清胰Ⅱ号方对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的探讨清胰Ⅱ号方对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肠黏膜屏障功能的影响。方法选取48只SD大鼠制备SAP模型,造模后随机分为模型组及清胰Ⅱ号方治疗组(治疗组),每组24只。另选取8只大鼠作为假手术组。造模后麻醉苏醒即开始干预,治疗组给予清胰Ⅱ号方(1mL/100g)灌胃,假手术组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,各组灌胃均6h/次,干预后6、12、24h每组取8只大鼠,开腹后测腹水量,测血清二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)及D-乳酸浓度;取胰腺及回肠做病理检查,并进行胰腺病理评分;取回肠做扫描电镜检查。结果假手术组无腹水,胰腺及回肠病理无明显异常。与假手术组比较,模型组6h时腹水量、DAO、D-乳酸、病理评分均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组6～24h时DAO、D-乳酸、病理评分逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.05),镜下见组织结构紊乱、间质水肿、出血,大量中性粒细胞浸润,局部灶性或片状肠坏死。与本组12h比较,模型组24h腹水量增多,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组6～24h时D-乳酸、病理评分逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.05),与本组12h比较,治疗组24h腹水量增多,DAO升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组同期比较,治疗组6～24h各指标均降低,差异均有统计学意义(P<0.05),镜下见肠黏膜组织水肿、充血,少量中性粒细胞浸润,程度较模型组轻。结论清胰Ⅱ号方对SAP大鼠肠黏膜屏障功能有保护作用。

清胰Ⅱ号对香猪重症急性胰腺炎胰肺损害的保护作用

目的 观察重症急性胰腺炎 (severeacutepancreatitis ,SAP)模型血浆淀粉酶、内毒素、IL 1β、IL 6、肺、胰腺的变化及清胰Ⅱ号对其的保护作用。 方法 用 16只贵州香猪 ,雌雄不拘 ,随机分为 2组 ,各组n =8:生理盐水 (NS)组 ;中药清胰Ⅱ号 (ChineseMedicineQingyiⅡ ,CMQ)组。推注 5 %牛磺脱氧胆酸钠 (0 .5ml/kg体重 )复制SAP模型。分别于制模前 ,制模后 1、6、12、2 4、4 8、72、96h采静脉血 ,检测血浆中淀粉酶、内毒素、IL 1β、IL 6浓度。光镜下 ,观察胰、肺组织的病理变化。 结果 CMQ可减轻SAP猪的胰腺及肺的病理性损伤 ,可减轻胰出血、坏死程度和减轻肺间质水肿、肺泡毛细血管壁缺血、缺氧程度 ,显著降低各时间点 (除制模前、制模后 1小时外 )血浆内毒素浓度和血清淀粉酶、IL 1β、IL 6的浓度 (P <0 .0 1)。结论 清胰Ⅱ号可减轻内毒素血症 ,抑制内毒素对全身各器官、组织的损伤 ;减少早期炎症介质IL 1β、IL 6的产生 ,减轻其引发的一系列损伤反应。对胰肺有保护作用。

清胰Ⅱ号颗粒剂对急性坏死性胰腺炎大鼠肠道细菌移位的影响

目的观察清胰Ⅱ号颗粒剂对急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)大鼠肠道细菌移位的影响并探讨其机理。方法将18只SD大鼠随机等分为假手术组、ANP组及治疗组,每组6只;ANP组及治疗组以30g/L牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管制作大鼠ANP模型,造模术后1h,治疗组以250g/L清胰Ⅱ号颗粒剂灌胃给药(10mL/kg),6h1次,共3次,假手术组及ANP组用同等剂量生理盐水以相同方式灌胃。造模后24h,取大鼠肝脏、胰腺、脾脏、肠系膜淋巴结组织及回肠内容物行细菌培养及菌种鉴定,用real-time PCR检测回肠组织中高迁徙率族蛋白-1(high mobility group box1,Hmgb1)mRNA表达,ELISA测定回肠组织中一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)浓度,同时观察胰腺、回肠组织病理改变,测定回肠组织湿/干重比值。结果ANP组胰腺、回肠组织损伤明显,回肠组织Hmgb1mRNA的表达较假手术组上调(P<0.01),NO、ET-1浓度较假手术组升高(P<0.01),分别为(1.67±0.21)μmol/L、(102.18±9.19)ng/L,细菌移位至肝脏、胰腺、脾脏及肠系膜淋巴结;治疗组回肠组织中Hmgb1 mRNA的表达较ANP组下调(P<0.01),NO、ET-1浓度较ANP组降低(P<0.05),分别为(1.39±0.23)μmol/L、(83.15±5.39)ng/L,回肠病理损害程度减轻,细菌移位减少。结论Hmgb1、NO及ET-1浓度在ANP模型大鼠肠道细菌移位中可能具有重要作用,清胰Ⅱ号颗粒剂可能通过下调回肠组织中Hmgb1 mRNA的表达,降低NO、ET-1浓度,减轻胰腺、回肠组织的病理改变,从而抑制肠道细菌移位。

高效液相色谱法测定鼠用清胰Ⅱ号颗粒剂后血中大黄素变化

目的研究大鼠灌胃给予清胰Ⅱ号颗粒剂后,其效能成分大黄素在大鼠体内的药代动力学过程。方法大鼠单次灌服不同剂量(2.5g/kg及5.0g/kg)的清胰Ⅱ号颗粒剂后,以高效液相色谱(HPLC)法测定其血浆中不同时间点的大黄素浓度,采用DAS2.0药代动力学软件拟合处理药代动力学参数。结果大鼠血浆中大黄素质量浓度在0.1563～10.0000ng/mL范围与峰面积线性关系良好,平均回收率为99.41%,并计算出了相应的药代动力学参数。结论单次灌服不同剂量的清胰Ⅱ号颗粒剂后,大黄素在大鼠体内的药代动力学过程符合二室模型,吸收慢,消除也慢。

清胰Ⅱ号对急性胰腺炎的保护作用研究

目的探讨清胰Ⅱ号对急性胰腺炎(AP)大鼠的保护作用,以及对ROS/JNK通路和有关炎症因子的影响。方法将36只SD大鼠随机分为3组,其中,假手术组12只,另外24只SD大鼠复制AP模型,模型复制成功后,根据随机数字表法,分为模型组和干预组,每组12只。干预组大鼠给予清胰Ⅱ号(1 ml/100 g)灌胃,模型组给予生理盐水(1 ml/100 g)灌胃。干预结束后,检测胰腺病理评分,NF-κB核转位水平,TNF-α、IL-6、IL-1β水平,胰腺组织活性氧自由基(ROS)水平,磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和JNK水平。结果假手术组胰腺病理评分低于干预组(P <0.05),干预组胰腺病理评分低于模型组(P <0.05)。模型组和干预组TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、p-JNK、JNK水平高于假手术组(P <0.05),但干预组低于模型组(P<0.05)。干预组NF-κB核转位率低于假手术组和模型组(P<0.05)。结论清胰Ⅱ号对AP大鼠胰腺的保护作用机制可能是减少NF-κB核转位水平,下调ROS/JNK通路,降低TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平。

清胰Ⅱ号对雨蛙素诱导的急性胰腺炎小鼠Nrf2相关基因水平的影响

目的研究清胰Ⅱ号对雨蛙素所致小鼠急性胰腺炎的保护作用及其机制。方法雄性昆明种小鼠32只,随机分为空白对照组、模型组、清胰Ⅱ号低剂量组(10 g/kg)及清胰Ⅱ号高剂量组(20 g/kg),每组8只。给药7 d后,采用雨蛙素制模。观察清胰Ⅱ对胰腺指数、血清胰淀粉酶含量、胰腺组织的形态学变化及胰腺组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶(HO-1)、谷胱甘肽合成的限速酶(Gclc)基因的mRNA水平的影响。结果与空白组比较,模型组胰腺指数及血清胰淀粉酶水平显著升高(P<0.05),胰腺组织出现明显水肿及坏死,同时胰腺组织中Nrf2、Nqo1基因的mRNA水平显著增高(P<0.05)。与模型组比较,清胰Ⅱ号给药组胰腺指数及血清中胰淀粉酶水平显著降低(P<0.05),胰腺组织水肿和坏死明显减轻,胰腺组织中Nrf2、Keap1、Nqo1、HO-1、Gclc基因的mRNA水平较模型组显著增高(P<0.05)。结论清胰Ⅱ号对蛙素诱导的小鼠急性胰腺炎有预防保护作用,其机制可能与进一步上调胰腺组织中Nrf2、Keap1、Nqo1、HO-1、Gclc的水平有关。

清胰Ⅱ号临床与实验研究现状分析

清胰Ⅱ号是治疗急性胰腺炎的有效中药复方,临床应用已有30多年历史。近年来也积极开展清胰Ⅱ号的基础实验研究,现从组方分析、临床应用、实验研究(药效学及作用机制、药剂学、药动学)等方面,对清胰Ⅱ号的研究现状进行分析总结,为医院制剂及新药研发提供参考。

清胰Ⅱ号颗粒剂对大鼠重症急性胰腺炎肝损伤的保护作用

目的探讨NF-κB在重症急性胰腺炎(SAP)合并肝损伤过程中的作用,并观察清胰Ⅱ号颗粒剂对重症急性胰腺炎肝损伤的保护作用。方法 24只SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、胰腺炎组(B组)、清胰Ⅱ号治疗组(C组)。A组仅开腹不制作SAP模型,B、C组以3%牛磺胆酸钠逆行注入大鼠胆胰管制作SAP模型,C组给予清胰Ⅱ号治疗,造模后于24 h取材。取肝组织采用电泳迁移率试验(EMSA)法检测NF-κB活性,ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8,同时观察血淀粉酶、肝功能;余肝组织浸入10%甲醛溶液以便病理检查。结果 A组肝组织中几乎测不到NF-κB活性,与A组比较B组肝组织NF-κB活性明显增高(P<0.05),B组血清IL-1、IL-6、IL-8浓度也异常升高(P均<0.05);血清AST、ALT、LDH也显著升高(P均<0.01);C组与B组相比,肝组织NF-κB活性显著下降(P<0.01);同时血清IL-1、IL-6、IL-8浓度也显著下降(P均<0.01),血清AST、ALT、LDH显著降低(P均<0.01)。C组肝组织病理损害较B组减轻。结论肝组织NF-κB活化参与了大鼠SAP肝损伤的发病过程,清胰Ⅱ号颗粒剂可以减轻SAP肝损害,其机制可能为抑制NF-κB活性,减少炎性递质释放。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨清胰汤对重症急性胰腺炎肺泡上皮细胞损伤的修复机制

目的:探究Wnt/β-catenin信号通路在重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤发病机制中的作用及清胰汤(QYD)的干预机制。方法:将40只大鼠分为假手术(Sham)组、Sham+QYD组、SAP组和SAP+QYD组。采用经胆胰管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠建立SAP大鼠模型,造模48 h后取胰腺和肺组织,苏木素-伊红(HE)染色检测组织病理损伤,真空干燥法检测肺湿/干重比值(W/D),ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6水平,TUNEL试剂盒和蛋白免疫印迹法(WB)检测肺组织凋亡情况。免疫荧光法检测CyclinD1、β-catenin与SFTPC双染情况。WB法检测肺组织中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和下游细胞周期蛋白的表达。结果:与Sham组相比,SAP组大鼠HE切片显示胰腺和肺部病变严重,IL-6含量明显升高,SFTPC表达减少,提示肺泡上皮细胞严重损伤。与SAP大鼠相比,清胰汤治疗后大鼠胰腺和肺组织病理评分、W/D等各项指标均有不同程度改善,IL-6含量减少,凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和下游细胞周期蛋白表达明显上调,免疫荧光双染结果显示清胰汤治疗组出现更多的双染细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:清胰汤通过激活Wnt/β-catenin信号通路减少肺泡上皮细胞凋亡,进而在促进急性胰腺炎相关肺损伤修复中发挥关键作用。

漂白土洗胃联合清胰Ⅱ号导泻对口服百草枯中毒兔的治疗观察

目的探讨漂白土洗胃联合清胰Ⅱ号导泻对口服百草枯中毒兔的治疗作用。方法成年健康日本大耳白兔30只，按照随机数字表法分为对照组、模型组、洗胃组（10%漂白土混悬液洗胃）、导泻组（清胰Ⅱ号导泻）、联合组（漂白土混悬液洗胃后10 min行清胰Ⅱ号导泻）5组，每组6只。一次性灌胃百草枯溶液100 mg/kg（用生理盐水稀释至5 mL）制备急性中毒模型；对照组灌胃等量生理盐水。各治疗组于灌胃1 h后进行相应治疗，连续3 d。观察动物存活情况；于中毒后1、2、4、8、24 h取耳缘静脉血，用紫外分光光度计检测血浆百草枯浓度；于中毒后8 d静脉注射空气处死动物取右肺下叶，苏木素-伊红（HE）染色，观察肺组织病理学改变。结果①存活情况：中毒后2 d各组兔存活数为联合组（6只）＞洗胃组（5只）＞导泻组（2只）＞模型组（0只），7 d存活数为联合组（5只）＞洗胃组（3只）＞导泻组（0只），差异均有统计学意义（P＜0.001和P＝0.003）。②血浆百草枯浓度：各组血浆百草枯浓度的吸收高峰在中毒后2 h，但洗胃组、导泻组、联合组血浆百草枯浓度均已明显低于模型组（mg/L：1.830±0.068、1.890±0.048、1.800±0.052比1.960±0.063，均P＜0.01）；随治疗时间延长，血浆百草枯血中浓度下降幅度为联合组＞洗胃组＞导泻组（均P＜0.01）；析因分析联合组4 h时洗胃和导泻出现交互作用〔F＝5.194，P＝0.034，百草枯浓度（mg/L）为0.670±0.057比1.010±0.018、1.210±0.052〕。③肺组织病理学改变：模型组、导泻组肺泡壁毛细血管明显扩张充血，肺泡间隔增宽，可见大量炎性细胞浸润；洗胃组、联合组肺损伤病理改变较模型组明显减轻，且联合组较洗胃组改善更明显。结论早期采用漂白土混悬液洗胃联合清胰Ⅱ号导泻能降低口服百草枯中毒兔血浆百草枯浓度，改善肺损伤程度，明显提高存活率，较单一洗胃、导泻治疗效果更好，对改善动物预后有协同作用。

清胰Ⅱ号对小鼠胆汁淤积性肝损伤的保护作用

目的:本研究旨在探讨清胰Ⅱ号对胆管结扎造成的胆汁淤积性肝损伤的保护作用及其机制。方法:昆明种小鼠随机分为假手术组,模型组,低、高剂量清胰Ⅱ号组(0.5,1.0 g·kg-1),连续ig给药7 d后,采用胆管结扎(BDL)术制备小鼠肝脏胆汁淤积性肝损伤模型,制模后72 h麻醉处死动物,收集血液和肝脏观察各组生化指标和肝组织病理学改变以及实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测肝脏胆酸代谢通路相关基因的mRNA水平的表达。结果:与假手术组比较,模型组丙氨酸氨基转移酶(ALT),碱性磷酸酶(ALP),总胆汁酸(TBA),总胆红素(TBIL)水平均显著增高,肝组织病理显示在大量中性粒细胞浸润、肝细胞水肿、变性和坏死,同时胆酸合成基因胆固醇7α-羟化酶(Cyp7a1),甾醇12α-羟化酶(Cyp8b1),类法尼酯衍生物X受体(FXR),小分子异源二聚体伴侣(SHP),牛磺胆酸钠协同转运蛋白(Ntcp)mRNA表达均降低(P<0.05);与模型组比较,给药组可降低ALT,ALP活性和TBA,TBIL水平,改善其病理损伤,上调上述基因mRNA水平(P<0.05)。结论:清胰Ⅱ号对胆汁淤积性肝损伤具有保护作用,通过作用于肝脏中与胆汁酸合成和转运相关的基因表达,以维持胆汁酸的稳态。

清胰Ⅱ号颗粒在大鼠体内药动学研究

目的:研究大鼠ig给予清胰Ⅱ号颗粒,其有效成分大黄素在大鼠体内的药动学过程。方法:大鼠分别ig给予不同剂量(2.5、5.0 g·kg^(-1))的清胰Ⅱ号颗粒,采用高效液相色谱法在不同时间点测定血浆中大黄素浓度,并计算药动学参数。结果:给予不同剂量药物的大鼠血浆中大黄素的t_(1/2α)分别为(9.468±8.46)、(21.68±17.867)h;t_(1/2β)分别为(15.388±5.46)、(39.63±24.39)h;t_(max)分别为(2.500±3.479)、(5.333±3.266)h;C_(max)分别为(0.058±0.004)、(0.101±0.007)mg·L^(-1);CL分别为(33.027±9.365)、(9.405±5.846)L·h^(-1)·kg^(-1);AUC(0-∞)分别为(0.652±0.201)、(1.364±0.267)mg·h^(-1)·L^(-1),其动力学过程符合二室模型。结论:建立了大鼠血浆中大黄素浓度检测方法,得到了相关药动学参数,可为清胰Ⅱ号颗粒后续药动学-药效学研究奠定理论基础。

急性胰腺炎肺损伤时肺组织Ⅱ型分泌型磷脂酶A2表达及清胰汤的干预作用

目的 探讨重症急性胰腺炎（SAP）诱发急性肺损伤（ALI）时肺组织Ⅱ型分泌型磷脂酶A2（sPLA2-Ⅱ）的表达及清胰汤的干预作用.方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、清胰汤干预组,每组10只.采用胰胆管逆行注射去氧胆酸钠建立SAP诱发ALI模型;假手术组仅剖腹翻动胰腺.清胰汤组于制模后30 min和12 h分别给予清胰汤10 ml/kg灌胃.术后24 h各组进行血气分析,测定血清淀粉酶、sPLA2含量及肺组织湿/干重（W/D）比值;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹法（Western blotting）测定肺组织sPLA2-Ⅱ的mRNA和蛋白表达,并观察肺、胰组织病理变化.结果 与假手术组比较,模型组动脉血氧分压（PaO2）、pH值显著降低[PaO2（mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa）：79.24±5.84比96.78±3.81,pH值：7.269±0.054比7.391±0.054],动脉血二氧化碳分压（PaCO2）、血清淀粉酶、肺W/D比值、血sPLA2显著升高[PaCO2（mm Hg）：47.57±2.55比27.69±1.02,血清淀粉酶（U/L）：7 144.19±727.91比1 193.41±192.54,肺W/D 比值：8.57±2.45比3.70±0.90,血sPLA2（nmol·min^-1·ml^-1）：45.13±6.0比29.94±6.39],肺sPLA2-ⅡmRNA（1.28±0.21比0.80±0.08）和蛋白表达显著升高（均P〈0.05）.与模型组比较,清胰汤组PaO2、pH值明显升高[PaO2：（88.16±5.07） mm Hg,pH值：7.322±0.039],PaCO2、血清淀粉酶、肺W/D比值、血sPLA2明显降低[PaCO2：（33.13±2.14） mm Hg,血清淀粉酶：（4 283.51±527.52） U/L,肺W/D比值：4.05±0.52,血sPLA2：（28.00±4.78） nmol·min^-1·ml^-1],且肺sPLA2-ⅡmRNA（0.89±0.08）和蛋白表达显著降低（均P〈0.05）.清胰汤组肺、胰组织病理改变较模型组明显减轻.结论 SAP时肺组织sPLA2-Ⅱ表达增高可能是ALI的发病机制之一;清胰汤可能在转录水平抑制sPLA2-Ⅱ的表达,从而保护肺功能.