基于UPLC-QTOF-MS解析苦荞黄酮组成及药理学网络分析

为优化苦荞黄酮提取工艺并明确其具体成分结构和含量及药理作用,本研究以四川省凉山彝族自治州甘洛县优质苦荞为研究对象,对超声提取苦荞黄酮工艺进行了优化,采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)对主要黄酮成分进行结构鉴定,并采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪对鉴定到的黄酮进行准确定量,同时利用中药系统药理学(TCMSP)系统分析其网络药理学特性。结果表明,超声辅助乙醇提取苦荞黄酮的最优条件为乙醇浓度90%(V/V)、超声功率140 W、超声温度70℃、超声时间60 min、提取溶剂与苦荞原料比50∶1(mL·g^(-1)),该条件下,提取液中共鉴定到黄酮16种,其中芦丁、表儿茶素和儿茶素含量分别达到115.81、72.99和23.08μg·mL^(-1)。这16种黄酮在防治心血管疾病、慢性炎症性疾病上具有重要作用。本研究可为苦荞精深加工综合利用尤其是功能性苦荞产品开发利用奠定基础。

基于UPLC-QTOF-MS和UNIFI软件的中药非法添加色素筛查平台建设

目的:基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)分析和UNIFI软件,建立包含45种常见中药非法添加色素的筛查平台,以期为中药材(饮片)质量监管提供技术方法,提高监管效率。方法:采用Waters ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱,以5 mmol·L^(–1)的乙酸铵水溶液和乙腈为流动相梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(–1),同时利用UPLC-QTOF-MS/MSE进行质谱检测分析,基于电喷雾离子源(ESI)在m/z 50~1200范围内进行正、负离子扫描,并与色素对照试剂进行比对。最后,将45种色素的名称、CAS号、分子式、结构图(.mol格式)、碎片离子等信息导入UNIFI软件,构建中药非法添加色素筛查平台并进行验证分析。结果:成功构建了包含45种添加色素的快速筛查平台,45种色素检测下限为0.33~24.83 ng·mL^(–1),此外对蒲黄、红花、五味子3个品种的市售中药进行了色素筛查,检出有红色和黄色添加色素如金橙Ⅱ、柠檬黄和皂黄等。结论:建立的色素快速筛查平台可快速、简便、高效地实现中药非法添加色素的筛查并有效提高药品监管效率。

基于UHPLC-QTOF-MS的兰州百合植物化学成分鉴定

为探究地理标志产品兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)的植物化学成分,以甘肃省五个主要产区(兰州市榆中县、兰州市七里河区、定西市临洮县、定西市渭源县、临夏市永靖县)的兰州百合鳞茎为研究对象,基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法的非靶向代谢组学技术鉴定其植物化学成分。结果表明,在兰州百合鳞茎中初步鉴定出62种植物化学成分,包含谷胱甘肽等22种氨基酸、多肽及其衍生物,溶血磷脂酰胆碱等9种油脂和磷脂类,鼠李糖等7种糖类,阿魏酸、咖啡酸等7种酚酸类,山奈酚等4种黄酮类,核黄素、维生素C等4种天然维生素,阿魏酰腐胺等3种酚胺类,大丁苷等2种香豆素类,葫芦巴碱等2种生物碱,萜类组分松香酸和三萜皂苷类组分刺五加苷E。本研究丰富了兰州百合植物化学成分的现有数据,为兰州百合的研究与利用提供了科学依据。

基于Support Vector Machine和UPLC-QTOF-MS的人参生长年限数字化鉴定分析

目的:基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)分析并经量化处理,结合支持向量机(SVM)进行数据建模,对人参生长年限进行数字化鉴定分析。方法:对3、4、5、15年生的人参样品进行UPLC-QTOF-MS分析,以混合质量控制样品为基准进行峰位校正、提取并经量化处理,获取反映化学成分信息的精确质量数-保留时间数据对(EMRT)。结合SVM进行数据建模,同时在5、10、20折内部交叉验证的基础上,通过准确率(Acc)、精确率(P)、曲线下面积(AUC)等参数进行模型评价。基于所建数据模型进行人参生长年限的鉴定。结果:经量化处理后80批人参均获得6556个EMRT,结合SVM建立的数据模型具有优秀的辨识效果,Acc、P及AUC均大于0.900且外部鉴定验证正确率为100%。结论:基于UPLC-QTOF-MS分析,并结合SVM算法能够高效准确地实现人参生长年限的数字化鉴定,可为中药材生长年限鉴定探索及中药质量控制提供参考。

基于Random Forest和UHPLC-QTOF-MS^(E)对不同来源龟甲基原的鉴定

目的:基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS^(E))分析并经数字量化处理,结合随机森林(Random Forest,RF)算法构建数据辨识模型,以实现中华草龟、巴西龟、台湾龟、鳄鱼龟、鳖甲基原的数字化鉴定。方法:经样品预处理后,对不同来源、不同批次的龟甲进行UPLC-QTOF-MS^(E)分析,并以混合样品为基准进行峰位校正、提取并经量化处理,获取反映多肽离子信息的精确质量数-保留时间数据对(Exact Mass Retention Time,EMRT)。然后基于信息增益率的特征筛选获取重要多肽离子信息,结合随机森林(RF)算法进行数据建模,同时基于内部交叉验证中的准确率(Acc)、精确率(P)、曲线下面积(AUC)等参数进行模型评价。最后基于最优模型进行龟甲基原的鉴定验证分析。结果:基于信息增益率的特征筛选,得到71个特征多肽信息,建立的RF模型具有优秀的辨识效果,准确率、精确率以及AUC均大于0.950且外部鉴定验证的正确率为100.0%。结论:基于UHPLC-QTOF-MS^(E)分析,并结合RF算法能够高效准确地实现不同来源龟甲基原的数字化鉴定,可为龟甲的质量控制及基原考证提供参考和帮助。

基于UHPLC-QTOF-MS的薜荔水提物的化学成分分析及Beas-2b细胞抗衰老活性

采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间-质谱(UHPLC-QTOF-MS)技术对薜荔果、茎、叶中化学成分进行分析,并对其缓解由香烟烟雾提取物诱导的肺部细胞衰老能力进行研究。以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2μL·min^(-1);采用电喷雾电离原(ESI),正负离子扫描模式进行数据采集,通过Msdial进行数据库比对和参考已报道文献对薜荔果、茎和叶3种部位的水提物进行化学成分表征。建立香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞Beas-2b衰老模型,测定薜荔果、茎、叶3种水提物对细胞活性及细胞衰老的影响。结果成功鉴定出薜荔果、茎、叶水提物中的33种化学成分,发现薜荔3种水提物在适宜质量浓度范围内对Beas-2b细胞无明显毒性,50μg·mL^(-1)的薜荔茎和叶水提物对细胞衰老有一定缓解作用。结果表明UHPLC-QTOF-MS法灵敏度高,分析快速,结果可靠,能够全面快速分析和鉴定薜荔不同部位水提物中的化学成分,薜荔具有潜在的抗细胞衰老能力。

基于GC-MS和UPLC-QTOF/MS的灵芝不同生长阶段的成分分析

[目的]探究灵芝(Ganoderma lucidum)不同生长阶段的成分差异。[方法]使用气相色谱-质谱检测法(gas chromatographymass spectrometry,GC-MS)和超高效液相串联四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-offlight mass spectrometry,UPLC-QTOF/MS)技术,选用ACQUITY超高效液相色谱仪HSS T3色谱柱在Waters超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)系统上对灵芝原基、产孢前和产孢后的子实体进行成分分析与鉴定。[结果]GC-MS共检测到24种成分,其中醛类8种、酯类4种、烃类1种、酸类1种、醇类1种、酮类2种、胺类2种、吡嗪类1种、咪唑类1种、吡咯类1种、呋喃类1种、酚类1种。UPLC-QTOF/MS共检测90种成分,最主要的成分三萜类共有67种,此外还包括脂肪酸类8种、氨基酸及其衍生物类3种、苷类2种、维生素1种、生物碱类2种、有机酸类2种、糖类2种、萜1种、杂萜1种、甾体1种。共有73种成分在原基中检出,其中三萜类成分54种;72种成分在产孢前子实体中检出,其中三萜类成分57种;52种成分在产孢后子实体中检出,其中三萜类成分有42种。[结论]灵芝不同生长阶段成分存在明显差异,本研究结果为灵芝不同时期的化学成分的分析与鉴定,以及化学物谱图的完善提供了基础数据,为相关药理、药效分析提供了有效参考。

基于UPLC-QTOF/MS的清开灵注射液过敏反应豚鼠血清代谢组学研究

目的:利用代谢组学方法研究清开灵注射液过敏反应豚鼠血清样本,探索其可能存在的特征性生物标志物。方法:利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(UPLC-QTOF/MS)技术对清开灵注射液组豚鼠和空白对照组豚鼠血清代谢指纹图谱展开分析,根据主成分分析(PCA)和正交信号校正偏最小二乘判别分析(OSC-PLS-DA)结果筛选出差异性代谢物。结果:清开灵注射液组与空白对照组分别呈现聚类分布,确认出5个生物标志物,包括硬脂酰溶血磷脂酰胆碱、肉豆蔻酰溶血磷脂酰胆碱、二氢神经鞘氨醇、蟾二烯羟酸内酯和3α,12β-二羟基-5β-胆烷酸。结论:建立了利用液相色谱-质谱技术进行清开灵注射液过敏反应豚鼠血清代谢组学研究的方法,为进一步认识清开灵注射液的过敏反应及中药注射剂安全性评价研究提供了新的思路。

UPLC-QTOF/MS法分析乳宁颗粒化学成分及入血成分

目的建立UPLC-QTOF/MS法分析乳宁颗粒化学成分及入血成分。方法2只大鼠灌胃给予颗粒水溶液,于0、0.5、1、2、4h采血。分析采用AcquityUPLCBEHC_(18)色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈(正离子)或水-乙腈(负离子),梯度洗脱;体积流量0.3mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。结果共鉴定出166种化学成分,包括44种黄酮类、17种萜类、23种生物碱类、11种皂苷类、29种酚酸类、13种醌类、10种有机酸类、19种其他类,以及11种入血成分。结论该方法准确稳定,可为乳宁颗粒临床应用提供数据支撑,也能为其后续质量控制、物质基础研究奠定基础。

UPLC⁃QTOF/MS法分析芪苈强心胶囊化学成分及入血成分

目的建立UPLC-QTOF/MS法分析芪苈强心胶囊化学成分及入血成分。方法心肌梗死后心力衰竭大鼠灌胃给予芪苈强心胶囊0.5%CMC-Na混悬液(生药量0.9 g/mL)4周,取血。分析采用Acquity UPLCBEHC_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈(正离子模式)或水-乙腈(负离子模式),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。结果共鉴定出151种成分,包括38种黄酮类、36种萜类、23种生物碱类、11种皂苷类、11种苯丙素类、10种酚酸类、4种有机酸类、4种强心苷类、14种其他类,以及35种入血成分。结论该方法准确稳定,可为芪苈强心胶囊临床合理应用提供数据支撑,也能为其他中成药相关效应物质研究奠定基础。

UPLC-ESI-QTOF/MS快速表征鉴定九华黄精的化学成分

目的采用超高效液相色谱电喷雾电离四极杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-QTOF/MS)结合UNIFI软件对九华黄精中的主要化学成分进行快速表征和鉴定。方法采用ZORBAX SB-C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,柱温30℃,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1);质谱采用正、负离子MS^(E)的全扫描模式分别采集质谱数据。结果正、负离子下共表征鉴定47个化学成分,包括甾体皂苷类15个、黄酮类8个、有机酸类9个,生物碱类4个,氨基酸类1个,其他类10个,其中3个经对照品鉴定,8种化合物为首次从九华黄精中发现。结论该方法实现了九华黄精中主要化学成分的快速质谱表征和鉴定,为九华黄精的质量评价和药效物质基础研究奠定了基础。

UPLC-QTOF/MS结合网络药理学探讨诃子与草乌配伍“异病同治”类风湿性关节炎和痛风性关节炎作用机制

目的:探讨诃子与草乌配伍“异病同治”类风湿性关节炎(RA)和痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法:采用数据挖掘技术找出治疗“图赖”病的核心药物组合(诃子-草乌),并使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF/MS)检测大鼠灌胃诃子与草乌配伍药物后的入血成分;运用PubChem、Swiss Target Prediction、GeneCards、OMIM、DisGeNET、Metascape等多个数据库检索诃子与草乌化学成分对应靶点、RA和GA的疾病靶点,以及代谢通路等信息,利用Cytoscape3.8.2软件构建成分-靶点-通路-疾病网络,并利用分子对接方法证实诃子与草乌的主要成分与关键靶点之间的高亲合力。结果:诃子与草乌入血成分相应靶点与RA靶点交集后得到323个交集靶点、与GA靶点交集后得到24个交集靶点,两者共有靶点24个,主要有肿瘤坏死因子(TNF)、肿瘤蛋白p53(TP53)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)和信号转导和转录激活因子3(STAT3),与十八碳四烯酸、绢酸、5-(3-羟基-4-乙酰氧基-1-丁基)-2,2'-联噻吩、灵芝酸H等有紧密联系,涉及通路有TNF信号通路、破骨细胞分化通路、癌症通路等。分子对接结果显示灵芝酸H和TNF、5-(3-羟基-4-乙酰氧基-1-丁基)-2,2'-联噻吩和MMP-9有强烈对接活性。结论:蒙古族药诃子与草乌配伍治疗RA和GA具有多靶点效应,可能通过炎症反应的调节、细胞对生物刺激的反应、对细菌源分子的反应、磷酸盐代谢的正调控和对激素的反应等通路发挥“异病同治”作用。

基于UPLC-QTOF-MS和网络药理学探讨平卧菊三七治疗高尿酸血症潜在作用机制

目的鉴定平卧菊三七入血化学成分,采用网络药理学方法探讨平卧菊三七治疗高尿酸血症潜在作用机制。方法通过超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(UPLC-QTOF-MS)联用技术鉴定大鼠入血成分,利用TCMSP、Swiss Target Prediction、Gene-Cards数据库获得入血成分及疾病作用靶点,并通过STRING数据库、Cytoscape软件筛选核心靶点并构建PPI网络图、“入血成分-交集靶点”图;运用DAVID平台进行基因本体(GO)功能富集及KEGG通路富集分析。结果测得平卧菊三七入血成分24个,共筛选得到13个核心靶点、162个生物过程、86条信号通路。结论平卧菊三七可能通过槲皮素、咖啡酸、芦丁、秦皮乙素等活性成分作用于STAT3、RELA、IL6、PTGS2等核心靶点来调控细胞增殖、迁移等多个生物学过程,从而协同发挥治疗高尿酸血症的作用。

百合药材UPLC特征图谱及特征峰QTOF-MS分析研究

目的:建立百合药材超高效液相色谱(UPLC)特征图谱,并采用电喷雾离子源-四极杆-飞行时间质谱(ESI-QTOF-MS)对其特征峰进行定性研究。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL/min,检测波长320 nm,柱温35℃。质谱检测采用负离子模式;电压3.0 kV;离子源温度120℃;雾化温度350℃;雾化气600 L/h。结果:获得百合药材UPLC特征图谱,共有峰19个,鉴定出12个酚性甘油酯类成分,其中6个通过对照品对照确认,6个通过质谱信息推测。结论:建立的UPLC-UV特征图谱可用于百合药材质量评价,为全面控制其质量提供了科学依据。

基于UPLC-QTOF-MS/MS的卷柏化学成分分析

利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(UPLC-QTOF-MS/MS)对中药卷柏的化学成分进行快速分析及鉴定。采用Agilent Poroshell 120 SB-Aq(2.7μm,2.1 mm×100 mm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,进样量为3μL;选择电喷雾离子源分别在正、负离子模式下扫描分析,通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片,对所得成分的主要色谱峰进行鉴定。结果显示从卷柏中共鉴定出54个化学成分,主要包括双黄酮及黄酮类15个、炔酚类12个、酚酸类10个、苯丙素类5个、甾体类2个、萜类2个、氨基酸及肽类2个、酯类2个和其他类4个,并首次探讨炔酚类成分的裂解规律。该研究建立的UPLC-QTOF-MS/MS方法可以快速准确且较全面地分析鉴定卷柏中的化学成分,可为其质量控制及药效物质基础研究提供科学依据。

HPLC-QTOF-MS分析六味地黄丸不同部位的化学成分

目的采用高效液相色谱—四级杆—飞行时间串联质谱(HPLC-QTOF-MS)法对六味地黄丸不同极性溶剂提取部位中的化学成分进行鉴定,并比较不同极性提取部位之间的成分差异。方法色谱分离采用WatersXBridge BEH C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)和0.1%甲酸溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.6 m L·min^(-1);质谱采用电喷雾离子源(ESI),在正负离子模式下扫描采集数据,根据准分子离子及二级碎片离子,并结合对照品及文献报道的质谱数据对六味地黄丸不同极性溶剂提取部位中的化学成分进行鉴定。结果从六味地黄丸的水、50%乙醇、75%乙醇、乙醇、石油醚和混合溶剂提取部位中分别鉴定出41、41、41、40、7和39个化合物。结论本研究首次对六味地黄丸的不同极性提取部位中的化学成分进行了鉴定和对比分析,丰富了六味地黄丸化学成分的结构信息,可为六味地黄丸的药效物质研究提供了科学参考。

UPLC-QTof-MS测定不同提取条件下柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的转化规律

使用UPLC-QTof-MS研究了不同提取条件下柴胡皂苷a、d的转化规律。色谱柱为Acquity UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm,1.7μm）;流动相为乙腈-0.01%甲酸水溶液;流速为0.45 mL/min。以四极杆串联飞行时间质谱（Q-Tof）为检测器,使用负离子检测模式,对经过12种不同提取方法提取的柴胡样品（1~12）进行检测。得到柴胡皂苷a、d不同提取方法下的转化规律：酸性常温条件下水解生成柴胡皂苷b1、b2,酸性加热情况下糖苷键水解生成皂苷元;中性、碱性条件下均较稳定。实验结果对柴胡皂苷a、d的提取、分离、分析提供了参考依据。

柔肝胶囊化学成分的UPLC-ESI-QTOF/MS分析

目的:采用液质联用技术(LC-MS)对中药柔肝胶囊(丹参、姜黄等)中的化学成分进行定性分析。方法:运用AC-QUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)柱,以甲醇-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱;质谱使用ESI离子源,正离子与负离子模式下采集数据。结果:通过Q-TOF/MS正、负离子质谱信息及元素组成分析并结合对照品与相关文献数据对照,共鉴定出19个化合物,主要结构类型为:水溶性酚酸类、姜黄素类、皂苷类及异黄酮类化合物。结论:本法对柔肝胶囊的成分鉴定提供一种快速准确的分析方法。

基于GC-QTOF-MS代谢组学技术研究饲喂不同糖饲料对蜜蜂所产蜂王浆中代谢物组成成分的影响

为研究饲喂不同糖饲料对蜜蜂所产蜂王浆品质的影响,基于气相色谱-四极杆飞行时间质谱代谢组学技术对3种不同糖饲料饲喂条件下(白糖、蜂蜜、高果糖浆)蜜蜂所生产的蜂王浆进行分析。结果表明:与白糖组相比,蜂蜜组脯氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、乳糖、癸酸、L-磺基丙氨酸等含量显著较高(P<0.05);与蜂蜜组相比较,高果糖浆组蔗糖、麦芽糖含量显著较高(P<0.05),而甘油、纤维二糖、异亮氨酸、木糖、羟脯氨酸、乳糖、L-磺基丙氨酸含量显著较低(P<0.05);高果糖浆组与白糖组比较,软脂酸、麦芽糖、苏氨酸、半乳糖含量显著较高(P<0.05),而纤维二糖、松二糖、木糖、乳糖、赤藓糖含量显著较低(P<0.05)。这种由于不同糖饲料饲喂条件而导致的差异可能会对蜜蜂及蜜蜂幼虫生长发育以及蜂王浆品质产生一定的影响,同时为蜂农饲喂方式的选择以及进一步研究影响蜂王浆组成差异的因素提供理论依据。

金花茶花朵和叶片UPLC-QTOF-MS分析

[目的]鉴定分析金花茶花朵和叶片中主要化学成分、含量及其变化特征,为金花茶资源的进一步开发利用提供科学依据。[方法]利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-QTOF-MS)技术定性定量分析金花茶花瓣、雄蕊、老叶和新叶中花青苷、类黄酮及儿茶素类成分与含量。[结果]花青苷天竺葵素-3-O-葡萄糖苷和矢车菊素-3-O-葡萄糖苷均为金花茶中首次发现,其中,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷仅存在于紫红色新叶中。类黄酮木犀草素-7-O-芸香糖苷和染料木苷为金花茶中首次发现,槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷和山柰酚-3-O-葡萄糖苷为金花茶叶片中首次发现。金花茶花瓣与雄蕊中花青苷相差不大,但却低于叶片尤其新叶;花朵中儿茶素类远高于叶片尤其新叶。金花茶花瓣和雄蕊中总黄酮及槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-芸香糖苷和山柰酚-3-O-葡萄糖苷均相差不大,但却远高于叶片。金花茶新叶中主要类黄酮成分木犀草素-7-O-芸香糖苷及总类黄酮明显高于老叶。[结论]金花茶中共鉴定出2种花青苷、6种类黄酮和2种儿茶素;槲皮素-3-O-葡萄糖苷等类黄酮是金花茶花朵呈现黄色的主要原因,矢车菊素-3-O-葡萄糖苷是金花茶新叶呈现紫红色的主要原因。