β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的高效表达

目的:构建高效表达β-甘露聚糖酶的毕赤酵母工程茵,研究重组菌的产酶水平。方法:从魔芋地土壤中筛选出1株高产β-甘露聚糖酶的菌株;生理生化鉴定及16S rDNA测序结果为芽孢杆菌,命名为Bacillus sp.QYW-1(GenBank登录号JX524224);以Bacillus sp.QYW-1基因组DNA为模板,克隆获得一段1 084 bp的β-甘露聚糖酶基因manW(GenBank登录号JX869490),其编码360个氨基酸,分子量40 kD,属糖苷水解酶家族26;SignalP4.0分析含一段25个氨基酸的信号肽,将优化设计的β-甘露聚糖酶基因序列插入表达栽体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-manW;BglⅠ酶切线性化后电转化Pichia pastorisGS115中。结果:经大量筛选,获得高效表达的茵株manW1,摇瓶发酵结果:该酶最适pH 6.5,最适温度37℃,具有良好的热稳定性和耐酸性,酶活达1 180 U/mL。结论:重组酶具有良好的应用前景。