清肺通络方对MPP小鼠Th17细胞信号途径调控作用的研究

目的探讨中药清肺通络方对支原体肺炎(MPP)小鼠Th17细胞信号途径的调控作用。方法选取BALB/c小鼠45只,随机分为正常组、模型组、阿奇霉素组、清肺通络方组和中西医结合组,以MP国际标准株(MPFH)滴鼻造模,第2天开始治疗,治疗3 d后检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-17、IL-6、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,以及肺组织孤儿核受体(RORγt)、NF-κBp65蛋白定量。结果 (1)MPP小鼠BALF中IL-17、IL-6、TGF-β1水平均显著升高,清肺通络方对各指标的调节作用均优于阿奇霉素,联合应用效果最好。(2)MPP小鼠肺组织RORγt、NF-кBp65蛋白表达均增高,清肺通络方对RORγt和NF-κBp65蛋白的调节作用均优于阿奇霉素,联合应用效果最好。结论清肺通络方可调节MPP小鼠Th17细胞效应因子IL-17及其上下游转录因子IL-6、TGF-β1、RORγt、NF-κBp65。

清肺通络方对肺炎支原体诱导A549细胞氧化应激损伤的影响及作用机制研究

目的探讨清肺通络方对肺炎支原体(MP)感染人类肺泡基底上皮细胞(A549细胞)后氧化应激损伤的影响及其可能的机制。方法取A549细胞分为空白组、MP感染组(MP浓度为1×10^(7)CFU·mL^(-1))、不同浓度清肺通络方组(清肺通络方浓度分别为0.5 mg·L^(-1)、1.0 mg·L^(-1)、2.0 mg·L^(-1)),于清肺通络方处理3 d时,以倒置显微镜观察各组细胞形态学改变,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光染色法检测不同组细胞内活性氧(ROS)含量,Western blot检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、胞浆伴侣分子(Keap1)、醌氧化还原酶(NQO1)表达水平。取A549细胞分为空白组、MP感染组、MP+siNC组、MP+清肺通络方组、MP+siNrf2组、MP+siNrf2+清肺通络方组,于清肺通络方处理3 d时进行细胞转染,Western blot检测Nrf2、Keap1、HO-1、NOQ1表达水平。结果适宜浓度的清肺通络方可上调MP感染后A549细胞内Nrf2、Keap1、HO-1和NOQ1蛋白表达,降低细胞内ROS水平,从而抑制细胞凋亡。抑制Nrf2表达后,清肺通络方的抗氧化效应降低。结论清肺通络方可减轻MP感染后A549细胞氧化损伤,其机制可能与调控Nrf2/抗氧化响应元件(ARE)信号通路有关。

清肺通络法治疗小儿支原体肺炎

目的 :观察中西医结合治疗小儿支原体肺炎(MPP)的疗效。方法 :将80例患儿按随机数字表法分成两组各40例,西医治疗组采用阿奇霉素基础治疗,中西医结合治疗组在西医治疗组基础上,口服清肺通络方,并结合中医外治法。随访治疗后第15天、第30天、第90天,观察患儿恢复情况及MP抗体情况,并进行分析。结果 :随访第90天西医治疗组复发率47.5%,中西医结合治疗组复发率25.0%,中西医结合治疗组随访第90天复发率低于西医治疗组(P<0.05),血清MP抗体,两组Ig M抗体滴度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中西医结合治疗小儿支原体肺炎远期疗效较好。

清肺通络方调控NLRP3炎症小体对支原体肺炎影响的细胞实验研究

目的探讨肺炎支原体(MP)在体外感染A549细胞后,诱导NLRP3炎症小体引起的免疫炎症反应与NLRP3炎症小体对A549细胞凋亡的调控作用,以及清肺通络方(QTF)对NLRP3炎症小体的调节及其对下游相关细胞因子IL-18、IL-1β的干预作用。方法将QTF采用醇提法提取后,加入MP感染的A549细胞中,使用CCK-8实验检测不同浓度(0.1,0.5,1,2,4 mg/L)和不同时间点(24,48,72 h)的QTF,并制备抑制/过表达NLRP3质粒,根据CCK-8实验所测得的最佳药物浓度,将实验进行分组,检测NLRP3炎症小体各组成蛋白ASC、Caspase-1、NLRP3表达,细胞因子IL-18、IL-1β的表达水平以及A549细胞凋亡率。结果MP感染A549细胞后,使得A549细胞NLRP3炎症小体各组成蛋白ASC、Caspase-1、NLRP3表达量上升,下游相关炎症细胞因子IL-18、IL-1β表达水平升高明显,说明NLRP3炎症小体可以被MP激活,并且产生一系列的炎症反应,且流式细胞术检测发现MP感染A549细胞后,细胞凋亡率上升。经清肺通络方干预后,NLRP3炎症小体各组成蛋白ASC、Caspase-1、NLRP3表达量下降,下游相关炎症细胞因子IL-18、IL-1β表达水平显著降低,说明清肺通络方可以抑制被激活的NLRP3炎症小体,从而使下游炎症细胞因子IL-18、IL-1β下调,且流式细胞术检测发现使用清肺通络方后,细胞凋亡率下降。结论MP感染A549细胞后,可以激活处于抑制状态的NLRP3炎症小体,并且产生一系列的免疫炎症反应,增加下游炎症因子的释放,增加细胞凋亡率。清肺通络方可以下调NLRP3炎症小体,减轻炎症反应,抑制细胞凋亡,并且清肺通络方对NLRP3炎症小体的调控作用有浓度依赖性,浓度越大,保护作用越明显。

清肺通络方对肺炎支原体肺炎TGF-β、IL-1β表达的影响

目的:验证肺炎支原体(MP)感染人肺微血管内皮细胞(HPMEC)及小鼠后上调炎症因子水平以及清肺通络方对炎症因子的下调作用。方法:实验分为正常对照组、模型组、清肺通络方组。用MP菌株感染模型组及药物小鼠及HPMEC细胞后,用清肺通络方干预药物组小鼠及HPMEC细胞。以ELISA法检测HPMEC细胞上清液及各组小鼠血清中TGF-β、IL-1β水平。结果:与正常对照组比较,模型组细胞上清液及小鼠血清中TGF-β、IL-1β水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,清肺通络方组血清中TGF-β、IL-1β水平均显著降低(P<0.01)。结论:MP可引起细胞上清液及小鼠血清中炎症因子TGF-β、IL-1β表达上调,清肺通络方具有减轻炎症水平的作用。