<0.001)。且DNA合成量随药物浓度增加呈减少趋势，ED50浓度为270.968ug/ml。结论 木回春可能成为治疗肝癌的理想药物。

不同种类细胞培养和冻存方法的改进

目的 探讨不同细胞冻存与培养条件对保存肿瘤细胞株的影响。方法 快速冻存法、慢速冻存法,结果 (1)10％FCSRPMI1640培养基即可满足小鼠肝癌细胞株Hep—A—22细胞的培养基要求,而人肝癌细胞株QGY—7703细胞对RPMI1640培养基的要求较高,我们摸索需要15％—20％的FCS RPMI1640培养基方能满足其要求。(2)采用快速冻存法有利于肿瘤细胞株的复苏。结论 不同种类肿瘤细胞株由于其增殖能力不同所使用培养基所含成份应有所区别:快速冻存方法对肿瘤的细胞株保存优于传统的慢速冻存法。

双向电泳分析肝癌细胞线粒体的差异表达蛋白

背景与目的:线粒体在细胞凋亡中扮演关键的角色,对线粒体蛋白质组的研究可能有助于解释癌症的发生、早期诊断以及抗癌药物的研发。本研究对正常肝细胞L02线粒体、表阿霉素干预前后肝癌细胞QGY-7703线粒体进行二维电泳图谱的比较分析,筛选差异表达蛋白斑点。方法:运用蔗糖密度梯度的超离心方法分离纯化线粒体,双向凝胶电泳分离线粒体蛋白质,ImageMaster2D软件对所得图谱进行图像分析。结果:L02细胞线粒体、表阿霉素干预前QGY-7703细胞线粒体、表阿霉素干预后QGY-7703细胞线粒体三种标本超离心后,其纯化线粒体琥珀酸脱氢酶比活力分别提高13.8、11.8、10.2倍。L02细胞线粒体和表阿霉素干预前后QGY-7703细胞线粒体经双向凝胶电泳分辨出206、217、214个蛋白斑点,L02细胞与QGY-7703细胞比较筛选出49个差异表达蛋白斑点;表阿霉素干预前后的QGY-7703细胞进行比较,筛选到29个差异表达蛋白斑点。结论:运用超离心和双向电泳的方法成功筛选出一批在QGY-7703细胞线粒体中差异表达的蛋白斑点。

半夏总生物碱对人肝癌细胞增殖的抑制作用研究

目的探讨半夏总生物碱(TATP)对人肝癌细胞株QJY-7703增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对QJY-7703细胞株的生长抑制作用;应用单细胞凝胶电泳技术检测TATP导致QJY-7703细胞的DNA损伤情况。结果人肝癌细胞QJY-7703经TATP处理后,其体外增殖能力明显下降,且与药物的剂量、加药时间呈正相关,与对照组比较,差异均有统计学意义(24 h:对照组QJY-7703细胞增殖OD490=0.486±0.037,TATP组2.5、10.0、30.0、50.0 mg/L时的OD490分别为0.475±0.026、0.377±0.029、0.286±0.026、0.242±0.023;48 h:对照组OD490=0.793±0.046,TATP组2.5、10.0、30.0、50.0 mg/L时的OD490分别为0.747±0.028、0.497±0.025、0.287±0.021、0.207±0.020)(P<0.01或P<0.05)。单细胞凝胶电泳(SCGE)中,TATP组细胞尾DNA含量:对照组为(6.92±4.85)mg/L,TATP组10.0、40.0 mg/L时分别为(17.30±5.39)mg/L、(36.52±8.67)mg/L;尾长:对照组为(16.06±9.17)μm,TATP组10.0、40.0 mg/L时分别为(29.29±13.09)μm、(65.33±17.06)μm;尾动量:对照组为(0.97±0.34)μm,TATP组10.0、40.0mg/L时分别为(7.87±4.04)μm、(21.43±7.67)μm,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),且呈现浓度依赖性。结论在体外培养的条件下,一定剂量的TATP能明显抑制QJY-7703细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。

野生型RASSF1A基因抑制肝癌细胞增殖的分子机制

背景与目的:RASSF1A(ras association domain family1A)基因抑制肿瘤增殖的分子机制目前尚未完全明确,本文将探讨野生型RASSF1A基因抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法:利用已构建成功的稳定表达野生型和突变型RASSF1A基因的肝癌细胞株QGY-7703,使用流式细胞仪对其进行细胞周期的测定,Western blot分析其cyclin D1、cyclin E及P21蛋白的表达水平,通过检测荧光素酶报告基因活性及RT-PCR检测野生型RASSF1A基因的表达来分析RASSF1A基因对cyclin D1启动子和mRNA表达水平的影响。结果:野生型RASSF1A基因的表达可使QGY-7703细胞的细胞周期发生G1/S期阻滞,使其cyclin D1蛋白的表达水平下调,但不影响cyclinE和P21蛋白的表达水平。外源性cyclin D1的表达可使野生型RASSF1A基因引起的QGY-7703细胞G1/S期阻滞消失。野生型RASSF1A基因表达不影响QGY-7703细胞cyclin D1启动子的活性和cyclin D1 mRNA的表达水平。结论:野生型RASSF1A基因通过转录后机制负性调控cyclin D1蛋白的表达,使肝癌细胞株QGY-7703细胞周期阻滞在G1/S期。

稳定表达RFX6基因肝癌细胞株的建立

目的:建立稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株。方法:构建人源RFX6基因的重组质粒(pLNCX2-RFX6),pVSV-G质粒分别与pLNCX2-RFX6和空载体pLNCX2共转染至GP2-293细胞中进行包装,并用包装的逆转录病毒感染人肝癌QGY-7703细胞株,G418筛选出阳性克隆。RT-PCR和蛋白质印迹法验证稳定细胞株RFX6基因表达情况。采用Image J软件进行灰度值分析比较两株细胞系的差异。结果:在QGY-7703-pLNCX2-RFX6和QGY-7703-pLNCX2细胞中,RFX6/18SmRNA电泳条带灰度比值分别为5.044 0±1.384 0和0.357 2±0.407 9,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/18S是QGY-7703-pLNCX2细胞的14.1倍,差异有统计学意义,t=4.143,P<0.05;而在两细胞株中,RFX6/GAPDH的蛋白质印迹条带灰度值分别为1.391 4±0.141 3和0.127 8±0.037 3,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/GAPDH是QGY-7703-pLNCX2细胞的10.9倍,差异有统计学意义,t=14.966,P<0.05。结论:成功构建稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株,为研究RFX6基因在肝癌细胞中的功能奠定了基础。

三种鸡胚绒膜尿囊膜移植瘤模型对比分析

目的通过比较三种不同癌细胞株在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的生长情况,从中筛选最佳移植癌细胞株,建立移植瘤模型并观察生物学特性。方法分别将人肺癌A549株、舌鳞癌TCA8113株与人肝癌QGY7703株接种于7日龄鸡胚CAM上,对各自鸡胚成活率、瘤株成活、成瘤率和诱导血管生成情况等指标进行检测,并观察筛选移植瘤模型生长特性。结果与人肺癌A549株和肝癌QGY7703株接种组相比,舌鳞癌TCA8113株接种组成瘤率最高(P<0.05),为最佳移植癌细胞株,最佳接种癌细胞数量为8.0×106/个,接种后瘤体最佳生长周期为4~8 d,最佳实验时间为接种后第7天。结论筛选建立了舌鳞癌TCA-CAM移植瘤模型,为深入研究肿瘤生长生物学特性、血管生成机制、侵袭转移机制和筛选抗肿瘤药物提供了良好的实验动物模型。