鸡和人志贺菌gyrA、parC基因突变与喹诺酮类耐药的关系

通过药敏实验检测了鸡鲍氏、人鲍氏和人福氏三株志贺菌对12种常用抗生素的耐药情况,发现三者均未产生对喹诺酮类药物的耐药性。用聚合酶链反应(PCR)分别扩增三株志贺菌的DNA旋转酶A亚单位(gyrA)和拓扑异构酶ⅣC亚单位(parC)基因,并对其中的耐喹诺酮类决定区(QRDR)进行了分析。发现鸡和人鲍氏志贺菌QRDR区的序列没有发生任何碱基突变,这与药敏试验结果相吻合。人福氏志贺菌虽然也对喹诺酮类无耐药性,但其gyrA基因存在83位Ser83(TCG)→Leu(TTG)的突变,由于只有83位点一处突变,所以尚未表现出耐药性表征,parC基因中存在58位Ser58(AGC)→Ile(ATC)的突变,该突变点与常见的80、84位氯基酸的改变有所不同,却仍在QRDR区域之中,虽然暂时还无法根据这一结果判断该突变与喹诺酮类耐药性之间的关系,但至少表明该菌株正处在耐药性演变进程之中,其在志贺菌耐药性中的确切作用还有待进一步研究。

牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性分析

【目的】了解牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药特征,为临床合理用药提供理论依据。【方法】从不同牛场采集腹泻犊牛粪样分离鉴定大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星3种氟喹诺酮类药物的最小抑菌浓度(MIC),PCR检测质粒介导的喹诺酮类耐药(PMQR)基因(qnrA、qnrB、qnrD、qnrS、aac(6′)-Ib和qepA基因)及喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变(gyrA和parC基因),并选择2株携带PMQR基因的大肠杆菌经恩诺沙星诱导后检测QRDR的gyrA和parC基因突变。【结果】分离鉴定得到75株大肠杆菌,其中60.00%的菌株对至少2种FQs耐药,40.00%的菌株对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星均耐药,且对恩诺沙星的耐药程度较为严重。75株大肠杆菌均未检测到qnrA、qnrD和qepA基因,但检测出qnrS、aac(6′)-Ib亚型aac(6′)-Ib-cr和qnrB基因,61.33%的菌株至少携带1个PMQR基因,其中以qnrS和aac(6′)-Ib-cr最为常见。58.67%的大肠杆菌发生了QRDR突变,主要突变方式为GyrA:(Ser 83 Leu+Asp 87 Asn)+ParC:Ser 80 Ile,发生突变且携带PMQR基因的大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星均耐药。恩诺沙星诱导后,PMQR阳性菌的gyrA基因发生5处碱基突变,PMQR阴性菌无碱基突变。【结论】大肠杆菌耐氟喹诺酮类药物主要与QRDR突变密切相关,因此兽医临床上应合理使用氟喹诺酮类药物来减缓大肠杆菌的耐药性。

猪源大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的多样性研究

为研究陕西省关中猪源大肠埃希菌的耐药情况及质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因的流行性与多样性,于2017年4月—2018年11月从陕西关中地区数个养猪场分离获得470株大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法测定其对包括3种氟喹诺酮类药物在内的6类抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),PCR扩增检测其携带的PMQR基因,并分析PMQR基因阳性菌株gyrA和parC基因的质粒介导喹诺酮耐药决定区(QRDR)的突变情况。结果显示,陕西猪源大肠埃希菌对阿莫西林和土霉素的耐药率高达100%和98.51%,对阿米卡星、氟苯尼考、替米考星和头孢噻呋的耐药率分别为60.64%、52.98%、50.85%和44.47%,且89.58%为多重耐药菌株。对3种氟喹诺酮类药物恩诺沙星、普多沙星和环丙沙星的耐药率分别为89.58%、57.66%和56.80%。对美罗培南最为敏感,未发现耐药菌株,但有9株大肠埃希菌对美罗培南的敏感性为中介。对氟喹诺酮类药物耐药的菌株中,PMQR基因qnrS、aac(6′)-Ib-cr、qnrB、qnrA、qnrD和qepA的检出率分别为36.52%、30.14%、17.38%、11.45%和2.49%,且55.30%的菌株携带1种PMQR基因,37.90%携带2种PMQR基因,6.40%携带3种PMQR基因,0.35%携带4种PMQR基因。在282株携带PMQR基因的菌株中,279株发生QRDR突变,其中以gyrA基因的Ser83Leu突变为主。132株PMQR基因阳性菌株parC基因发生Ser80Ile或Ser80Ile+Glu84Val突变。随着菌株所携带PMQR基因的增多,gyrA和parC基因的突变位点也相应增加,细菌的耐药水平也随之增加。

福建地区鼠伤寒沙门菌喹诺酮耐药基因特征及MLVA分子分型

目的了解福建地区鼠伤寒沙门菌喹诺酮耐药状况及其分子分型机制。方法采用微量肉汤稀释法测定萘啶酸、环丙沙星和左氧氟沙星对83株鼠伤寒沙门菌的最小抑菌浓度(MIC);PCR扩增沙门菌的喹诺酮耐药区(QRDR)基因(gyrA,parC)和质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)(aac(6’)-Ib-cr,oqxA,oqxB);采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)比较菌株间的遗传相似性。结果 83株鼠伤寒沙门菌对萘啶酸、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为27.7%(23/83),13.2%(11/83)和4.8%(4/83),QRDR基因突变率为25.3%(21/83)。21株基因突变株存在gyrA和parC两个突变类型,突变氨基酸类型分别为Ser83Tyr、Ser83Phe、Asp87Tyr和Asp87Asn,其中以第87位氨基酸突变为主,占总突变数的52.4%(11/21)。parC基因突变菌1株,为第80位氨基酸突变Ser80Arg,该菌株同时为gyrA:Ser83Phe突变。PMQR基因(aac(6’)-Ib-cr,oqxA,oqxB)在83株鼠伤寒沙门菌中的检出率分别为20.5%(17/83)、15.7%(13/83)和16.9%(14/83)。72株鼠伤寒沙门菌经MLVA分型后遗传关联度介于42.3%~100%之间,按照100%的相似度可分为18个型别,其中次优势型MT5菌株耐药基因与MLVA分型表现出一定的关联性。结论福建地区鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类药物的耐药率不高,但环丙沙星和左氧氟沙星中度敏感菌中存在耐药基因突变,并具有一定的聚集性,需继续加强检测。

河北地区淋球菌分离株对常见6种抗菌药物的耐药性分析

目的测定河北地区2009～2013年分离的118株淋球菌的基因序列,并分析其对常见6种抗菌药物的耐药性。方法分离自妇科患者泌尿生殖道分泌物的淋球菌118株,用琼脂稀释法测定6种临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度。分别对耐药株QRDR基因,mtrR基因和mtrC基因进行检测和序列分析。结果 118株淋球菌中113株对环丙沙星耐药,占95.8%；19株对阿奇霉素耐药,占16.1%；66株四环素（TRNG）高度耐药,占55.9%；106株对青霉素耐药,占89.8%；5株对头孢曲松耐药,占4.2%。未检出大观霉素耐药株。序列分析淋球菌耐药株QRDR基因中gyrA和parC发生位点突变,其中gryA突变位点发生在S91F、S91Y、D95G、D95N氨基酸；parC突变位点发生在D86N,S87R,S88P,E91S氨基酸。结论淋球菌对青霉素、四环素以及环丙沙星（氟喹诺酮类）等抗菌药物耐药,其机制为gyrA和parC位点氨基酸发生变异,但对阿奇霉素、头孢曲松以及大观霉素的耐药机制尚不明确,有待进一步观察。