QIAamp及Biomed粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取人肠道细菌基因组DNA质量的差异

背景:有研究表明,不同试剂盒提取的粪便细菌基因组DNA质量有差别,选择一种操作简便、质量优良的粪便细菌基因组DNA提取试剂盒成为研究者们关注和急需解决的问题。目的:比较QIAamp及Biomed粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取的人肠道细菌基因组DNA质量的差异。方法:收集健康成年人新鲜粪便标本30例,用两种试剂盒分别提取细菌基因组DNA,检测其浓度、吸光度A260/280nm值及提取率,设计乳酸菌属16SrDNA基因特异性引物,以各自所提DNA为模板,进行常规聚合酶链反应,凝胶电泳后比较条带数量、明暗度及密度,并进行实时荧光定量聚合酶链反应定量检测各自所含乳酸菌属的数量。结果与结论:QIAamp试剂盒提取的正常人肠道细菌基因组DNA的浓度、提取率、表达量及乳酸菌属的数量均高于Biomed试剂盒(P<0.05或P<0.01)。说明QIAamp试剂盒提取的粪便细菌基因组DNA质量优于Biomed试剂盒。

QIAamp方法在疑难生物检材STR分型中的应用

本文通过采用QIAcube自动纯化仪与QIAamp DNA Investigator试剂盒,对320份生物检材包括血迹、烟蒂、肋软骨、脱落细胞4类常见疑难生物检材进行DNA提取与纯化,采用Sinofiler试剂盒进行扩增检验。在320份生物检材中,成功获得300份检材STR分型,且获得的STR分型均在13个基因座位以上。表明QIAamp方法适合常见疑难生物检材的日常检验。

应用QIAamp DNA Micro Kit(50)系统对微量体表脱落细胞DNA的提取纯化方法

衣帽等物上附着的微量体表脱落细胞 DNA 多态性分析成功与否,主要取决于细胞的采集与 DNA 提取技术。在2起交通肇事逃逸案例中探索采用吸尘设备收集细胞、3M 9002A 防尘口罩截流细胞的方法采集微量体表脱落细胞;利用 QIAamp DNA Micro Kit(50)系统提取、纯化 DNA,得到理想的 STR 分型结果。

尿液及尿斑DNA分型的研究

目的研究尿液及尿斑的DNA提取及其检验。方法用Chelex100法及QIAampMiniKit提取尿液及尿斑样本中的DNA,进行PCR扩增及STR检验。结果新鲜的及存放时间在12h以内的尿液样本能得到较好的分型结果;存放2d左右的尿液样本有50%能检出基因型;存放7d及更长时间的尿液样本全部不能检出基因型;尿斑样本的分型成功率很低。结论较新鲜的尿液样本均能进行DNA分型,在法医检案中具有应用价值。

两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较

目的比较两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA的提取效能。方法用Trizol提取法和QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法分别提取感染小鼠诺如病毒(Murine Norovirus,MNV)的小鼠小肠组织样品RNA和细胞培养物RNA,测定RNA浓度;用MNV特异的引物对分离的核酸样品进行一步法RT-PCR扩增。结果Trizol提取法提取小肠组织的RNA浓度高于QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法;QIAamp Viral RNA Mini Kit提取得到的细胞培养物RNA浓度高于Trizol提取法。经QIAamp Viral RNA Mini Kit提取的两种核酸样品均能扩增出特异条带,而Trizol提取的核酸样品未见特异条带。结论在MNV的检测中,QIAamp Viral RNA Kit更适合组织样品中MNV病毒核酸的提取。

BAX基因在遗传不稳定的大肠癌、胃癌突变的研究

目的 :了解 Bax基因在大肠癌 ,胃癌的突变情况。方法 :用 QIAamp方法提取肿瘤和正常组织的 DNA,选择 5对引物 ,经 PCR扩增 ,走 DNA序列胶电泳 ,检测其 MI及 Bax基因编码区序列。结果 :胃癌有 8例 MI阳性 ,其中 3例 Bax基因有突变 ,大肠癌有 14例 MI阳性 ,其中 6例 Bax基因有突变。结论 :Bax基因突变在胃癌和大肠癌的发生过程中起重要作用 ,Bax基因是胃癌、大肠癌

一例遭清洗、雨淋的剪刀上做的DNA检验

公安机关在办理重大案件,特别是在办理具有难度的案件中,微量物证的DNA检验对整个案件的侦破能起到关键作用。微量物证具有肉眼无法识别、难发现、难提取、易污染、易破坏的特点,造成微量物证提取和检验的困难。"6.3"案件中对剪刀上微量物证的DNA检验是案件侦破中的一个很重要环节,对指导相关案件检验具有重要启示作用。

介绍一种改量的粪便细菌基因组DNA提取试验方法

目的观察改变细菌裂解温度对提取粪便细菌基因组DNA量和纯度的影响。方法收集10例肝硬化患者粪便,每例患者粪便等分成两份,再随机分成两组。采用QIAamp DNA Stool Mini Kit试剂盒(国际通用粪便细菌基因组DNA提取试剂盒)进行抽提,一组(A组)按照试剂盒说明书温度要求进行粪便细菌基因组DNA提取,一组(B组)对试剂盒细菌裂解温度改良后再进行提取。结果与按照试剂盒说明书温度进行提取组相比,改变细菌裂解温度后粪便基因组DNA提取量明显增高(P<0.05),而粪便基因组DNA提取纯度(OD260/280、OD260/230)无明显变化(P>0.05)。结论改变细菌裂解温度能明显提高粪便细菌基因组DNA提取量,而不改变粪便细菌基因组DNA的提取纯度。该方法可以解决因粪便采样量少导致粪便基因组DNA提取量不足的问题。

吸附性载体上微量血痕的DNA分型

目的研究吸附性载体上微量血痕的DNA提取及其检验。方法用Chelex-100法、QIAamp MiniKit、及QIAamp Mini Kit改良法提取吸附性载体上微量血痕中的DNA,进行PCR扩增及STR检验。结果采用Chelex-100法及QIAamp Mini Kit的分型成功率很低;采用QIAamp Mini Kit的改良法能较好的得到分型图谱。结论采用QIAamp Mini Kit的改良法能较好的提取吸附性载体上微量血痕的模板DNA。

混合斑中精子DNA抽提方法的改进

目的改善混合斑中精子DNA的抽提效率。方法对不同条件下的混合斑采用不同方法提取精子DNA,进行PCR扩增及STR分型。结果联合运用Chelex法和商品化试剂盒进行精子DNA抽提,可比普通Chelex法快速、准确。结论Chelex法与商品化试剂盒的联合运用可提高混合斑DNA分型的成功率。

存放14年微量血痕DNA检验1例

1案例资料 1.1简要案情 1996年9月3日,长沙某高校教务处处长及女儿在家中被杀,犯罪嫌疑人申某外逃,直至2009年2月被抓获。2010年4月因案件审理需要,要求对14年前在现场提取的1双男士丝质袜上的可疑血迹进行DNA检验。