清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌细胞免疫逃逸的影响

目的 研究清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌细胞(SiHa细胞)免疫逃逸的影响,探讨清毒栓提取物治疗宫颈人乳头瘤病毒感染的免疫机制。方法 选择均匀成团生长的jurkat细胞,使用SiHa上清液培养jurkat细胞48小时,采用染色质免疫沉淀技术检测SiHa细胞上清液处理后jurkat细胞中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead boxP3,Foxp3)含量。取Foxp3高表达的T细胞模型,用血清药理学方法制备的清毒栓含药血清和对照血清进行干预,采用染色质免疫沉淀技术、实时荧光定量PCR法、流式细胞术分别检测jurkat细胞中Foxp3蛋白表达水平、Foxp3转录水平,以及Foxp3阳性细胞比例。结果 SiHa上清液可以显著增加jurkat细胞中Foxp3含量(P<0.05),且处理48小时效果最为显著;jurkat细胞经清毒栓含药血清处理后,细胞中的Foxp3蛋白表达显著下调(P<0.05);在含药血清浓度为15%和20%时,Foxp3的蛋白表达量最低,但两者无明显差别(P>0.05);清毒栓含药血清可以显著降低jurkat细胞模型中Foxp3转录和蛋白水平以及Foxp3阳性细胞数(P<0.05)。结论 清毒栓含药血清通过抑制jurkat T细胞中的Foxp3转录和蛋白表达,降低Foxp3阳性细胞数及Treg细胞比例,从而抑制宫颈SiHa细胞的免疫逃逸,增加机体对宫颈SiHa细胞的免疫反应性。

清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞MDM2基因的影响

目的研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓对抑制宫颈癌SiHa细胞生长的作用机制。方法以不同浓度清毒栓含药血清培养液作用于SiHa细胞,并设立空白血清及含中、西药阳性对照药血清为对照,通过MTT法检测清毒栓对细胞生长增殖的影响;用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测,并用RT-PCR法半定量检测原癌基因MDM2表达。结果经清毒栓含药8%的血清培养液作用后细胞数量减少,其中以血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白组比较,差异有显著性(P<0.01);细胞周期各时相中,清毒栓含药血清S期细胞所占的比例明显减少,对细胞凋亡有影响,但未见明显规律性,RT-PCR结果示清毒栓含药血清细胞中MDM2表达明显减少。结论清毒栓含药血清不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过下调MDM2基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤的目的。

清毒栓血清药理对宫颈癌SiHa细胞P53基因调控作用的研究

[目的]研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓抑制宫颈癌SiHa细胞生长的作用机制。[方法]以不同浓度含药血清培养液作用于SiHa细胞,并以空白血清及含中、西药阳性对照药血清为对照,通过噻唑蓝(MTT)法检测该药对细胞生长及增殖的影响;用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测对抑癌基因P53表达的影响。[结果]经含药血清培养液作用后细胞数量减少,其中以8%浓度含药血清作用72h时对细胞抑制作用最强;细胞周期各时相中,S期细胞所占的比例明显减少;对细胞凋亡有影响但未见明显规律性,RT-PCR结果示细胞中P53表达明显增加。[结论]清毒栓含药血清不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过调控P53基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤的目的。

鼻咽清毒颗粒药物血清体外对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的:探讨鼻咽清毒颗粒药物血清(Biyan Qingdu Granula drug-containing serum,BQG-DS)对体外培养的鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、TWO3、C666-1细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:将SD大鼠随机分为3组,实验组(灌胃鼻咽清毒颗粒)、阳性对照组(灌胃环磷酰胺)、阴性对照组(灌胃生理盐水),动物给药后采血,提取制备含药血清。运用MTT法检测作用药物血清后细胞增殖的改变,并用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的改变,同时结合倒置显微镜,观察其诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用。结果:鼻咽清毒颗粒可抑制CNE1、CNE2、TWO3、C666-1细胞的增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;同时可诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于G1期。结论:鼻咽清毒颗粒可诱导鼻咽癌细胞凋亡,改变细胞周期分布,从而抑制细胞增殖。

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞产生免疫相关细胞因子的影响

目的探讨中药清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞产生免疫相关细胞因子的影响。方法选取SPF级SD大鼠雌性30只[体重(220±10)g],分成两组,分别用纯净水和中药灌胃处理后抽血提取含药血清,设立空白对照组(0%含药大鼠血清)、清毒栓低、中、高剂量组(浓度分别为1%、4%、8%含药大鼠血清),采用q-PCR法检测细胞IL-2、IL-8、TNF-α、IFN-γ的基因表达情况,采用Western Blot法检测SiHa细胞内IL-8、TNF-α的蛋白表达情况。结果不同剂量的清毒栓含药血清在12 h、24 h、48 h对宫颈癌SiHa细胞免疫相关细胞因子的基因表达均有一定促进表达作用,其中以IL-8、TNF-α在8%浓度含药血清给药后12~24 h内呈现显著上升的趋势(P<0.05);细胞内IL-8、TNF-α蛋白表达量在高剂量组给药后48 h呈现显著上升的趋势。结论高剂量清毒栓含药血清可显著诱导免疫相关细胞因子IL-8、TNF-α基因的表达,并能够使细胞内IL-8、TNF-α蛋白的表达量增加,其作用机制可能是通过促进相关基因的表达量来增加相应细胞因子蛋白的表达。

参芪清毒胶囊对血液透析患者残余肾功能保护作用的临床观察

目的观察参芪清毒胶囊对血液透析患者残余肾功能(residual renal function, RRF)的保护作用。方法选取2016年1月～2017年6月在我院行血液透析的慢性肾功能衰竭患者160例,随机分为两组,每组80例。两组患者均给予常规维持性血液透析,对照组采取常规降压、纠正贫血等基础药物治疗,治疗组在对照组基础上加服中成药参芪清毒胶囊。测定两组患者治疗前以及治疗1个月、2个月、3个月和6个月后血肌酐(serum creatinine, Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、胱抑素C(Cystatin C,Cys-C)、日均尿量、RRF等指标。结果治疗前两组患者Scr、BUN、Cys-C比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗1个月后,治疗组Scr、BUN、Cys-C有明显下降(P<0.05),对照组下降不明显(P>0.05);治疗2个月、3个月和6个月后两组Scr、BUN、Cys-C均有明显下降(P<0.05),且治疗组低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前两组患者日均尿量、RRF比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗1个月后两组日均尿量下降不明显(P>0.05),RRF较治疗前均有明显下降(P<0.05);治疗2个月、3个月、6个月后两组日均尿量、RRF较治疗前均有明显下降(P<0.05),且对照组下降更为明显,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪清毒胶囊联合常规血液透析治疗可以保护慢性肾功能衰竭患者RRF,增加尿量,缓解病情,具有一定临床推广意义。

基于PINK1/Parkin信号通路探讨芪莲益髓清毒颗粒对急性髓系白血病Molm-13细胞线粒体自噬的调控作用

目的:探讨芪连益髓清毒颗粒(QLYS)通过PINK1/Parkin信号通路对急性髓系白血病(AML)Molm-13细胞线粒体自噬的调控作用。方法:体外培养Molm-13细胞株,大鼠灌胃QLYS后制备含药血清。采用空白血清和不同浓度的QLYS含药血清分别干预Molm-13细胞,观察各组细胞的增殖情况、ATP水平、ROS水平,PINK1、Parkin、P62和LC3的变化水平。此外,采用MDC法检测自噬荧光强度,并用自噬抑制剂3-MA进行反向验证。结果:QLYS含药血清可显著抑制Molm-13细胞增殖(P<0.05,P<0.01),提高ROS水平和MDC荧光强度(P<0.01,P<0.05),降低ATP水平(P<0.05,P<0.01),增强PINK1、Parkin和LC3表达(P<0.05,P<0.01),降低P62表达(P<0.01),3-MA可降低QLYS含药血清诱导的自噬水平(P<0.05)。结论:QLYS可通过激活PINK1/Parkin信号通路促进Molm-13细胞线粒体自噬。