德氮吡格对人肝癌细胞株QGY-7701增殖和凋亡的影响

目的 观察德氮吡格(TNBG)对人肝癌细胞株QGY- 770 1的作用,初步探讨TNBG抗肿瘤作用机制。方法 运用3H- Td R掺入法、MTT法检测TNBG对肿瘤细胞的抑制增殖和细胞毒作用,光镜及透射电镜观察药物处理后细胞形态的改变,流式细胞仪分析细胞周期阻滞和产生凋亡的情况。结果 2μg/ ml TNBG作用2 4 h即对QGY- 770 1细胞有明显的增殖抑制作用,而其细胞毒作用则呈时间、剂量依赖性,光镜下发现大量脂滴潴留在胞浆,电镜观察证实胞浆中存在脂滴聚积,流式细胞仪检测到细胞阻滞于G2 / M期,并有明显的细胞凋亡。结论 TNBG能抑制肿瘤细胞增殖,将肿瘤细胞阻滞于G2 / M期,并诱导其发生凋亡,从而达到抗肿瘤的效应。

人肝癌细胞株QGY-7701蛋白质组学研究技术及二维电泳图谱的建立

目的:建立人肝癌细胞株QGY-7701蛋白质组学研究技术。方法:利用两种不同的裂解液提取细胞蛋白,进行双向电泳,经PDQuest软件分析与比较后,挑选匹配良好的10个蛋白点,进行基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的鉴定。结果:建立了稳定的人肝癌细胞株QGY-7701的双向电泳图谱,裂解液Ⅱ比裂解液Ⅰ提取的蛋白质量多25%,2-DE胶上蛋白点数多32%,从10个候选蛋向中鉴定出9个有意义的蛋白(P<0.05)。结论:初步建立了人肝癌细胞株QGY-7701的蛋白质组学研究技术,为进一步开展药物蛋白质组学研究奠定基础。

塞来昔布诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的研究

目的探讨塞来昔布体外诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的作用。方法设立空白对照组(培养液中不加任何药物)及塞来昔布5、25、50、100、150μmol.L-1 5个剂量组,作用时间分为24、48、72 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察塞来昔布不同浓度和作用时间对QGY-7701细胞生存率的影响,选择合适的作用时间和3个剂量再做其他凋亡方法的检测;采用Hoechst 33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化;采用双荧光染色(AnnexinV-EGFP/PI)流式细胞检测、末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)检测、DNA含量分析(检测细胞周期)等方法多指标检测细胞凋亡率。结果通过Hoechst 33258染色可以从细胞形态上看出塞来昔布诱导QGY-7701细胞凋亡,而Annexin V-EGFP/PI流式细胞检测、TUNEL检测、细胞周期及MTT检测结果显示随着塞来昔布浓度升高和作用时间延长,凋亡率升高(P<0.05,P<0.01)。结论塞来昔布有诱导肝癌细胞QGY-7701凋亡,抑制其生长的作用,具有治疗肝癌的潜在功能。

生长激素受体在Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株中的表达

目的了解Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与RT鄄PCR法检测GHR在Bel鄄7402与QGY-7701肝癌细胞株的表达。结果7402肝癌细胞可表达GHRmRNA,在蛋白表达水平放射性配体法发现GHR在此肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891,平衡解离常数为0.63±0.04583nmol/L;未发现7701肝癌细胞株表达GHR。结论7402肝癌细胞株表达GHR,可为将来研究rhGH与原发性肝癌的增殖关系奠定一些实验基础。

人肝癌细胞株QGY-7701亚细胞蛋白质组双向电泳技术的建立

目的优化人肝癌细胞株QGY-7701的蛋白质样品制备方法,建立其亚细胞蛋白质组双向电泳技术。方法分步提取人肝癌细胞株QGY-7701细胞质、细胞膜和细胞核蛋白,采用不同的方法除盐、浓缩样品,然后分别采用2种不同的水化上样缓冲液重悬样品,进行双向凝胶电泳。结果使用三氯乙酸/丙酮的除盐效果好,样品损失少;采用上样缓冲液(7mol/L尿素+2mol/L硫脲+4%CHAPS+40mmol/L Tris+65mmol/L DTT+2%两性电解质)有利于蛋白的溶解,获得更多的蛋白信息,检出的细胞质蛋白点数可达(995±53),细胞膜蛋白点数可达(1035±58),细胞核蛋白点数可达(893±45)。结论获得了清晰的人肝癌细胞株QGY-7701亚细胞蛋白质组双向电泳图谱。

大蒜素联合阿霉素诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡

目的:观察大蒜素与阿霉素联合应用对人肝癌细胞QGY-7701的作用效果,并探讨其机制。方法:不同浓度大蒜素与阿霉素单独及联合作用于人肝癌QGY-7701细胞后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数(CI),流式细胞仪(FCM)检测QGY-7701细胞凋亡率,吖啶橙(AO)荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果:单独应用时大蒜素与阿霉素的中效浓度分别是56.0mg/L和4.9mg/L,联合用药时下降为23和2.3mg/L,CI=0.887,为协同效应。大蒜素与阿霉素单独及联合应用均可导致QGY-7701细胞出现凋亡的形态学变化。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。结论:大蒜素与阿霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡,协同抑制人肝癌细胞生长。

QGY-7701肝癌细胞株中癌-睾丸抗原GAGE-1基因的表达

目的研究癌-睾丸抗原GAGE-1基因mRNA在QGY-7701肝癌细胞株中的表达情况。方法运用反转录聚合酶链反应技术检测肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因mRNA的表达,并与正常肝组织比较。结果肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因呈阳性表达,正常肝组织中GAGE-1基因呈阴性表达。结论 GAGE-1基因具有作为诊断肝癌的分子标记和免疫治疗肝癌的特异性靶位的潜在价值。

呫吨酮并吡啶衍生物XP-15联合紫杉醇对耐药肝癌细胞QGY-7701的体外抑制作用

目的:探索呫吨酮并吡啶衍生物XP-15联合紫杉醇对人肝癌QGY-7701耐药细胞株的体外抗肿瘤作用。方法:运用CCK8法、Transwell实验和流式细胞仪检测凋亡技术观察细胞功能学变化,运用Western Blot蛋白免疫印迹技术探索其可能的作用机制。结果:XP-15可明显增强紫杉醇对耐药QGY-7701细胞的抑制作用,XP-15联合紫杉醇作用于耐药QGY-7701细胞24 h后,QGY-7701细胞活力明显减弱,且其侵袭迁移能力明显降低,同时流式细胞仪凋亡检测提示细胞凋亡百分比明显增加。Western Blot蛋白免疫印迹亦证实细胞抗凋亡蛋白bcl-2表达明显降低,肝癌增殖分化相关PI3K及AKT蛋白分子表达减少。结论:XP-15具有增敏紫杉醇诱导耐药QGY-7701细胞凋亡同时抑制其增殖活力的作用,其作用机制可能与下调PI3K-AKT通路活性,同时减少bcl-2抑制凋亡蛋白表达相关。

阿霉素诱导肝癌QGY-7701细胞凋亡的研究

观察阿霉素对人肝癌细胞株QGY-7701的凋亡诱导作用。实验用阿霉素处理QGY-7701细胞后,用台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性;光镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞凋亡形态;DNA琼脂糖凝胶电泳技术观察分析细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果显示,阿霉素处理QGY-7701细胞后,出现了明显的凋亡现象,而且随着药物浓度的增加,细胞凋亡的趋势越明显。分析结果可知,阿霉素作用QGY-7701细胞48 h的IC50值为4.9μg/mL。流式细胞仪检测出阿霉素处理QGY-7701细胞的凋亡率逐渐上升。综上所述,阿霉素可以诱导QGY-7701细胞出现凋亡的现象。

罗格列酮通过PTEN/PI3K/Akt通路影响人肝癌细胞QGY-7701的增殖及凋亡

本研究为了探讨罗格列酮对人肝癌细胞QGY-7701增殖凋亡的影响,阐明其作用机制,以罗格列酮和人肝癌细胞QGY-7701为材料,通过结晶紫染色及CCK8方法,发现罗格列酮对人肝癌细胞QGY-7701有明显的抑制作用,其IC50为83.24μmol/L;通过RT-PCR,发现罗格列酮上调PTEN基因;通过Western blotting,发现罗格列酮能使PCNA、Bcl-2和p-Akt蛋白表达下调,使Bad、PPARγ和PTEN的蛋白表达上调,经PPARγ抑制剂处理后,PTEN和p-Akt表达下调。结果表明,罗格列酮可能通过调节PTEN/PI3K/AKT基因的途径,诱导人肝癌细胞QGY-7701凋亡,并抑制癌细胞的进一步增殖。本研究为临床肝癌研究提供理论基础。

德氮吡格对人肝癌细胞株QGY-7701蛋白表达的影响

德氯吡格（TNBG）为本室开发研制的具有创新构型的抗肿瘤药物。在荷瘤动物实验中照示：TNBG具有较好的抗肿瘤作用，处理组较对照组的生存时间明显延长。TNBG不良反应较小，与常用抗癌药物相比基本无交叉耐药性，评且通过影响脂代谢引起肿瘤细胞内大量脂滴聚积，产生抗肿瘤效应。在TNBG基因实验中，

新型手性抗肿瘤药物德氮吡格(TNBG)体外抗肿瘤活性初步研究

目的观察手性旋光异构体德氮吡格(TNBG)对6株人体肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨其抗肿瘤作用机制。方法运用MTT法检测手性TNBG对6株肿瘤细胞生长抑制情况;油红O染色法观察QGY-7701细胞中脂质聚集情况;流式细胞仪检测手性TNBG对人肝癌细胞株QGY-7701细胞周期分布和凋亡影响。结果手性TNBG能不同程度抑制肿瘤细胞增殖,且呈剂量依赖性;油红O染色提取显示QGY-7701细胞内脂质量与给药剂量呈正相关;流式细胞仪检测到有S期细胞增加,并且手性TNBG还能诱导QGY-7701细胞发生凋亡。结论手性TNBG在体外具有良好的抗肿瘤活性,其抗肿瘤作用机制可能是通过促使肿瘤细胞产生脂质聚集,抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡从而达到抗肿瘤效应。总体看(+)TNBG体外抗肿瘤活性比(-)TNBG更强。

全新结构抗肿瘤药物TNBG对裸鼠移植瘤生长抑制作用及药物毒副作用初步评价

目的观察TNBG对人肝癌细胞株QGY-7701裸鼠移植瘤生长抑制情况,初步评估药物的毒副作用。方法采用裸鼠复制人肝癌移植瘤模型。实验分对照组和给药组,腹腔注射给药,持续5周。治疗期间定期测量肿瘤大小,观察裸鼠生存状况。实验结束时处死裸鼠,测量肿瘤体积计算抑瘤率;眼眶取血,分离血清检测血脂、肝、肾功能;摘取裸鼠肿瘤及主要脏器组织作苏丹Ⅲ染色观察脂质沉积情况。结果 TNBG对移植瘤的抑瘤率为60.1%;各实验组裸鼠血脂、肝、肾功检测与对照组比无显著性差异(P>0.05);苏丹Ⅲ染色显示给药组裸鼠主要脏器组织内无脂质沉积,而肿瘤组织中可见大量脂质沉积。结论 TNBG对人肝癌细胞裸鼠移植瘤有较明显的抑制作用,毒副作用小,抗肿瘤作用具有选择性。