基于UPLC-QTOF-MS/MS分析的芪葵颗粒化学成分系统筛选与识别

目的系统定性表征芪葵颗粒(黄芪、制首乌、黄蜀葵花)中的化学成分。方法采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)联用分析方法对芪葵颗粒水提液进行分离检测,获取正、负离子模式下的原始分析数据;借助AB Sciex PeakView软件,综合采用靶向和非靶向的筛选方法,对获得的原始分析数据进行处理,系统筛选鉴定芪葵颗粒中的化学成分;以不少于2个准分子离子的同时出现,排除碎片离子的干扰,锁定筛选所得目标化合物;依据准分子离子及特征二级子离子质谱信息,结合标准品比对,并参考数据库搜索匹配和文献数据比对,对锁定的化合物进行鉴定或合理归属。结果从芪葵颗粒中共筛选出89个化合物,鉴定出71个化合物,包括黄酮类45个,皂苷类14个,蒽醌类4个,二苯乙烯苷类3个,多糖类2个,有机酸类3个。鉴定结果表明羟基化、糖基化、葡萄糖醛酸化、乙酰化、甲基化、丙二酰化等多种转化反应参与了芪葵颗粒多样化学成分的形成。结论基于UPLC-QTOF-MS/MS靶向和非靶向相结合的筛选鉴定方法可快速全面表征芪葵颗粒中的主要化学成分及其涉及的转化反应,为深入探讨芪葵颗粒的质量控制、组方优化和药效物质等奠定了基础。

UPLC-qTOF-MS/MS法测定透骨草中有效成分

建立了超高效液相色谱(UPLC)与电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-qTOF-MS)相结合的方法用于快速分离和鉴定透骨草中的成分。样品在ACQUITY UPLC HSS T3 C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)上以0.1%甲酸(溶剂A)和乙腈(溶剂B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.25 mL/min。通过UPLC-qTOF-MS/MS对透骨草进行色谱分析,确定了47个化合物的特征,其中15个化合物通过与参考标准的比较得到了明确的鉴定。为了进行定量分析,使用UPLC-DAD在210,260和326 nm的波长下同时检测了来自12个批次透骨草样品的15种主要化合物。该方法在精密度、重复性、稳定性、准确度等方面进行了验证。本研究为透骨草的整体质量控制提供了潜在的方法。

基于LC/QTOF-MS/MS法鉴定兰考泡桐花化学成分

目的:初步鉴定兰考泡桐花中的化学成分,为该植物的药效物质基础研究提供数据支持。方法:运用液相色谱与四级杆飞行时间质谱联用技术(LC/QTOF-MS/MS),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,在正离子模式下分析。结果:本研究从兰考泡桐花中共鉴定出12个化合物,其中通过与标准品的保留时间和化合物的特征碎片的比对,准确鉴定出5个化合物,分别为芦丁、野漆树苷、木犀草素、芹菜素和熊果酸。另外,通过标准品总结出的裂解规律及相关文献报道,初步鉴定出7个黄酮类成分。结论:本研究基于LC-QTOF/MS的方法对兰考泡桐花所含化学成分进行了表征,为泡桐属的同类植物的物质基础研究提供了有益参考。

DPPH-HPLC-QTOF-MS/MS快速筛选和鉴定杜仲黑茶中抗氧化活性成分

建立DPPH-HPLC-QTOF-MS/MS方法快速筛选、鉴定和测定杜仲黑茶中抗氧化活性成分。杜仲黑茶提取物与DPPH自由基反应30 min后,9个抗氧化活性成分的HPLC峰消失或峰面积明显减少,结合QTOF-MS/MS谱图及与标准品对照,确定抗氧化活性成分为:没食子酸,新绿原酸、原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、表没食子儿茶素没食子酸酯、槲皮素-3-O-桑布双糖苷、芦丁和异槲皮苷。并建立HPLC法同时测定9个抗氧化活性成分的含量。所建立的方法无须繁琐的分离纯化过程,可快速、灵敏、准确、高通量筛选复杂体系中的抗氧化活性成分,并为杜仲黑茶的质量控制提供科学依据。

基于UPLC-QTOF-MS/MS的藏药翼首草不同提取物化学成分比较研究

应用UPLC-QTOF-MS/MS鉴定翼首草化学成分,对其水提取物和醇提取物中差异性化合物进行辨识并进行半定量评价。从4批翼首草药材中共鉴定出48个化合物,其中5个化合物首次在翼首草发现。75%乙醇提取物及水提取物整体化学轮廓差异较大,从中辨识16个差异性化合物,其中4个(rivularicin等)化合物为醇提液中所特有。水提取物中neochlorogenic acid等4个化合物含量较高;75%乙醇提取物中sylvestroside III等8个化合物含量较高。该含量差异是否会对其药效产生影响仍有待进一步研究。

DPPH-HPLC-QTOF-MS/MS快速筛选和鉴定臭牡丹中抗氧化活性成分

通过DPPH自由基清除实验对臭牡丹水提物的抗氧化活性进行评估,并建立DPPHHPLC-QTOF-MS/MS方法快速筛选和鉴定臭牡丹中抗氧化活性成分.臭牡丹水提物与DPPH自由基反应30min后,13个主要抗氧化活性成分的HPLC峰消失,根据抗氧化活性成分的保留时间、紫外吸收特征光谱、质谱裂解规律和诊断离子,以及与标准品对照,初步确定了13个抗氧化活性成分的结构:12个苯乙醇苷类化合物和咖啡酸,其中8个苯乙醇苷类物质为首次在大青属植物中发现,咖啡酸为首次报道存在于臭牡丹中.该方法无需繁琐的分离纯化过程,可对复杂组分中的抗氧化活性物质进行快速筛选和鉴定,为天然产物的质量控制和药效物质基础研究提供了简便、快捷、灵敏的方法.

Identification and characterization of phenolics and terpenoids from ethanolic extracts of Phyllanthus species by HPLC-ESI-QTOF-MS/MS

Phyllanthus species plants are a rich source of phenolics and widely used due to their medicinal properties. A liquid chromatography–tandem mass spectrometry(LC–MS/MS) method was developed using high-pressure liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry(HPLC-ESI-QTOFMS/MS) for the identification and characterization of quercetin, kaempferol, ellagic acid and their derivatives in ethanolic extracts of Phyllanthus species. The chromatographic separation was carried out on Thermo Betasil C_8 column(250 mm×4.5 mm, 5 μm) using 0.1% formic acid in water and 0.1% formic acid in methanol as the mobile phase. The identification of diagnostic fragment ions and optimization of collision energies were carried out using 21 reference standards. Totally 51 compounds were identified which include 21 compounds identified and characterized unambiguously by comparison with their authentic standards and the remaining 30 were tentatively identified and characterized in ethanolic extracts of P. emblica, P. fraternus, P. amarus and P.niruri.

UPLC-QTOF-MS/MS对痛安注射液指纹图谱中生物碱类化学成分的研究

目的：采用液相与四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-QTOF-MS/MS）对指纹图谱中色谱峰进行研究,对痛安注射液中的生物碱类化学成分进行定性鉴别。方法：采用Agilent SBC18RRHD（3 mm×100 mm,1.8μm）色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 m L·min-1,柱温为25℃,进样量为2μL。检测质谱采用电喷雾离子源（ESI）的飞行时间质谱,正离子模式下采集数据,一级质谱质荷比扫描范围m/z 100~1500,二级质谱质荷比扫描范围m/z30~500。结果：痛安注射液的指纹图谱色谱峰中共鉴别出12个成分。结论：本方法快速、准确地鉴定了痛安注射液的指纹图谱中的主要成分,为痛安注射液质量标准的完善提供依据。

基于UPLC-QTOF-MS/MS法的茅苍术与北苍术化学成分分析

目的:建立超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)联用方法,对茅苍术与北苍术的75%甲醇提取物中的化学成分进行定性分析。方法:采用Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18(2.1 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱分离,以0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^-1,柱温25℃,进样体积1μL;检测质谱采用四极杆-飞行时间串联质谱系统(电喷雾离子源ESI),正、负离子模式下采集数据,全扫描的质量扫描范围m/z 50~1500。结果:根据UPLC-QTOF-MS/MS提供的各成分的液相色谱保留时间、精确分子质量和特征碎片离子信息,并结合对照品及相关文献数据比对,从茅苍术与北苍术中均鉴定出78个化学成分,包括16个萜类化合物、10个聚乙烯炔类化合物、25个有机酸类化合物、17个糖苷类化合物、10个其它类化合物。结论:该方法可以快速、准确地对苍术药材中的化学成分进行定性表征,可为苍术的物质基础研究和质量控制提供实验依据。

UPLC-QTOF-MS/MS对乌药中阿朴菲类生物碱炮制前后差异的研究

目的通过UPLC-QTOF-MS/MS对乌药中阿朴菲类生物碱进行鉴别和表征,并考察不同炮制方法对其影响。方法采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(1.7μm,2.1 mm×100 mm),柱温40℃;流动相甲醇-水,梯度洗脱;采用电喷雾离子源,正离子模式下MSE(全信息串联质谱技术)扫描采集,分析生品及炮制品中阿朴菲类生物碱类化合物。结果共鉴别出36种阿朴菲类生物碱。与生乌药比较,经炒制后,阿朴菲类生物碱相对含量下降18个,增加9个;经醋制后,相对含量下降21个,增加6个;经酒制后,相对含量下降21个,增加6个;经盐制后,相对含量下降23个,增加7个。结论炮制后乌药中大多数阿朴菲类生物碱的含量变化显著,可为乌药炮制后功效变化物质基础提供依据。

Development of a validated UPLC-qTOF-MS/MS method for determination of bioactive constituent from Glycyrrhiza glabra

An ultra-performance liquid chromatography quadrupole time of flight mass spectrometry （UPLC-qTOF-MS/MS） method was developed and validated for the simultaneous determination of glycyrrhizin and glycyrrhetic acid. These analytes were separated on a reverse phase C18 column using a mobile phase of acetonitrile：2% acetic acid in water （75：25, v/v） with a flow rate of 200 μL/min. The qTOF-MS was operated under multiple reaction monitoring （MRM） mode using the electrospray ionization （ESI） technique with positive ion polarity. A comparison of three different extraction techniques i.e. accelerated solvent extraction （ASE）, extraction under ultrasonic waves （USW） and the classical extraction by percolation （CE） method was done and quantification of these extracts was also carried out by the proposed method.

应用UPLC-QTOF-MS/MS技术测定肝细胞癌患者血清代谢组

目的通过比较肝细胞癌(HCC)和肝硬化(LC)患者血清代谢物,研究HCC代谢谱变化,为寻找HCC早期诊断标志物及治疗新靶点和策略提供依据。方法收集HCC和LC患者血清各50例,应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-QTOF-MS/MS)对血清代谢物进行鉴定和定量。液相色谱分离采用反相色谱(RPLC)和亲水色谱(HILIC)2种模式,质谱采集包括正、负2种离子化方式。应用Progenesis QI软件进行数据处理,应用EZinfo软件进行主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等多元统计分析并筛选差异代谢物。代谢物鉴定通过检索人代谢组数据库(HMDB)和Metlin数据库实现。应用MetaboAnalyst 4.0对差异代谢物进行代谢通路分析。结果应用UPLC-QTOF-MS/MS技术,共检测到87610个特征代谢峰,鉴定出7848种代谢物。通过P<0.05,变量重要性投影指标(VIP)值≥1及HCC与LC比较的差异倍数≥1.5或≤0.67等3个条件筛选出差异代谢物438个,主要包括磷脂、胆汁酸、游离脂肪酸、小肽和氨基酸等,涉及12个代谢通路的变化。结论与LC患者比较,HCC患者的血清代谢组发生显著变化,共有438种差异代谢物参与12个代谢通路的变化,这有助于发现早期诊断标志物和药物靶标。其中50个差异代谢物具有较高的临床诊断价值,值得进一步验证。另外,本研究近8000个代谢物的鉴定表明,所采用的RPLC结合HILIC分离的UPLC-QTOF-MS/MS技术显著提高了代谢物的鉴定覆盖率,可广泛应用于多领域的代谢组学研究。

Separation, Identification, Isolation and Characterization of Degradation Product of Osimertinib Tablets by UPLC-QTOF-MS/MS and NMR: Evaluation of <i>In-Silico</i>Safety Assessment for Osimertinib (OSM) and Degradation Product (DP)

The present work encompasses identification and characterization of major degradation product (DP) of OSM observed in base hydrolytic stress study. The separation of DP was carried out on a non-polar stationary phase by using high-performance liquid chromatography system (HPLC). Using waters X-bridge (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) C18 column with gradient elution program. For the characterization study, stress samples were subjected to HPLC and UPLC-QTOF-MS/MS and based on mass fragmentation pattern, plausible structure was deduced. Further, the DP was isolated using semi-prepara- tive liquid chromatography and concentrated the fractions using lyophilization. The isolated DP was subjected to extensive 1D (1H, 13C, and DEPT-135) and 2D (COSY, HSQC and HMBC) nuclear magnetic resonance (NMR) studies to authenticate the structure. The impurity was unambiguously named as N-(2-((2-(dimethylamino)ethyl)(methyl)amino)-4-metho-xy-5-((4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)-3-methoxypropanamide. Add- itionally, the In-Silico structure activity relation (QSAR) assessed through statistical based software’s DEREK NexusTM, and MultiCASE, Case UltraTM widely accepted and respected software’s for DP and OSM.

基于UHPLC-QTOF-MS/MS的岭南山竹子果皮化学成分研究

目的:通过超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)对岭南山竹子(Garcinia oblongifolia)果皮的化学成分进行研究。方法:将新鲜的岭南山竹子果皮用70%乙醇回流提取,减压回收溶剂,冷冻干燥得到提取物后,重新溶解到50%甲醇水溶液,经0.22μm微孔滤器过滤进入UHPLC-QTOF-MS/MS分析。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱分离,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,并在全扫描模式进行飞行时间质谱鉴定。结果:通过对高分辨一级和二级质谱数据进行解析,结合参考文献数据并与数据库进行比对,共鉴定了13个化合物,主要为苯甲酮类化合物。结论:该研究结果为科学研发岭南山竹子提供了一定的科学依据。

基于UHPLC-QTOF-MS/MS技术分析玳玳花的化痰活性成分

目的:利用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)技术快速分析玳玳花的化痰的活性成分。方法:以酚红排出量筛选玳玳花不同提取部位祛痰的作用,岛津ARC-C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.7μm),联合质谱分析有效部分的化学成分。结果:玳玳花乙醇提取物具有显著的化痰作用,提取物中初步鉴定了32个化合物,主要为黄酮类和有机酸类。结论:建立了一种基于化痰活性结合UHPLC-QTOF-MS/MS分析鉴定玳玳花的化学成分的快速方法。

UPLC-QTOF-MS/MS快速筛查抗鼻炎类制剂中非法添加3种咪唑啉类化合物

目的:建立抗鼻炎类制剂中3种咪唑啉类化合物(盐酸萘甲唑啉、盐酸羟甲唑啉、盐酸赛洛唑啉)的超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱的快速筛查方法。方法:滴鼻液、鼻炎喷剂、鼻炎膏等不同类型样品经提取过滤后,通过AgilentZORBAXExtendC18色谱柱(2.1mm×50mm,1.8μm)在5min内完成有效分离后,采用电喷雾四级杆飞行时间质谱进行筛查分析。结果:3种化合物的检出限为10.0~26.3ng·mL^-1,在低、中、高3个浓度的平均加标回收率为92.6%~104.0%,相对标准偏差1.68%~4.65%。结论:该方法快速、简便、准确,为抗鼻炎类制剂的高通量快速筛查提供了可靠实用的技术手段。

基于UHPLC-QTOF-MS/MS辨识的侧柏叶炒炭前后化学成分分析

目的:对侧柏叶炒炭前后化学成分进行辨识。方法:采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法(UHPLCQTOF-MS/MS)对侧柏叶及其制备的侧柏炭进行化学成分辨识和比较,色谱条件为ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0~3.5 min,5%~15%B;3.5~6 min,15%~30%B;6~6.5 min,30%B;6.5~12 min,30%~70%B;12~12.5 min,70%B;12.5~18 min,70%~100%B;18~22 min,100%B),进样量5μL,流速0.4 mL·min^(-1);质谱条件为电喷雾离子源,正、负离子全扫描模式采集一、二级质谱数据。利用自建二级质谱数据库及相应裂解规律匹配法对含有MS/MS数据的色谱峰进行物质鉴定。结果:正、负离子模式分别辨识出了77,76种变化趋势一致的物质,侧柏叶炒炭后消失的成分基本为氨基酸类、酮醛等易挥发性成分,而新产生成分包括6种黄酮苷元类(鼠李素,3,6,3’-三羟基黄酮,6,7,3’-三羟基黄酮,4’-羟基-2’-甲基-3,4,5-三甲氧基查尔酮,草质素,3’,5’-二甲氧基-3,5,7,4’-四羟基黄酮),3种香豆素类(7-羟基香豆素,7,8-二羟基香豆素和8-乙酰基-7-羟基香豆素)及3种苯甲酸类(3-甲基苯邻二酚、邻苯二酚、色酮-3-甲酸)。其中辨识出的化学物质中共计黄酮类成分40种(槲皮苷、槲皮素、山柰酚等)。结论:侧柏叶炒炭后化学成分发生了明显的量变和质变,辨识出的主要有效成分黄酮类可为侧柏叶炒炭前后功效变化物质基础的确定提供依据。

基于LC-QTOF-MS/MS的西洋参皂苷类成分表征及其增强免疫力作用谱效关系研究

目的:研究西洋参皂苷类成分指纹图谱与其增强免疫力作用的谱效关系,确定药效物质。方法:采用LC-QTOF-MS/MS建立西洋参皂苷类成分指纹图谱,并进行定性、相对定量分析;以斑马鱼为模式生物测定西洋参增强免疫药效指标值;采用灰色关联度及偏最小二乘相关分析法分析指纹图谱共有峰与增强免疫活性间的谱效关系,确定药效物质。结果:在标定的22个共有峰中,有6个与增强免疫活性具有显著相关性,分别为F1(峰22)、GypenisideⅩⅦ(峰17)、Malonyl-Ra2(峰9)、Rd(峰13)、Rb3(峰11)、20(s)-Rg3(峰19)。结论:本研究借助中药谱效学初步阐释了西洋参皂苷类成分增强免疫作用的药效物质基础,为谱-效相关质量评价系统的建立提供技术支撑。

整合UPLC-QTOF-MS/MS全扫描和模拟MRM方法综合评价茯苓乙醇提取物与后续乙酸乙酯萃取物三萜酸类组分化学一致性

本研究采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS/MS)对茯苓乙醇提取物与后续乙酸乙酯萃取物中三萜酸类成分的化学一致性进行评价。通过全扫描高分辨质谱数据分析,对茯苓的乙醇提取物和后续乙酸乙酯萃取物中的化学组成进行定性比较,结合文献及对照品数据对照,共鉴定出23个主要三萜酸类成分。利用模拟三重四级杆质谱(TQ-MS)的多反应监控(mMRM)模式对上述23个主要成分进行定量或相对定量分析,并计算三萜酸类组分在萃取过程中的转移率和富集率。结果表明,乙酸乙酯萃取物与乙醇提取物化学组成基本一致,萃取过程中三萜酸类成分转移率高,通过萃取可有效富集三萜酸类组分。本研究不但为科学评估后续乙酸乙酯萃取茯苓三萜酸类组分的必要性提供依据,而且为综合评价中药提取物在萃取前后的化学一致性提供了参考方法。

基于UHPLC-QTOF-MS/MS技术的铁筷子中3个香豆素在大鼠体内代谢研究

东莨菪苷(SC-1)、东莨菪内酯(SC-2)和异嗪皮啶(IS-1)是苗药铁筷子中主要活性成分,这3个香豆素类化合物的体内代谢还未报道,该研究对铁筷子中3个香豆素化合物SC-1,SC-2,IS-1在大鼠体内的代谢进行分析。采用超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)技术,大鼠分别尾静脉注射3个香豆素化合物后,鉴定粪便、尿液、血浆中的代谢产物。总共鉴定了3个香豆素原型及其在大鼠体内的11个代谢产物。通过对代谢产物的鉴定分析了其主要代谢途径,发现在大鼠体内这3个香豆素成分发生了葡萄糖醛酸化、磺酸化、还原等代谢反应。对3个香豆素化合物代谢产物的分析,基本阐明了其在体内的代谢过程,为进一步的药理活性及其机制研究提供了依据。