半枝莲抑制人肝癌QGY-7701细胞增殖研究

目的探讨半枝莲抑制人肝癌QGY-7701细胞的初步机制。方法MTT法检测半枝莲作用后QGY-7701细胞增殖的改变,光、电镜观察其形态变化,流式细胞仪检测其凋亡细胞比例、细胞周期的变化及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas表达。结果半枝莲能抑制QGY-7701细胞的增殖,作用72h后,细胞呈现凋亡早期形态;凋亡细胞增多;G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多;Bax表达增强,Bcl-2表达减少,Fas表达变化不明显。结论半枝莲可抑制QGY-7701细胞增殖,可能与通过激活Bcl-2基因家族抑癌基因、诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期有关。

德氮吡格对人肝癌细胞株QGY-7701增殖和凋亡的影响

目的 观察德氮吡格(TNBG)对人肝癌细胞株QGY- 770 1的作用,初步探讨TNBG抗肿瘤作用机制。方法 运用3H- Td R掺入法、MTT法检测TNBG对肿瘤细胞的抑制增殖和细胞毒作用,光镜及透射电镜观察药物处理后细胞形态的改变,流式细胞仪分析细胞周期阻滞和产生凋亡的情况。结果 2μg/ ml TNBG作用2 4 h即对QGY- 770 1细胞有明显的增殖抑制作用,而其细胞毒作用则呈时间、剂量依赖性,光镜下发现大量脂滴潴留在胞浆,电镜观察证实胞浆中存在脂滴聚积,流式细胞仪检测到细胞阻滞于G2 / M期,并有明显的细胞凋亡。结论 TNBG能抑制肿瘤细胞增殖,将肿瘤细胞阻滞于G2 / M期,并诱导其发生凋亡,从而达到抗肿瘤的效应。

三种斑蝥素盐类物质对肝癌QGY-7703细胞生长的抑制作用

目的考察斑蝥素酸镁、斑蝥素酸钠及斑蝥素酸钾,三种斑蝥素的盐类物质对肝癌QGY-7703细胞增殖的抑制作用。方法采用WST-1比色法测定三种斑蝥素盐类物质对肝癌QGY-7703细胞的生长抑制率。结果三种斑蝥素盐类物质对肝癌QGY-7703细胞的生长具有显著的抑制作用,抑制率随药物浓度升高其抑制作用增强,呈剂量效应关系。其半数抑制率IC50分别为9.48、33.80、35.04μmol/L。结论斑蝥素酸镁对肝癌QGY-7703细胞的抑制作用明显好于斑蝥素酸钠和斑蝥素酸钾,具有开发潜力。

斑蝥素对HL-60细胞和QGY7703细胞的作用研究

采用MTT法和流氏细胞仪技术 ,研究了斑蝥素对HL - 6 0细胞和QGY770 3细胞的存活率和细胞周期分布影响。结果表明 ,斑蝥素对HL - 6 0细胞的IC50 是 15 .34μmol/L ,对QGY770 3细胞的IC50 是 18.5 4μmol/L。斑蝥素处理HL - 6 0细胞和QGY770 3细胞 2 4h后 ,G2 -M期细胞分布都有所增加 ,G0 -G1期细胞分布都有所降低 ;斑蝥素处理HL - 6 0细胞2 4h后 ,G0 -G1期峰前有亚二倍体峰出现 ,说明斑蝥素在所用剂量下能够诱导HL - 6

红景天甙体外诱导人肝癌QGY-7703细胞凋亡研究

【目的】探讨红景天甙(Salidroside)体外诱导人肝癌QGY-7703细胞凋亡的作用及其可能的机制。【方法】以体外培养的人肝癌QGY-7703细胞作为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测红景天甙对QGY-7703细胞生长的抑制作用,采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术,分析红景天甙对QGY-7703细胞凋亡的诱导作用;采用Western blot免疫印迹法探讨红景天甙诱导QGY-7703细胞凋亡的可能机制。【结果】MTT比色法试验结果表明,0.01,0.1,1,10和100μg/mL红景天甙对QGY-7703细胞生长均有不同程度的抑制作用,细胞生长抑制率分别为13.2%,21.9%,31.4%,46.8%和60.9%,半数抑制质量浓度(IC50)为18.56μg/mL;用10μg/mL红景天甙处理QGY-7703细胞48 h,AO/EB荧光双染后,可观察到个别QGY-7703细胞呈现亮绿色或橘红色,表明细胞发生了凋亡;琼脂糖凝胶电泳结果显示,10μg/mL红景天甙作用QGY-7703细胞24,48和72 h均可导致细胞核内DNA产生有序断裂,形成DNA梯形带;流式细胞术试验结果表明,10μg/mL红景天甙的加入量为100和200μL时,QGY-7703细胞凋亡数分别为178和331个,相应的凋亡率分别为1.8%和3.5%,阴性对照组(10μg/mL红景天甙加入量为0μL)凋亡细胞数为105个,凋亡率仅为1.1%;Western blot免疫印迹分析结果表明,红景天甙下调了Bcl-2和PCNA蛋白的表达量,而使凋亡活化基因Bax与肿瘤抑制基因p53的蛋白表达量增高。【结论】红景天甙对体外培养的QGY-7703细胞具有明显的生长抑制作用和诱导凋亡作用,其诱导凋亡作用与Bcl-2家族成员、p53、Bax和PCNA基因调控有关。

菹草类胡萝卜素提取物对人肝癌细胞QGY-7703凋亡的影响

分别用含10、20、40、60μmol/L的菹草类胡萝卜素提取物(CEPC)培养液处理人肝癌细胞(QGY-7703)48h、96h和144h,在这三个处理时间各剂量组对肝癌细胞的抑制率平均值范围分别为0.14%-23.07%、39.59%-70.61%和71.65%-87.01%。经10、20和40μmol/L的CEPC培养液处理肝癌细胞24h、48h和72h,用激光扫描共聚焦显微术(LSCM)观察细胞形态,出现了肝癌细胞数量明显减少,细胞体积缩小、皱缩变形,细胞核呈现“新月状”、条状甚至碎片状,细胞核中呈黄色的DNA面积较明显地减小等典型的凋亡细胞形态特征。以流式细胞术分析用CEPC处理肝癌细胞后各时相细胞的百分比,与对照组比较,用10μmol/L和20μmol/L浓度的CEPC处理肝癌细胞48h后,使细胞周期中的G_0/G_1期的细胞比例极显著增加(P<0.01),分别增加了23.8%和35.6%,而在G_2/M期没有明显的变化,在S期则相应减少。用LSCM测定了肝癌细胞内的Ca^(2+)浓度,与对照组比较,经20μmol/LCEPC处理48h后能引起细胞内Ca^(2+)浓度极显著上升(P<0.01),剂量组细胞内Ca^(2+)荧光强度为对照组的1.5倍。以上结果表明CEPC对人肝癌细胞QGY-7703的增殖具有明显的抑制作用,且在一定程度上呈时间-效应和剂量-效应依赖关系。在较短的时间内及使用较小的CEPC剂量能有效地诱导肝癌细胞凋亡,CEPC使肝癌细胞阻滞于G_0/G_1期发生凋亡。CEPC能极显著提高肝癌细胞内的Ca^(2+)浓度,提示Ca^(2+)浓度升高可能是CEPC诱导肝癌细胞发生调亡的重要原因。本项研究结果为进一步研究和开发菹草类胡萝卜素的功能和价值打下了重要基础。

塞来昔布诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的研究

目的探讨塞来昔布体外诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的作用。方法设立空白对照组(培养液中不加任何药物)及塞来昔布5、25、50、100、150μmol.L-1 5个剂量组,作用时间分为24、48、72 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察塞来昔布不同浓度和作用时间对QGY-7701细胞生存率的影响,选择合适的作用时间和3个剂量再做其他凋亡方法的检测;采用Hoechst 33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化;采用双荧光染色(AnnexinV-EGFP/PI)流式细胞检测、末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)检测、DNA含量分析(检测细胞周期)等方法多指标检测细胞凋亡率。结果通过Hoechst 33258染色可以从细胞形态上看出塞来昔布诱导QGY-7701细胞凋亡,而Annexin V-EGFP/PI流式细胞检测、TUNEL检测、细胞周期及MTT检测结果显示随着塞来昔布浓度升高和作用时间延长,凋亡率升高(P<0.05,P<0.01)。结论塞来昔布有诱导肝癌细胞QGY-7701凋亡,抑制其生长的作用,具有治疗肝癌的潜在功能。

高三尖杉酯碱对HL-60细胞和QGY7703细胞的作用研究

采用MTT法和流氏细胞仪技术 ,研究了高三尖杉酯碱对HL -60细胞和QGY770 3细胞的存活率和细胞周期分布影响。结果表明 ,高三尖杉酯碱对HL -60细胞的IC50 是 1 .2 8umol.L-1,对QGY770 3细胞的IC50 是 0 .5 5umol.L-1。高三尖杉酯碱处理HL -60细胞 2 4h后 ,G0 -G1期细胞分布有所增加 ,G2 -M期和S期细胞分布有所降低 ;高三尖杉酯碱处理QGY770 3细胞 2 4h后 ,G2 -M期分布略有降低 ,G0 -G1期细胞分布略有增加 ;高三尖杉酯碱处理HL -60细胞2 4h后 ,G0 -G1期峰前有亚二倍体峰出现 ,说明高三尖杉酯碱在所用剂量下能够诱导HL -60细胞发生凋亡。

人肝癌细胞株QGY-7701蛋白质组学研究技术及二维电泳图谱的建立

目的:建立人肝癌细胞株QGY-7701蛋白质组学研究技术。方法:利用两种不同的裂解液提取细胞蛋白,进行双向电泳,经PDQuest软件分析与比较后,挑选匹配良好的10个蛋白点,进行基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的鉴定。结果:建立了稳定的人肝癌细胞株QGY-7701的双向电泳图谱,裂解液Ⅱ比裂解液Ⅰ提取的蛋白质量多25%,2-DE胶上蛋白点数多32%,从10个候选蛋向中鉴定出9个有意义的蛋白(P<0.05)。结论:初步建立了人肝癌细胞株QGY-7701的蛋白质组学研究技术,为进一步开展药物蛋白质组学研究奠定基础。

10-HCPT对人肝癌细胞QGY和HepG2生长增殖的抑制作用

目的 :探讨 10 -HCPT对人肝癌细胞QGY和HepG2生长增殖的影响。 方法 :分别用不同浓度 10 -HCPT作用QGY和HepG2细胞 4 8h和相同浓度作用不同时间 ,以MTT法检测细胞生长指数 (GI) ,软琼脂克隆形成试验检测细胞克隆形成率。结果 :10～ 36 0 μg/ml和 30～ 36 0 μg/ml 10 -HCPT分别作用QGY和HepG2细胞 4 8h后 ,均有显著性生长抑制作用 (P<0 .0 5 ) ,且呈量效依赖关系。 10 0 μg/ml10 -HCPT作用 2 4h、36、4 8和 72h对两种细胞均具有显著性抑制作用 (P <0 .0 5 )。实验组两种细胞克隆形成率较对照组均显著降低 (P <0 .0 5 )。结论 :10

纤连蛋白对人肝癌细胞系QGY-7703细胞分化及细胞周期的影响

用流式细胞光度术等细胞生物学技术,研究纤连蛋白(FN)对人肝癌细胞系QGY-7703细胞分化及细胞周期的影响。结果表明,FN抑制其细胞增殖和有丝分裂,对照组和实验组间差异有显著性(P<0.05);细胞形态向正常细胞逆转,细胞被阻断在S期。作者认为FN可能是一种具有潜在治疗肝癌的药物。

生长激素受体在Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株中的表达

目的了解Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与RT鄄PCR法检测GHR在Bel鄄7402与QGY-7701肝癌细胞株的表达。结果7402肝癌细胞可表达GHRmRNA,在蛋白表达水平放射性配体法发现GHR在此肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891,平衡解离常数为0.63±0.04583nmol/L;未发现7701肝癌细胞株表达GHR。结论7402肝癌细胞株表达GHR,可为将来研究rhGH与原发性肝癌的增殖关系奠定一些实验基础。

大蒜素联合阿霉素诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡

目的:观察大蒜素与阿霉素联合应用对人肝癌细胞QGY-7701的作用效果,并探讨其机制。方法:不同浓度大蒜素与阿霉素单独及联合作用于人肝癌QGY-7701细胞后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数(CI),流式细胞仪(FCM)检测QGY-7701细胞凋亡率,吖啶橙(AO)荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果:单独应用时大蒜素与阿霉素的中效浓度分别是56.0mg/L和4.9mg/L,联合用药时下降为23和2.3mg/L,CI=0.887,为协同效应。大蒜素与阿霉素单独及联合应用均可导致QGY-7701细胞出现凋亡的形态学变化。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。结论:大蒜素与阿霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡,协同抑制人肝癌细胞生长。

二氢丹参酮Ⅰ对 QGY-7703 细胞和 SPC-A-1 细胞放射敏感性的影响

利用体外细胞集落形成法研究二氢丹参酮Ⅰ对肿瘤细胞放射敏感性的影响。实验表明，二氢丹参酮Ⅰ对人肝癌细胞株（ＱＧＹ７７０３）和人肺腺癌细胞株（ＳＰＣＡ１）有较强的细胞毒作用，半致死剂量ＬＤ５０分别为８．８６μｍｏｌ／Ｌ和７．７３μｍｏｌ／Ｌ。该药物与Ｘ射线联合作用能增强细胞对射线的敏感性，１μｍｏｌ／Ｌ的二氢丹参酮Ⅰ作用于有氧细胞１ｈ后照射，对ＱＧＹ７７０３细胞和ＳＰＣＡ１细胞的增敏比（ＳＥＲ）分别为１．４２和１．６２；ＱＧＹ７７０３细胞和ＳＰＣＡ１细胞的氧增比（ＯＥＲ）分别为２．０８和３．０３。１μｍｏｌ／Ｌ的二氢丹参酮Ⅰ在乏氧状态下对这两种细胞亦有放射增敏作用，ＱＧＹ７７０３细胞的ＳＥＲ仍为１．４２，而ＳＰＣＡ１细胞的ＳＥＲ增大为１．９６。在分次照射实验中，１μｍｏｌ／Ｌ的二氢丹参酮Ⅰ能完全抑制这两种细胞的亚致死性损伤修复（ＳＬＤＲ）。

QGY-7701肝癌细胞株中癌-睾丸抗原GAGE-1基因的表达

目的研究癌-睾丸抗原GAGE-1基因mRNA在QGY-7701肝癌细胞株中的表达情况。方法运用反转录聚合酶链反应技术检测肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因mRNA的表达,并与正常肝组织比较。结果肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因呈阳性表达,正常肝组织中GAGE-1基因呈阴性表达。结论 GAGE-1基因具有作为诊断肝癌的分子标记和免疫治疗肝癌的特异性靶位的潜在价值。

阿霉素诱导肝癌QGY-7701细胞凋亡的研究

观察阿霉素对人肝癌细胞株QGY-7701的凋亡诱导作用。实验用阿霉素处理QGY-7701细胞后,用台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性;光镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞凋亡形态;DNA琼脂糖凝胶电泳技术观察分析细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果显示,阿霉素处理QGY-7701细胞后,出现了明显的凋亡现象,而且随着药物浓度的增加,细胞凋亡的趋势越明显。分析结果可知,阿霉素作用QGY-7701细胞48 h的IC50值为4.9μg/mL。流式细胞仪检测出阿霉素处理QGY-7701细胞的凋亡率逐渐上升。综上所述,阿霉素可以诱导QGY-7701细胞出现凋亡的现象。

呫吨酮并吡啶衍生物XP-15联合紫杉醇对耐药肝癌细胞QGY-7701的体外抑制作用

目的:探索呫吨酮并吡啶衍生物XP-15联合紫杉醇对人肝癌QGY-7701耐药细胞株的体外抗肿瘤作用。方法:运用CCK8法、Transwell实验和流式细胞仪检测凋亡技术观察细胞功能学变化,运用Western Blot蛋白免疫印迹技术探索其可能的作用机制。结果:XP-15可明显增强紫杉醇对耐药QGY-7701细胞的抑制作用,XP-15联合紫杉醇作用于耐药QGY-7701细胞24 h后,QGY-7701细胞活力明显减弱,且其侵袭迁移能力明显降低,同时流式细胞仪凋亡检测提示细胞凋亡百分比明显增加。Western Blot蛋白免疫印迹亦证实细胞抗凋亡蛋白bcl-2表达明显降低,肝癌增殖分化相关PI3K及AKT蛋白分子表达减少。结论:XP-15具有增敏紫杉醇诱导耐药QGY-7701细胞凋亡同时抑制其增殖活力的作用,其作用机制可能与下调PI3K-AKT通路活性,同时减少bcl-2抑制凋亡蛋白表达相关。

基因芯片技术分析斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制

目的 :研究抗癌药斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制。方法 :应用基因芯片技术检测 12 .5 μmol/ L 斑蝥素作用于肝癌 QGY770 3细胞 2 4 h后基因表达谱的变化。结果 :斑蝥素抑制细胞表达参与细胞周期进程基因 (如 p 2 7、ref - 1、DN Apolymerase delta、X RCC9等 )、能量代谢基因 (如 malate dehydrogenase、ADP/ ATP translocase等 )、致瘤活性基因 (如 c- myc、tre等 )以及肿瘤特异表达基因 (如 bladder cancer related protein等 )。相反 ,斑蝥素促进了多种细胞生长抑制基因 (如 BCRA2、BTG2、dual- specificity protein phosphatase等 )以及凋亡相关基因 (如 ATL - derived PMA- responsive peptide等 )的表达。 结论 :斑蝥素改变调控细胞周期进程、细胞增殖。

姜黄素对人实体瘤细胞和白血病细胞作用的比较

目的 探讨姜黄素对人急性髓系白血病HL 60细胞及肝癌细胞 (QGY)增殖、细胞周期的调控及细胞凋亡的影响 ,并比较它对HL 60、QGY的作用效果。方法 采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对HL 60、QGY的抑制作用 ,流式细胞仪分析细胞周期分布 ,透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 姜黄素可抑制HL 60、QGY细胞的生长 ,其抑瘤率与药物浓度和作用时间呈依赖关系 ,72h的中效浓度 (IC50 )分别为 2 4 8μmol L、49 5 μmol L ;流式细胞仪分析证实姜黄素能使HL 60细胞聚积在S期、G2 M期 ,凋亡峰为 8 65 %,使QGY细胞聚积在S期 ,凋亡峰为 10 84%;电镜观察发现姜黄素可导致HL 60细胞胞浆内有明显脂肪变性 ,导致QGY细胞变性、坏死 ,诱导细胞凋亡。结论 姜黄素对HL 60的抑瘤效果更明显 ,它主要通过抗增殖作用 ,抑制HL 60细胞的生长 ;对QGY细胞 ,主要通过诱导肿瘤细胞凋亡 。

强骨饮对骨吸收参数TRACP5b及Crosslaps的影响

目的:观察强骨饮对骨吸收参数指标血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP5b)、血清I型胶原C末端肽(Crosslaps)的影响。方法:选择了住院治疗的原发性骨质疏松症患者99例,随机均分为强骨饮组、福善美对照组和仙灵骨葆对照组3组,每组各33例。治疗组给予强骨饮,每天1剂,早晚2次服用;福善美组给予福善美70mg,每周1次口服;仙灵骨葆组给予仙灵骨葆胶囊,每天2次,每次3粒口服;其中强骨饮组、福善美组3个月为1个疗程,仙灵骨葆组6周为1个疗程。各组在疗程结束后,经体检无异常,继续下1个疗程,各组均经12个月治疗。于服药前及服药后1个月、3个月、6个月、12个月,用酶联免疫法测得血清I型胶原C末端肽(Crosslaps)、血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP5b)。结果:用药1个月后,各组Crosslaps、TRACP5b值较疗前即有明显下降(P<0.05);用药3个月后,治疗组骨代谢指标下降非常明显(P<0.01),基本达到正常值;用药6个月后,治疗组骨代谢指标与福善美组比较有统计学意义(P<0.05);用药12个月后,治疗组骨代谢指标与对照组比较,均有统计学意义(P<0.05)。结论:强骨饮能够明显降低血清中的Crosslaps和TRACP5b的数值,阻止骨量丢失,抑制过高的骨转换,使骨的代谢达到新的平衡,提高骨质量,具有明显的抑制骨吸收的作用。