大肠埃希菌与克雷伯菌属细菌qnr基因的检测

目的 了解我院临床分离大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌qnr基因的存在情况。方法 用聚合酶链反 应(PCR)对227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌进行qnr基因检测。药敏检测分别采用K B法、break point法。结果 227株大肠埃希菌和36株克雷伯菌属细菌中有6株细菌检出qnr基因(2株大肠埃希菌、1株产 酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌)。其中产酸克雷伯菌为突变株,已在基因库注册,授权号:AY675584。6株qnr 基因阳性菌株均为产超广谱β 内酰胺酶(ESBLs)且多重耐药菌株。结论 qnr基因阳性菌株有严重的多重耐药 性,我院克雷伯菌属细菌中qnr基因的携带率高于大肠埃希菌。

临床分离阴沟肠杆菌中qnr基因及其耐药性检测

目的了解临床分离阴沟肠杆菌中qnr基因的分布以及对喹诺酮类等抗菌药物的耐药性。方法琼脂稀释法测定29株阴沟肠杆菌对5种氟喹诺酮类抗菌药物以及头孢美唑、亚胺培南、氯霉素、庆大霉素、四环素的耐药性;PCR检测qnr基因并将阳性扩增产物进行测序分析。结果阴沟肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、加替沙星的耐药率高达79.3%- 89.7%;对头孢美唑、氯霉素、庆大霉素、四环素、亚胺培南的耐药率分别为96.6%、89.7%、82.8%、55.2%、13.8%;29株阴沟肠杆菌中,2株细菌携带qnrA1基因,占6.9%。结论阴沟肠杆菌对氟喹诺酮类等多种抗菌药物耐药显著、为多药耐药菌,少数菌株中存在qnr基因,临床应加强检测和监测。

Molecular Detection and Association of <i>QnrA</i>, <i>QnrB</i>, <i>QnrS</i>and <i>BlaCMY</i>Resistance Genes among Clinical Isolates of <i>Salmonella</i>spp. in Iran

Prevalence of three plasmid-mediated quinolone resistance determinant qnrA, qnrB, qnrS and extended spectrum Cephalosporins determinant blaCMY, among eighty-five isolates of Salmonella spp. collected in the community between 2008 and 2010 was determined by PCR. Not only qnr genes but also bla genes were positive in twenty-four different isolates. PCR assay detected that 22 of 85 (25.8%) Salmonella spp. carried the qnrA, 1 (1.17%) of 85 isolates harbored the qnrB, 1 (1.17%) of them contained the qnrS, 1 (1.17%) isolate carried all the three qnrA, qnrB, qnrS genes, 24 of 85 (28.2%) Salmonella carried blaCMY and 5 (5.88%) isolates carried qnrA and blaCMY. Antimicrobial susceptibility patterns of isolates were as follows: 49 (57.6%) exhibited resistance to Nalidixic acid and none of them to Ciprofloxacin. 33 (38.82%) isolates exhibited resistance to Cephalosporins and 2 (2.35%) of them exhibited ESBL phenotype and 12 (14.1%) isolates resistance to Ampicilin. These results were confirmed by MIC determination test as well. Having detected qnr and bla genes suggested that these genes spread antibiotic resistance among pathogenic bacteria.

质粒qnr介导的肠杆菌科细菌对喹诺酮类药物耐药机制研究进展

质粒介导的喹诺酮类抗菌药物耐药是近10年来新发现的细菌耐药机制,主要由耐药基因qnr介导,可在肠杆菌科细菌中水平传播,引发的感染不易控制,使得院内感染大范围流行。本文就qnr的发现、来源、种类、作用机制、遗传背景、流行情况、与ESBLs的关系、检测方法和临床意义等方面进行综述。

临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及qnr基因检测

目的了解临床分离鲍曼不动杆菌中qnr基因和ESBLs基因的分布及其耐药特征。方法采用PCR法对115株鲍曼不动杆菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查,并用PCR法检测qnr阳性菌株SHV、TEM、CTX-M-14及CTX-M-3型ESBLs基因;用琼脂对倍稀释法测定15种抗菌药物对qnr阳性株的MIC值。结果115株鲍曼不动杆菌中,2株(1.74%)细菌检出qnrB基因;qnr阳性菌株同时检出SHV、CTX-M-14、TEM、CTX-M-3型ESBLs基因。1株qnr阳性菌株对4种喹诺酮类耐药,1株对左氧氟沙星及莫西沙星中介,对环丙沙星和洛美沙星耐药;2株阳性菌除对亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦敏感外,对其他的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。结论临床分离鲍曼不动杆菌中存在qnrB基因,qnr阳性株同时含有ESBLs基因,且呈多重耐药,临床应加强监测。

肺炎克雷伯菌中质粒介导耐喹诺酮类耐药基因qnr的流行现状及耐药特征

目的了解肺炎克雷伯菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS基因的流行情况以及其耐药特征。方法PCR法对37株肺炎克雷伯菌进行qnrA,qnrB,qnrS基因检测。K-B纸片法检测对15种抗菌药物的体外抗菌活性。琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的MIC值。结果37株肺炎克雷伯菌中,共检测出含qnr基因阳性菌株7株(18.92%),均为qnrS基因。阳性株菌均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药。结论湖北地区肺炎克雷伯菌中存在qnr基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,应加强对该类基因的监测。

临床分离阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮耐药qnrB和qnrS基因的检测

目的了解临床分离阴沟肠杆菌中qnrB和qnrS基因的分布。方法PCR检测qnrB和qnrS基因并将阳性扩增产物进行测序分析;纸片扩散法测定qnrB和qnrS基因阳性菌株对10种抗菌药物的敏感性。结果81株阴沟肠杆菌中,5株qnrB4基因阳性(6.5%)、2株qnrS1基因阳性(2.5%);qnr基因阳性菌株对氯霉素、阿米卡星、头孢西丁、头孢噻肟等显示多重耐药,其中3株对环丙沙星耐药。结论临床分离阴沟肠杆菌中存在qnrB和qnrS基因阳性菌株,为多重耐药菌,临床应加强检测和监测。

3株含qnr基因肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的检测

目的了解临床分离含qnr基因,(质粒介导的喹酮类耐药基因)肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型别。方法琼脂稀释法测定3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药性,NCCLS表型确证试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定、采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-13组、OXA-1组、OXA-2组、OXA-10组、PER-1、VEB-1β-内酰胺酶通用引物以及TEM、CTX-M-13组、OXA-1组全编码基因引物、I类整合酶基因引物进行PCR检测和DNA序列分析;同时对这些菌株进行PFGE检测。结果3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌均为产ESBLs菌株,ESBLs基因型别为CTX-M-14,其中2株细菌同时产生TEM-1型广谱β-内酰胺酶、1株同时产生TEM-1和OXA-30型广谱β-内酰胺酶,I类整合酶基因均为阳性;这些菌株对青霉素类、一代、二代、三代头孢菌素(头孢噻肟)以及多种喹诺酮类均显示耐药。3株菌株中有2株的PFGE谱型相同。结论临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌可同时产生CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶,引起多重耐药,并存在克隆传播,临床应加强检测。

鸡源大肠杆菌质粒介导的氟喹诺酮类药物耐药基因qnrA的分子检测

对2005年—2007年从豫北地区临床分离的377株鸡源大肠杆菌进行生化鉴定，MIC值测定。被测菌株对氟喹诺酮类（FQs）药物恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星均呈严重耐药，耐药率分别为94．9％、93．9％、94．9％。选取对恩诺沙星耐药（MIC〉32μg／m1）的235株大肠杆菌进行qnr基因的分子检测，结果显示仅有1株大肠杆菌（MIC=128μg／m1）呈qnr基因阳性，经测序分析该基因命名为qnrA。

大肠埃希菌和克雷伯菌的qnr基因流行情况调查

目的了解上海部分医院大肠埃希菌和克雷伯菌qnr基因流行情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)对267株大肠埃希菌和59株克雷伯菌(其中产酸克雷伯菌4株)的qnr基因进行筛选,全自动细菌鉴定仪VITEK系统进行鉴定和最低抑菌浓度测定,并采用PCR检测qnr基因阳性菌株Ⅰ型和Ⅱ型整合酶基因。结果在267株大肠埃希菌和59株克雷伯菌中检出3株细菌携带qnr基因,其中1株为大肠埃希菌,2株为肺炎克雷伯菌。3株qnr基因阳性菌株均产超广谱内酰胺酶(ESBLs),呈多重耐药性,且Ⅰ型整合酶均阳性、Ⅱ型整合酶均阴性。结论在所收集的大肠埃希菌和克雷伯菌中检出3株细菌携带qnr基因,其阳性率并不高。3株qnr基因阳性菌株均产ESBLs,且呈多重耐药性,qnr基因存在于Ⅰ类整合子上。

动物源qnr基因阳性肠杆菌Ⅰ类整合子的研究

【目的】研究Ⅰ类整合子在qnr基因阳性的动物源肠杆菌中的流行情况,探讨qnr基因与Ⅰ类整合子之间的流行相关性。【方法】PCR测序检测从526株动物源肠杆菌中筛选到的14株qnr基因阳性株的Ⅰ类整合酶,并对Ⅰ类整合酶阳性菌的基因盒进行长片段PCR测序。【结果】14株qnr基因阳性动物源肠杆菌均携带Ⅰ类整合子,且每个基因盒至少携带两个耐药基因。在所发现的基因盒中二氢叶酸还原酶(dfrA)和氨基糖苷腺苷酰转移酶(aadA)的检出率最高。本研究还检测到了1个携带林可胺核苷酸转移酶(linF)和2个携带利福平核糖基转移酶(arr-3)的基因盒子。2株aac(6')-Ⅰb-cr基因阳性菌的aac(6')-Ⅰb-cr基因也位于基因盒中,且均位于一空基因盒的下游。在本研究检测到的基因盒中,dfrA27-aadA2、dfrA12-orfF-aadA2和dfrA17-aadA5为检出率最高的基因盒排列。【结论】qnr基因与Ⅰ类整合子具有明显的流行相关性。

氟喹诺酮耐药志贺菌中质粒介导qnr基因的检测

目的检测志贺菌对氟喹诺酮抗菌药物的耐药情况,探讨氟喹诺酮耐药与志贺菌携带质粒介导qnr基因的关系。方法用纸片扩散法对100株志贺菌(福氏志贺菌50株,宋内志贺菌50株)进行耐药性检测,聚合酶链反应(PCR)检测志贺菌质粒介导qnr基因并进行DNA测序,分析qnr基因的存在与药敏结果的关系。结果 100株志贺菌中有9株检出qnr基因,检出率为9%(9/100),福氏志贺菌为4%(2/50),宋内志贺菌为14%(7/50);qnr基因阳性菌株对氧氟沙星的耐药率(11.1%)高于阴性菌株(5.5%),但差异无统计学意义。qnr基因阳性菌株对5种氟喹诺酮药物的抑菌圈中位数比较均缩小。结论宋内志贺菌质粒介导氟喹诺酮耐药qnr基因的携带率明显高于福氏志贺菌;志贺菌若携带质粒介导qnr基因则会导致对氟喹诺酮药物的敏感性下降。

广西虾源副溶血弧菌喹诺酮类耐药基因qnrC、qnrS、qnrVC的检测及分析

本实验通过PCR方法检测34株广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌中喹诺酮类耐药基因qnrC、qnrS和qnrVC的分布情况。耐药基因检测结果表明,34株副溶血弧菌中qnrC、qnrS和qnrVC基因的检出率分别为2.9%、0.0%与2.9%。qnrC基因在防城港市、钦州市、北海市的检出率分别为16.7%、0%、0%。qnrS基因在防城港市、钦州市、北海市的检出率均为0%。qnrVC基因在防城港市、钦州市、北海市的检出率分别为0%、0%、6.3%,三种耐药基因的检出率在三个市的副溶血弧菌之间差异均不显著(P 】0.05)。基于qnrC基因的氨基酸序列同源性比较结果表明,防城港株F17383与副溶血弧菌TOE26912.1、TOP53441.1、OQU02262.1亲缘关系最近,氨基酸同源性分别为100.0%、98.8%和98.8%。基于qnrVC基因氨基酸序列同源性比较结果表明,北海株B13121与副溶血弧菌AXI69764.1亲缘关系最近,同源性为99.4%。

我国鸡源大肠杆菌喹诺酮耐药株中qnr基因的发现

本文从我国鸡源大肠杆菌质粒中发现了介导喹诺酮类耐药的qnr基因。从120株鸡源大肠杆菌分离株中筛选出17株喹诺酮类耐药菌,以其质粒提取物为模板,PCR扩增介导喹诺酮类药物耐药qnr基因,结果发现3株阳性菌。序列测定结果显示,3株菌间qnr同源性为100%,与GenBank注册序列（AY655485）同源性为95.3%,氨基酸序列同源性为98.63%。3株qnr阳性菌对16～19种抗菌药物呈高水平多重耐药。

基因qnr与大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药水平的相关性研究

目的研究耐药基因qnr（qnrA，qnrB和qnrS）在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌环丙沙星敏感株与耐药株中与ESBLs阳性株和阴性株中的分布状况和比较分析。方法从2006年全国美平耐药监测网点中收集241株非重复的大肠埃希菌（122株）和肺炎克雷伯菌（119株），用琼脂对倍稀释法测定所有菌株对药物环丙沙星、头孢他啶、头孢他啶／克拉维酸、头孢噻肟、头孢噻肟／克拉维酸的MIC值。采用PCR检测所有菌株的质粒介导喹诺翻耐药基因qnr。结果在241株筛选出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中，环丙沙星的敏感率为36．9％，耐药率为61．4％。头孢噻肟的敏感率为45．2％，耐药率为39．0％。头孢他啶的敏感率为74．3％，耐药率为19．9％。ESBLs阳性株占56．8％。qnr共检出46株，总阳性率为19．1％（46／241）。其中qnrA有2株（0．8％，2／241），qnrB有25株（10．4％，25／241），qnrS有19株（7．9％，19／241）。一株从痰标本分离的肺炎克雷伯菌同时检出qnrB和qnrS。在肺炎克雷伯菌中，qnr共栓出39株，阳性率为32．8％（39／119）；在大肠埃希菌中，qnr共检出6株，阳性率为4．9％（6／122）。在环丙沙星敏感菌株中，qnr基因的阳性率为13．5％（12／89）；在环丙沙星耐药菌株中，qnr基因的阳性率为21．6％（32／148）。经酽检验，qnr基因在环丙沙星敏感菌株与耐药菌株检出率的差异无统计学意义（X^2=2．435，P〉0．05）。在ESBLs阳性的菌株中，qnr的阳性率为23．4％（32／137）；在ESBLs阴性菌株中，qnr的阳性率为12．5％（13／104）。经Z。检验，qnr基因在ESBLs阳性株与ESBLs阴性株中检出率的差异具有统计学意义（X^2=4．590，P〈0．05）。结论质粒介导喹诺酮类耐药基因qnr在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分布广泛。qnr基因与环丙沙星的耐药水平没有相关性，而与细菌是否产ESBLs有相关性。

质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在大肠埃希菌中流行现状及耐药特征

目的了解该院分离的大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS的流行情况及其耐药特征。方法用PCR法对129株大肠埃希菌进行qnrA,qnrB,qnrS基因检测,并用K-B纸片法检测其对15种抗菌药的体外抗菌活性,另外用琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的M IC值。结果129株大肠埃希菌中,5株(3.88%)检出qnrA基因,8株(6.20%)检出qnrB基因,3株(2.33%)检出qnrS基因。阳性菌株均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药,其中2株qnrA阳性菌株和3株qnrB阳性菌株对环丙沙星敏感。结论湖北地区大肠埃希菌中存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS基因的流行,qnr阳性株呈多重耐药,且敏感株中有该类基因的存在,应加强监测。

质粒介导的喹诺酮耐药qnr基因的检测

目的了解我院分离的革兰阴性杆菌中qnr基因的流行情况。方法PCR法对129株大肠埃希菌、29株肺炎克雷伯菌和10株阴沟肠杆菌进行qnr基因检测。对qnr基因阳性株,Ⅰ类整合酶基因扩增检测Ⅰ类整合子;KB纸片法检测对16种抗菌药的体外抗菌活性。按NCCLS表型筛选和确证试验检测产ESBLs株;琼脂稀释法检测对环丙沙星的MIC值。结果6株细菌检出qnr基因(5株大肠埃希菌和1株阴沟肠杆菌),肺炎克雷伯菌中未检出qnr基因。6株qnr基因阳性株Ⅰ类整合酶基因扩增全为阳性,仅对亚胺培南全部敏感且对多种抗菌药耐药,有2株大肠埃希菌对环丙沙星敏感。结论湖北地区存在qnr基因的流行,qnr基因阳性株多重耐药严重,应加强监控。

哈维氏弧菌qnr基因的克隆及原核表达条件优化

根据Gen Bank中公布的哈维氏弧菌qnr基因序列设计引物扩增哈维氏弧菌qnr序列,将其插入p ET-32a质粒,构建原核表达载体p ET32-qnr,并对诱导温度、时间、IPTG浓度等条件进行优化。结果表明,哈维氏弧菌qnr全长651 bp,编码216个氨基酸;重组蛋白优化条件为于28℃、IPTG浓度为0.05 mmol/L条件下诱导6 h。

大肠埃希菌药敏分析及qnr基因分布情况研究

目的了解衡水地区大肠埃希菌的药敏情况以及qnr基因的存在情况。方法采用肉汤稀释法测15种抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)并计算其MIC50和MIC90;采用聚合酶链反应(PCR)检测qnr基因。结果 15种抗菌药物中仅亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦对大肠埃希菌敏感,245例大肠埃希菌中检出5株存在qnrB基因,占2.0%,1株存在qnrS基因,占0.4%。结论我院检出的大肠埃希菌存在多重耐药。少数菌株中,存在qnrB和qnrS基因,临床应加强监测。

肺炎克雷伯菌中qnr基因检测

目的了解质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr在肺炎克雷伯菌中流行及与ESBLs及对环丙沙星耐药的相关性。方法纸片扩散法检测药物敏感性,双纸片协同试验检测ESBLs。PCR方法检测qnr基因。结果 62株非重复的肺炎克雷伯菌中,ESBLs阳性率为75.8%(47/62),环丙沙星敏感率为45.2%(28/62),qnr总阳性率为53.2%(42/62)。单纯qnrA阳性5株(8%),qnrB9株(14.5%),qnrS10株(16.1%)。同时2种qnr基因阳性9株(14.5%),qnrA和qnrB基因阳性1株(1.6%),qnrA和qnrS基因3株(4.8%),qnrB和qnrS基因5株(8%)。在环丙沙星耐药株和敏感株中,qnr基因的阳性率分别为58.8%(20/34)和46.7%(13/28)。在ESBLs阳性菌株和阴性菌中,qnr的阳性率分别为68%(32/47)和6.6%(1/15)。结论 qnr基因主要分布在产ESBLs的肺炎克雷伯菌,与环丙沙星耐药与否无相关。