基于QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统的7种猪病毒检测方法的建立与初步应用

为建立同时检测7种常见猪病毒的毛细管凝胶电泳方法,本研究针对猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及非洲猪瘟病毒保守基因,设计7对特异引物,并在引物的5’端加入一段非同源性标签序列,再设计一对可识别标签序列的通用引物。经反应条件优化,建立了一种基于QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统的7种猪常见病毒多重PCR检测方法。该方法与O型猪口蹄疫病毒(FMDV-O)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等均无交叉反应,特异性强;所建立方法对7种病毒质粒标准品的检测下限分别为4.56×10^3拷贝/μL、6.35×10^3拷贝/μL、1.98×10^3拷贝/μL、1.32×10^4拷贝/μL、3.21×10^3拷贝/μL、4.51×10^3拷贝/μL、3.37×10^3拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示各靶条带数值间的变异系数均小于1%,该方法稳定,重复性高。该方法对65份临床样本检测结果与国标或行标单一PCR检测方法相比,二者对单一病原和混合病原检测的一致性分别为94.3%(33/35)、77.7%(14/18)。本研究建立的方法为毛细管凝胶电泳技术在动物疾病病原检测中的应用提供一定的参考。

猪繁殖与呼吸综合征病毒检测方法的研究

目的:为解决猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型RT-PCR检测过程中琼脂糖凝胶电泳需要制胶、转移PCR产物、上样、拍照等繁琐过程,本研究拟应用QIAxcel毛细管凝胶电泳分析系统来代替普通琼脂糖凝胶电泳。方法:选取40份经猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光RT-PCR检测为阳性或疑似阳性的核酸样品,进行RT-PCR扩增,产物分别用两种电泳方法观察结果。结果:40份核酸样品的RT-PCR产物,凝胶电泳显示有27份阳性样品,阳性率为67.5%(27/40),QIAxcel毛细管凝胶电泳显示31份阳性样品,阳性率77.5%(31/40)。结论:QIAxcel凝胶电泳可以替代常规琼脂糖凝胶电泳,进行多样本实验,并且具有更高的灵敏度,其具有的方便性和快捷性适合多样本的快速分析。