运用荧光定量多重PCR技术检测RB1基因突变

目的 建立一种半自动、简易、快速和不需放射性同位素技术,用以检测RB1 基因突变的方法。方法 应用包括扩增RB1 基因27 个外显子和启动区在内的荧光定量多重PCR 技术。将全基因分成若干组,每组3～7 对引物,同时含对照C4 引物并使用4 对外对照,分别为RB的缺体、单体、双倍体及三体。在测试标本中,一个片段的拷贝数根据比较对照与标本的荧光强度而获得。利用自动片段处理软件2.1 处理结果。结果 观察到小片段缺失、插入及外显子拷贝数缺失等突变。测序结果和RB瘤细胞杂合性丢失进一步证实荧光定量多重PCR 的筛查结果。结论 此法是筛查患者基因缺失、插入的一种快速、简易的方法。应用此法可查出约50% 的阳性病例。查出的突变不仅有小缺失、插入,也可发现用以往的方法所不能见到的外显子杂合性缺失病例。