基于P38/JNK通路探讨七福饮保护高糖诱导HT22细胞损伤的作用机制

目的:研究七福饮含药血清对高糖诱导作用下小鼠海马神经元细胞(HT22细胞)的损伤保护作用。方法:确定高糖培养液最适造模浓度;将雄性大鼠预留10只作为正常对照组,其余20只灌胃七福饮8.6 g/kg。灌胃7 d后大鼠腹主动脉采血,制备浓度为5%、10%、15%七福饮含药血清;将各浓度含药血清作用于HT22细胞48 h后以细胞计数试剂(CCK-8)法检测细胞活力;以CCK-8法检测七福饮含药血清对高糖诱导下HT22细胞的活力;以流式细胞术Annexin-V PI细胞双染法检测HT22细胞凋亡率;提取HT22细胞蛋白,聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)试剂盒测定蛋白浓度;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测高糖诱导下HT22细胞相关蛋白表达。结果:选择75 mmol/L高糖干预细胞48 h作为最适造模浓度。与正常对照组相比,模型对照组细胞活力显著降低,细胞密度显著降低,细胞凋亡率显著升高,磷酸化JNK、P38蛋白、BAX、Caspase-3蛋白表达显著上调,BCL2蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组相比,5%、10%七福饮含药血清组细胞活力均显著升高,细胞密度显著升高,细胞凋亡率显著下降(P<0.01);半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、磷酸化P38蛋白(p-P38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达明显下调(P<0.05或P<0.01),B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:七福饮可通过调节P38/c-Jun氨基末端激酶通路(JNK)信号通路,从而改善高糖诱导的HT22细胞损伤和凋亡。

七福饮对AD模型大鼠AGEs/RAGE/NF-κB通路的影响

目的:研究七福饮对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的阿尔兹海默病(AD)模型大鼠AGEs及其受体(RAGE)-NF-κB信号通路的影响,探讨其抗AD作用及其机制。方法:采用双侧海马定位注射AGEs诱导AD大鼠模型,给予七福饮治疗30d后,westenblot检测大鼠海马组织AGEs、RAGE、NF-κB和IL-1β水平。结果:七福饮(2.15、4.3、8.6g/kg)可显著降低模型大鼠海马内AGEs、RAGE、NF-κB和IL-1β的表达。结论:抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路的激活及其所介导的炎症反应是七福饮抗AD作用可能的机制。

基于网络药理学和体内实验探究七福饮治疗2型糖尿病认知障碍的分子机制

目的:通过网络药理学探讨七福饮改善2型糖尿病(Type 2 Diabetes,T2DM)认知障碍的作用机制,并通过动物体内实验验证分析。方法:通过TCMSP平台和文献研究的方法筛选七福饮活性成分,在Swisstarget平台和TCMSP平台预测出药物活性成分对应靶点,在GeneCard、OMIM等数据库检索T2DM认知障碍靶点。利用韦恩图得到药物-疾病交集靶点,用Cytoscape3.7.2软件分别构建“中药-活性成分-靶点”作用网络及PPI网络。用R语言对交集靶点进行GO和KEGG分析。结合网络药理学分析结果,采用链脲佐菌素STZ 30 mg/kg联合高脂高糖诱导建立T2DM认知障碍大鼠模型,验证七福饮改善T2DM认知障碍可能的分子机制。结果:确定七福饮治疗T2DM认知障碍的活性成分221个,治疗靶点561个。PPI网络拓扑分析筛选得到30个核心靶点,其中包括蛋白激酶(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素6(IL-6)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)等。GO分析表明靶点主要涉及营养水平反应、细胞钙离子稳态等多种生物过程;KEGG分析提示AGE-RAGE糖尿病并发症信号通路在七福饮治疗T2DM认知障碍过程中起着关键作用。动物实验表明,与正常对照组相比,模型对照组血糖含量、逃避潜伏期和海马DG区细胞凋亡数明显升高、p-P38、p-JNK、BAX、Caspase3蛋白表达明显上调,穿越平台次数及Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,七福饮4.3、8.6 g/kg组能明显降低血糖含量、降低逃避潜伏期和海马DG区细胞凋亡数、明显下调p-P38、p-JNK、BAX、Caspase3蛋白表达,明显上调穿越平台次数及Bcl-2蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:提示七福饮可能通过调节AGE-RAGE信号通路上相关蛋白表达改善T2DM认知障碍,这些结果可为七福饮的临床应用提供理论基础和依据。