基于UFLC-QTrap-MS/MS结合多元统计分析的不同产地、不同部位乌药中核苷和氨基酸类成分分析

本研究建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS)同时测定乌药中11种核苷类和14种氨基酸类成分的分析方法,并结合多元统计分析比较不同产地、不同部位乌药的质量。采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm×3.5μm),以0.2%甲酸水溶液(A)-0.2%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)进行质谱检测;基于各成分的质量浓度,用方差分析(ANOVA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)、层次聚类分析(HCA)、逼近理想解排序法(TOPSIS)以及灰色关联度分析(GRA),对不同产地、不同部位乌药样品进行综合评价。结果表明,所测成分在一定浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9924;精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率为94.86%~106.47%,相对标准偏差(RSD)均小于4.55%。不同产地、不同部位乌药样品间存在一定的差异,HCA和PCA 2种方法均将样品分为3类。OPLS-DA模型分析通过VIP值共筛选得到6个差异性化合物,分别为尿苷、丙氨酸、胞嘧啶、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤。该方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中核苷和氨基酸类成分的同时测定,为药材质量评价和综合利用提供方法参考。

基于UHPLC-QTRAP-MS/MS结合网络药理学探讨不同厂家龟甲胶中氨基酸含量差异及其抗骨质疏松的潜在机制

比较市面上龟甲胶的质量差异,探索龟甲胶治疗骨质疏松症的潜在活性成分及靶点。我们选取市面上4个厂家共15批次的龟甲胶样品,采用UHPLC-QTRAP-MS/MS检测各龟甲胶中水解氨基酸的含量,多元统计分析各批次中水解氨基酸含量的差异性。采用网络药理学预测龟甲胶的活性成分及治疗骨质疏松症的核心靶点,通过GO与KEGG富集分析预测分子机制,并运用分子对接预测各氨基酸与Hub靶点的结合模式。结果显示,厂家A和D的样品聚类良好,其中A厂家的龟甲胶综合得分最高。17种水解氨基酸中谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、L-羟脯氨酸、赖氨酸、精氨酸、苏氨酸、蛋氨酸的含量差异对龟甲胶质量影响较大。筛选出17个水解氨基酸的175个潜在靶点,68个骨质疏松症核心靶点,其中甘氨酸、丙氨酸为关键成分。GO/KEGG分析核心靶点主要涉及α-氨基酸代谢过程、细胞氨基酸代谢过程、小分子分解代谢过程等生物进程,以及氨基酸合成、精氨酸和脯氨酸代谢、碳代谢等212条信号通路。分子对接则显示2个关键成分甘氨酸、丙氨酸与11个Hub靶点的活性口袋结合较好。综上,市面上不同厂家及批次间的龟甲胶水解氨基酸含量存在一定差异。龟甲胶抗骨质疏松的关键活性成分可能是甘氨酸、丙氨酸,其作用机理可能与CAT、NOS1、GATM等靶点相关,通过影响氨基酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢、碳代谢等途径而起作用。

UPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定连花清瘟胶囊(颗粒)中18种成分及山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙

目的建立UPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定连花清瘟胶囊(颗粒)中连翘苷、连翘酯苷A、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、(R,S)-告依春、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、红景天苷、甘草苷、甘草酸铵,以及山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙的含量。方法该药物40%甲醇提取液的分析采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相(5 mmol/L乙酸铵+0.1%甲酸)-甲醇,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源;正负离子模式扫描;多反应监测模式。结果19种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率89.37%~102.19%,RSD 2.03%~3.75%。各批样品均未检出灰毡毛忍冬皂苷乙。结论该方法简便、准确、高效,可用于连花清瘟胶囊(颗粒)的质量控制及山银花的掺伪鉴别。

基于UFLC-QTRAP-MS/MS技术分析三叶崖爬藤不同部位的多元活性成分

基于三叶崖爬藤不同部位中60种多元活性成分的差异,对不同部位质量进行综合评价。采用超快速高效液相色谱-三重四极线性离子阱质谱联用技术测定三叶崖爬藤块根、茎、叶中60种活性成分的含量,应用多元统计分析方法比较了不同部位间差异活性成分,并对不同部位进行了质量等级排序。含量测定结果显示,60种活性成分总含量在不同部位中的分布规律为叶>茎>块根,分别达到了14263、11583、4603μg/g;主成分分析显示不同部位样本分类明显,差异较大;偏最小二乘回归分析及方差分析显示,8种活性成分可作为区分不同部位的活性成分标志物;灰色关联度分析结果显示,不同部位等级排序为叶>茎>块根,叶的整体质量优于其他两个部位。本实验结果可为三叶崖爬藤不同部位多种活性成分的快速鉴定及质量控制提供方法参考,也为其资源合理开发利用奠定基础。

UPLC-QTRAP-MS/MS结合化学计量学方法鉴别宣木瓜与资丘木瓜

目的 建立超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱法(UPLC-QTRAP-MS/MS)结合化学计量学方法比较宣木瓜与资丘木瓜的差异。方法 采用UPLC-QTRAP-MS/MS技术同时测定木瓜11种水溶性有机酸(莽草酸、奎宁酸、琥珀酸、苹果酸、原儿茶酸、柠檬酸、咖啡酸、丁香酸、阿魏酸、绿原酸和肉桂酸)和3种鞣质(没食子酸、儿茶素和表儿茶素)的含量,结合偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和系统聚类分析(HCA)对实验数据进行综合评价。结果 14个目标成分在相应浓度范围内线性关系均良好。奎宁酸(含量为3.39%~6.34%)、苹果酸(含量为1.19%~12.52%)、莽草酸(含量为0.370%~0.556%)、柠檬酸(含量为0.088%~0.430%)、绿原酸(含量为0.110%~0.397%)的含量较高。PLS-DA结果显示,琥珀酸、苹果酸、奎宁酸、丁香酸、肉桂酸、柠檬酸、咖啡酸和绿原酸为2个产地木瓜样品间的主要差异成分。以PLS-DA筛选的主要差异成分为指标进行HCA分析,结果表明组间距为25时,样品可按产地聚为两类。结论 所建立的UPLC-QTRAP-MS/MS方法结合化学计量学能有效分析宣木瓜与资丘木瓜质量的差异性,为木瓜多成分的快速测定和质量控制提供参考。

改良QuEChERS法结合UPLC-QTRAP-MS/MS技术测定玉米中的伏马毒素B_1、B_2

改进QuEChERS样品制备方法,为玉米中伏马毒素B1、B2的UPLC-QTRAP-MS/MS检测提供良好的分析结果。该方法包括将样品与酸化的乙腈水溶液混合振荡提取,然后使用MgSO4、NaCl进行盐析液体分配,通过用MgSO4、PSA、C18、石墨化碳黑和中性氧化铝分散固相萃取净化,C18色谱柱分离,以甲醇-0. 1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,正模式扫描,采用多反应检测(MRM)-信息依赖采集(IDA)-增强子离子扫描(EPI)模式检测,在线EPI谱库定性分析,外标法定量。结果表明:在10～500μg/L的质量浓度范围内,2种伏马毒素的线性相关系数均大于0. 999,检出限分别为5μg/kg和3μg/kg;添加低、中、高3个水平,2种伏马毒素的平均回收率在89. 11%～104. 61%之间,相对标准偏差在2. 33%～9. 89%之间。与免疫亲和柱法比较发现,两种方法的回收率和特异性差别不大,但是改良的QuEChERS方法更具有时间和成本效益。

UPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定苍耳类药材中酚酸、蒽醌及黄酮类成分

建立了超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱（UPLC-QTRAP-MS/MS）同时测定苍耳草、苍耳子药材中酚酸、蒽醌及黄酮类18种活性成分的方法。采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（250mm×4.6mm×5μm）,以甲醇-0.2%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,柱温为35℃,选择电喷雾离子源（ESI）,负离子多反应监测（MRM）扫描方式检测。结果表明：在一定的浓度范围内,18种目标化合物的线性关系良好,线性相关系数均大于0.999 4,精密度、重复性和稳定性的RSD值均小于3%;加样回收率在96.81%-102.78%之间,RSD小于3%。该方法简便准确、灵敏度高、重复性好,适用于苍耳类药材中多元活性成分的同时测定,可为苍耳类药材内在质量的综合评价和全面控制提供方法参考。

UFLC-QTRAP-MS/MS法同时测定绞股蓝中11种氨基酸

目的建立UFLC-QTRAP-MS/MS法同时测定绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino中苯丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、脯氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、谷氨酸的含有量。方法绞股蓝水提液的分析采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm);以水-乙腈为流动相(含0.2%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.6 m L/min。结果 11种氨基酸在各自范围内线性关系良好(r>0.998 9),平均加样回收率90.74%~103.05%,RSD 0.61%~5.00%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于绞股蓝的质量控制。

UHPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定尖叶假龙胆中7个成分的含量

目的:建立UHPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定尖叶假龙胆中芒果苷、异荭草素、去甲当药醇苷、异牡荆素、当药醇苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮7个成分含量。方法:采用Shim-pack GIST C_(18)(100 mm×2.1 mm,2μm)色谱柱;以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.3 mL/min;柱温为35℃;采用电喷雾离子源(ESI),多反应离子监测(MRM)模式进行负离子监测。结果:上述7个成分之间分离度良好,且分别在一定的浓度范围内与峰面积的线性关系良好(R^(2)≥0.9990),平均加样回收率为98.76%~102.74%,RSD<2.50%,方法重复性、仪器精密度和供试品溶液的稳定性均良好。结论:该方法操作简便,快速,灵敏度高,可用于尖叶假龙胆中成分的含量测定,为尖叶假龙胆药材的质量控制提供了新方法。

UPLC-QTRAP-MS/MS分析不同采收期何首乌核苷类成分动态变化

目的:分析何首乌中核苷类成分积累的动态变化,以确定何首乌的适宜采收期。方法:采用UPLCQTRAP-MS/MS技术测定不同采收期何首乌中9种核苷类成分的含量。结果:何首乌核苷类成分中,以尿苷、腺嘌呤、鸟苷、胞苷含量较高;不同采收期何首乌中核苷类成分含量呈峰谷状变化,12月份含量相对较高。结论:何首乌核苷类成分的积累与生长期密切相关,其积累高峰期与当地传统采收期基本一致。

猪肉中92种兽药残留的UPLC-Qtrap高通量筛查和定量方法的研究

结合简单快速的前处理方法和超高压液相色谱-三重四级杆/线性离子阱串联质谱(UPLC-Qtrap)技术,建立了猪肉中92种兽药残留同时检测的高通量筛查和定量方法。样品经简单快速的前处理后,经Kinetex Core-Shell色谱柱分离,分析时间仅13.5 min。质谱采用多反应监测-信息关联-增强子离子(MRM-IDA-EPI)采集方式及谱库检索技术,通过化合物的保留时间、离子对丰度比以及EPI标准谱库检索对比,可完成对92种兽药的快速筛查和确证。采用基质匹配标准溶液外标法定量。结果表明:在1~50 ng/m L猪肉基质匹配标准溶液浓度范围内呈良好线性关系,相关系数R2均大于0.990;方法定量限均为1 ng/g;在1~10 ng/g的添加浓度范围内92种药物的回收率为50%~120%,批内批间相对标准偏差均小于20%。

QTRAP LC-MS/MS技术在污染事故快速定性中的应用

采用液相色谱-四极杆/线性离子阱复合质谱(QTRAP LC-MS/MS)技术用于污染事故水样中未知农药的快速定性分析。由于QTRAP LC-MS/MS具有较好的灵敏度,样品无需前处理即可进样,大大提高了样品的分析速度。在某次污染事故水样定性分析工作中,该技术的应用非常快速地解决了污染源判定问题,为污染事故的应急处置提供了强有力的技术支撑。

蔬菜中25种农药残留的LC-MS/MS-QTRAP定量定性同时分析方法研究

A high-performance liquid chromatography-electrospray tandem quadrupole mass spectrometry with linear trap detection method for the quantify and determination of a lot of pesticide residues in vegetable is described. The pesticide were extracted from more vegetable(such as new ginger,garlic,shallot) with acetonitrile and the extract purified by SPE(solid phase extract). To set up EPI(enhance product ion) MS library.LC-MS/MS limit of detection (LOD) based on a signal/noise ratio of 3,was estimated to be 1 μg/kg for all pesticides. The overall average recovery in twenty-five compounds spiked vegetable was 70%-115%. LC-MS/MS-QTRAP has shown itself to be a senitive,selective and rapid method and was successfully used for the quantify and confirmation analysis of more pesticides in more difference vegetable samples for regulatory purposes.

QTRAP^(TM)系统实现定性定量检测的完美结合——访美国应用生物系统公司亚太区质谱产品部总监高醇新

高醇新博士,1989年获美国东北大学分析化学博士学位,后在美国HemaGen从事博士后研究,在美国生物技术和药物研发领域有9年工作经验。1997年加入美国应用生物系统(AB)公司,从事技术支持和市场开发,2006年起任AB公司亚太区质谱产品部总监。质谱仪又称质谱计,是根据带电粒子在电磁场中能够偏转的原理,按物质原子、分子或分子碎片的质量差异进行分离和检测物质组成的一类仪器。根据所用质量分析器的不同,

新型QTRAP^(TM)四极杆-线性离子阱串联质谱仪的特点及应用

本文介绍新型QTRAPTM 四极杆 -线性离子阱串联质谱仪的基本原理和主要性能 ;并简述在药物筛选及代谢产物分析。

QTRAP LC-MS/MS方法分析头发中氯胺酮结构类似物

目的建立头发中氯胺酮结构类似物的液相色谱-四极杆/线性离子阱质谱(QTRAP LC-MS/MS)的检测方法。方法将洗净晾干的20 mg头发加入1 mL提取液冷冻研磨后冰浴超声提取,离心取上清液过滤膜后,经ACQUITY UPLC®HSS T3色谱柱分离,采用多反应监测模式同时测定10种氯胺酮结构类似物。以该方法分析20例阳性头发样本中乙基氟胺酮、去甲氟胺酮和替来他明的含量。结果头发中10种氯胺酮结构类似物在0.01~2.00ng/mg范围内线性关系良好,相关系数>0.99,回收率为89.1%~106.1%,基质效应为88.3%~106.0%。20例阳性头发样本中乙基氟胺酮的含量范围为0.02~8.35 ng/mg,平均值1.59 ng/mg,中位值0.40 ng/mg;去甲氟胺酮的含量范围为0.01~0.94 ng/mg,平均值0.28 ng/mg,中位值0.19 ng/mg;替来他明的含量范围为0.02~10.93 ng/mg,平均值2.69 ng/mg,中位值2.11 ng/mg。结论本方法简便、高效、可靠,适用于头发中氯胺酮结构类似物的检验。样本数据为氯胺酮结构类似物的管控、鉴定提供了一定参考。

基于流动注射-Qtrap质谱技术的九里香属植物的鉴别分析

本文采用流动注射(flow injection,FI)技术结合Qtrap质谱(Qtrap-MS)特有的分步多离子监测扫描方式(step-wise multiple ion monitoring,step-wise MIM),首次对8种九里香属Murraya植物进行了较为快速的鉴别区分。每个样品分析仅需要5 min,便可检测约600个化合物。将质谱信息经过处理后,采用多元统计软件进行分析,发现九里香组sect.Murraya和棕茎组sect.Bergera植物各自聚集,分类明显,表明两组植物间的化学成分存在差异。进一步对质谱数据进行分析,发现其能直观反映不同植物中的成分类别:其中九里香和翼叶九里香主要含有香豆素类成分,千里香富含多甲氧基黄酮,棕茎组植物则主要含有咔唑生物碱类成分,与作者之前对该属植物的系统化学成分分析结果一致。总之,本研究证实FI-Qtrap-MS技术可用于药用植物的快速鉴别,实现同属植物的快速区分,为其化学分类学提供参考,同时该技术也为中药材的质量评价提供新方法。

心脉安的UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS定性分析和UHPLC-QTRAP-MS/MS含量测定

目的应用UHPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术分析心脉安中的化学成分,同时建立一种快速同时测定心脉安中15种成分含量的UHPLC-QTRAP-MS/MS方法。方法采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相系统进行梯度洗脱,采用加热电喷雾离子源(HESI),正、负离子模式下采集数据,分析推定心脉安化学成分。并采用Waters ACQUITY UPLC CSH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,电喷雾离子源(ESI),采用多反应监测模式(MRM)正负离子同时对心脉安中15个成分进行定量分析。结果根据精确相对分子质量数据和多级质谱碎片离子,结合对照品比对或文献报道,共从心脉安中分析推定109个主要化学成分,包括31个三萜类(主要是三萜皂苷类)、25个黄酮类、15个苯丙素类、13个甾体、9个单萜类、7个醌类、9个其他类化合物。在优化的液相-质谱条件下,人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、丹参素、丹酚酸B、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮II_(A)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷、芍药苷、芍药内酯苷、麦冬皂苷D、鲁斯可皂苷元在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.9958),平均加样回收率(n=6)为91.8%~106.5%,RSD为1.9%~4.5%,精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于4.6%。结论该研究基本阐明了心脉安的化学物质基础,建立的UHPLC-QTRAP-MS/MS含量测定方法,重复性和专属性好,稳定可控,可用于心脉安的质量控制。

前体离子扫描超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法快速筛查化妆品中非法添加的磺胺类药物

磺胺类药物(SAs)为化妆品中禁用物质。采用超高效液相色谱-三重四级杆/复合线性离子阱串联质谱(UPLCQTrap),利用前体离子-增强子离子扫描(PIS-IDA-EPI)模式,用于快速筛查化妆品中非法添加的SAs。选择三个碰撞诱导解离形成的产物离子m/z 92,m/z 108,m/z 156,对12种化妆品基质中的20个SAs进行PIS-IDA-EPI扫描分析,检出限LODs为0.05~0.1μg/g,该方法在12批次化妆品加标样品中进行了验证,并测定了60批次化妆品样品,以确保其有效性、灵敏度和选择性。实验结果表明:UPLC-QTrap结合PIS-IDA-EPI采集模式是一种有效的筛查方法,并成功应用于化妆品样品中目标和非目标SAs的快速筛查。

基于UHPLC-QTRAP-MS/MS的石斛中氨基酸和核苷类成分分析与评价

使用超高效液相色谱-三重四极杆离子阱质谱联用技术(UHPLC-QTRAP-MS/MS)快速、准确、高效直接测定8种不同石斛(共9批次)中21种氨基酸和10种核苷类成分的方法,结合多元统计分析进行综合质量评价,为石斛资源综合利用提供科学依据。使用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm),以0.2%甲酸水-0.2%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1,柱温30℃;电喷雾离子源(ESI)正离子模式下,多反应监测(MRM)模式测定。采用主成分分析(PCA)和逼近理想点排序法(TOPSIS)对实验数据进行综合评价。21种氨基酸和10种核苷类被测成分在一定浓度范围内线性关系均良好,相关系数大于0.999,稳定性、精密度、重复性RSD均小于3.0%,加样回收率在93.31%~107.5%,RSD 1.1%~3.7%。PCA结果显示,以氨基酸为指标,评分最高为霍山石斛(S1);以核苷类成分为指标,评分最高为铁皮石斛(S6);TOPSIS法中Ci最大差异达68.7%,综合评价显示霍山石斛整体品质最优。该实验方法准确、快速、高效;熵权TOPSIS分析方法将多维问题转变为一维问题,提高了决策分析的准确性与科学性。为进一步探索评价石斛品种的内在质量及控制提供依据,同时为其资源的进一步开发与利用提供借鉴。