Based on Network Pharmacology to Explore the Action Mechanism of Caulis Sinomenii-Caulis Piperis Kadsurae Herb Pair in the Treatment of Rheumatoid Arthritis

Objective:By using the method of network pharmacology to explore the mechanism of action of Caulis Sinomenii-Caulis Piperis Kadsurae herb pair in the treatment of rheumatoid arthritis.Methods:Search and screen the active ingredients and targets of Qingfengteng(Caulis Sinomenii)and Haifengteng(Caulis Piperis Kadsurae)through the TCMSP database,and predict and supplement the target points of the active ingredients through the Swiss Target Prediction platform;collect rheumatoid arthritis disease targets through GeneCards,OMIM database,and DRUGBANK database,construct a Venn diagram,and obtain the key target of Caulis Sinomenii-Caulis Piperis Kadsurae herb pairs in the treatment of rheumatoid arthritis;use Cytoscape 3.7.1 to establish the effect of Caysaceae sylvestris and Rhizoma sibirica in the treatment of rheumatoid arthritis"Drug-active ingredient-target"network diagram,submit key targets to STRING11.0 database to construct a protein interaction network model to obtain core targets;perform the GO and KEGG enrichment analysis of key targets on the Metascape platform,and draw the network diagram of"active pharmaceutical ingredients-targets-pathways".Results:After screening,discover a total of 27 active ingredients of Caulis Sinomenii-Caulis Piperis Kadsurae herb pairs,which can act on 229 targets,1269 related targets for rheumatoid arthritis diseases.And obtain a total of 95 common targets for drug active ingredients and diseases,including PTGS2,EGFR,MMP9,CASP3,JUN,etc.The common targets are mainly enriched in signaling pathways such as Pathways in cancer,Th17 cell differentiation and Endocrine resistance etc.Conclusion:This study preliminarily explored the potential mechanism of Caulis Sinomenii-Caulis Piperis Kadsurae herb pairs in the treatment of rheumatoid arthritis.The Caulis Sinomenii-Caulis Piperis Kadsurae herb pair may regulate cancer-related pathways,Th17 cell differentiation,endocrine resistance and other pathways to treat rheumatoid arthritis by regulating targets such as PTGS2,EGFR,and MMP9,providing clues and ideas for follow-up experimental research.

王济华运用角药治疗类风湿关节炎经验

王济华教授认为,类风湿关节炎早期多因外感风、寒、湿三邪,三者之间相互促进、互相转化,风寒表邪入里日久或郁而化热;病程日久多虚实夹杂,肝肾亏虚、气血不足,同时兼有寒湿痹阻、痰瘀互结。故王教授治疗痹证早期以祛邪散寒为主,兼顾清热利湿、化痰散结,中晚期则偏于滋养气血、补益肝肾。王济华教授运用角药治疗痹证颇有心得,组方精妙、配伍严谨,常用角药川芎-延胡索-白芍行气活血、柔筋止痛;忍冬藤-络石藤-青风藤清热通络、祛风除湿;半夏-陈皮-竹茹燥湿化痰、理气和中;白术-薏苡仁-茯苓益气健脾、利湿消肿;桑寄生-续断-杜仲滋补肝肾、强筋壮骨;酸枣仁-合欢皮-首乌藤宁心安神、解郁除烦。王教授临证时,追求阴阳调和平衡、气机升降有度,临床用药有药简力专、增效减负之功。

青风藤不良反应及减毒增效研究进展

青风藤对类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、肿瘤等难治性疾病有很好的治疗效果,被广泛应用于临床。研究将查阅的有关青风藤(青藤碱)及其相关制剂的3800余篇文献进行归纳,从常见不良反应、减毒增效方法和适应证等多种角度进行总结,并根据归纳结果提出青风藤临床用药建议。青风藤常见的不良反应包括过敏性休克、过敏性皮疹、剥脱性皮炎、喉头水肿等过敏反应,胃痛、呕吐等胃肠道反应,粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、血小板减少、过敏性紫癜等血液系统不良反应和心律失常等。青风藤的毒性实验结果显示其无明显的肝肾、心脏及生殖毒性。青风藤的减毒增效主要集中于6种方式,即中药配伍、中药复方、西药联合、新型制剂、提高工艺、合成衍生物。青风藤适应症包括类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎等免疫疾病,高尿酸血症,糖尿病肾病、系膜增生性肾炎等肾脏疾病,动脉粥样硬化,肿瘤,颈椎病,器官移植术后,腰间盘突出,肩周炎,颈肩肌筋膜疼痛综合征,纤维肌痛综合征,老年带状疱疹后神经痛等。青风藤临床用药建议为常规用药,避免过量;联合用药,减毒增效;过敏病史,详细询问;合适途径,安全给药;不良反应,及时监测。从多角度对青风藤及其相关制剂的研究进展进行总结论述,以期为青风藤的合理应用提供参考,为进一步深入研究提供思路。

青风藤叶枯病病原菌的分离鉴定及防治药剂的筛选

2021年春季,从湖南省怀化市中方县正清制药青风藤基地和湖南农业大学试验基地分别采集青风藤叶枯病病叶,利用组织分离法获得病原菌,并进行柯赫氏法则验证。借助形态学鉴定和分子系统学分析,明确青风藤叶枯病病原为交链隔孢(Alternaria alternata)。利用菌丝生长速率法对5种药剂(95%苯醚甲环唑、98%咪鲜胺、96%己唑醇、96.5%丙硫菌唑、98%嘧菌酯)进行筛选,结果显示95%苯醚甲环唑抑菌效果最好,EC50为0.043 6 mg/L;98%嘧菌酯抑菌效果最差,EC50值为8.447 3 mg/L。

GEO芯片分析联合网络药理学探讨青风藤治疗特发性膜性肾病的作用机制

目的利用GEO芯片联合网络药理学探讨青风藤治疗特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)的可能作用机制。方法通过TCMSP数据库获取青风藤的活性成分和有效靶点,利用GEO芯片提取IMN的差异表达基因。借助Venny 2.1.0获取药物与疾病的共同靶点,采用Cytoscape 3.9.0构建“活性成分-靶点”网络。使用STRING数据库构建核心靶蛋白互作网络图,通过DAVID平台对有效靶点进行GO富集和KEGG通路富集分析,对主要成分与核心靶点进行分子对接验证并进行可视化分析。结果筛选获取青风藤有效活性成分6个,作用靶点52个,获得IMN差异表达基因3983个,药物与疾病交集基因8个。富集分析显示,青风藤可以影响对脂多糖的反应、凋亡信号通路等生物学过程,通过调控MAPK和cAMP等凋亡相关通路发挥治疗IMN作用。分子对接结果显示青风藤主要活性成分β-谷甾醇、拉兹马宁碱等与核心靶点JUN、CASP3等均能实现自发结合。结论青风藤可能通过作用于JUN和CASP3等关键靶点调控MAPK等信号通路,从而发挥调节细胞调亡、抑制炎症因子和调节免疫功能等作用来治疗IMN。

青风藤治疗骨性关节炎药效物质基础多靶导向作用的计算机模拟研究

目的探讨青风藤治疗骨性关节炎(osteoarthritis,OA)的药效物质基础,并对青风藤多靶导向作用做出药效学阐释。方法 (1)构建青风藤化学成分分子数据库,应用分子对接探讨其与OA重要靶标的相互作用;(2)构建青风藤所含分子配体-靶作用网络及DrugBank药物库中有关OA的药物分子配体-靶作用网络,分析其网络特征,阐明青风藤治疗OA作用机制和特点。结果青风藤中共有14个化学成分分子与2个及2个以上靶点相互作用,其中6个化学成分分子对4个及4个以上靶点有作用效应。青风藤分子配体-靶作用网络与药物分子配体-靶作用网络的轮廓和特征相似。结论青风藤存在多成分、多靶导向效应,且部分成分存在多靶导向效应,为青风藤治疗OA的药效学分子机制提供了解释,同时也为寻找治疗OA的新型药物提供一定的参考和借鉴。

不同产地青风藤中青藤碱的含量比较

目的比较不同产地青风藤的青藤碱含量。方法采用高效液相色谱法测定青风藤饮片中青藤碱含量。色谱柱为Lichrospher C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水-乙二胺(40∶60∶0.2),检测波长为262 nm,流速1.0 mL/min。结果青藤碱进样量在1～10μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为99.56%,RSD为0.81%(n=6);江苏(三批)、湖南、湖北产青风藤药材的青藤碱含量分别为0.83%,1.11%,1.02%,1.90%,0.58%。结论不同产地青风藤药材的青藤碱含量差异显著。

抗痛风颗粒中青风藤TLC鉴别与青藤碱的含量测定

目的:建立抗痛风颗粒中青风藤的TLC定性鉴别方法和青藤碱的高效液相色谱含量测定方法。方法:以青藤碱为对照品,采用甲苯-乙酸乙酯-甲醇-氨水(2∶4∶2∶1)为展开剂,改良碘化铋钾溶液为显色剂,对抗痛风颗粒中青风藤进行薄层色谱法定性鉴别。采用Agilent extend C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),甲醇-0.1%磷酸溶液(用三乙胺调pH至10)(38∶62)为流动相,262 nm为检测波长,测定了抗痛风颗粒中青藤碱的含量。结果:抗痛风颗粒薄层色谱中,青藤碱斑点清晰,阴性对照无干扰。HPLC定量分析中,青藤碱线性范围为0.414～2.484μg(r=0.999 8),平均回收率为97.6%,RSD=0.32%。结论:所建立的分析方法简便可行,可用于该制剂的质量控制。

RP-HPLC法测定青风藤中青藤碱的含量

目的:建立青风藤药材中青藤碱的反相高效液相色谱测定方法。方法:色谱柱为 Dikma Diamonsil^(TM)(钻石)C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(5mmol·L^(-1)磷酸氢二钠溶液,以5mmol·L^(-1)的磷酸二氢钠调节 pH 至8,再以1%三乙胺溶液调节 pH 至9)(55:45):流速为1.0mL·min^(-1),检测波长为262nm,柱温为25℃。结果:青藤碱的线性范围为1.02～10.18μg,r=1.000,加样回收率为100.5%,平均值为101.0%(n=11)。结论:方法简便,重复性好,便于操作。

青风藤及青藤碱对吗啡依赖小鼠位置偏爱效应和脑内组胺水平的影响

目的探讨中药青风藤及其有效成分青藤碱对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)及脑内组胺(HA)水平的影响。方法采用位置偏爱箱法,连续皮下注射吗啡(9mg/kg·b.w.)6d,引起小鼠产生显著的条件性位置偏爱效应。实验分空白对照组、吗啡模型组(9mg/kg·b.w.)、青风藤醇提液组(10g/kg·b.w.)、青藤碱组(60mg/kg·b.w.)、苯海拉明组(30mg/kg·b.w.)、CP48/80组(5mg/kg·b.w.)和L-组氨酸组(750mg/kg·b.w.),后5个给药组分别在位置偏爱训练的第4天开始给药,连续用药3d。脑内组胺含量采用荧光分光光度法测定。本实验同时检测青风藤、青藤碱、苯海拉明、CP48/80及L-组氨酸对小鼠的奖赏效应或厌恶效应。结果吗啡模型组小鼠在伴药箱中停留的时间明显延长,小鼠脑内HA水平显著升高(P<0.01)。青风藤或青藤碱连续用药可显著抑制吗啡引起的小鼠位置偏爱的形成,降低脑内的HA含量。青风藤、青藤碱及L-组氮酸对正常小鼠脑内组脑水平有升高作用(P<0.01),但3药本身并不使小鼠产生奖赏或厌恶效应。CP48/80能使正常及吗啡依赖小鼠脑内组胺含量明显减少(P<0.01),但该药对CPP无明显影响。结论吗啡诱导的小鼠位置偏爱效应与脑内HA水平升高、中枢组胺能神经系统激活有关。青风藤及青藤碱能消除吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的形成,对脑内组胺水平的改变具有调节作用。

青风藤及青藤碱对吗啡依赖小鼠位置偏爱效应及cAMP水平的影响

目的 观察中药青风藤及其有效成分青藤碱对吗啡诱导的小鼠位置偏爱效应的影响及其与中枢cAMP水平的关系。方法 连续给予吗啡 (9mg/kg ,1次 /d ,sc) 5d ,引起小鼠产生显著的条件性位置偏爱效应。用两种方式给予青风藤醇提液 (5 ,10g/kg ,ig)和青藤碱 (6 0mg/kg ,ig) ,即在训练阶段每天sc吗啡前 4 5min给予和在d 6测定位置偏爱前 4 5min仅给药一次。大脑皮层cAMP含量采用放射免疫法测定。结果 吗啡对照组小鼠在伴药箱中停留的时间明显延长 ,小鼠脑组织的cAMP水平亦显著升高。青风藤或青藤碱连续用药可显著抑制吗啡引起的小鼠位置偏爱的形成 ,对小鼠已形成的条件性位置偏爱效应也具有一定的抑制作用。并能降低脑内cAMP含量。结论 青风藤及青藤碱能消除吗啡产生的条件性位置偏爱 。

青藤碱精制工艺的优化

优选青风藤精制工艺.以青藤碱为指标成分,采用HLPC法,考察了以氯仿、2%盐酸水溶液分别为溶剂,不同萃取次数对提取率的影响,优化青风藤的精制工艺.优选出以氯仿、2%盐酸水溶液交替萃取3次,青风藤提取率最高.该提取方法简便,稳定性好,有效成分转移率高.

HPLC-TOF/MS鉴别青风藤不同溶剂提取物及给药后大鼠血浆中的化学成分

目的 采用HPLC-TOF/MS技术对青风藤不同提取部位及给药后大鼠血浆中的化学成分进行鉴别,以探索青风藤可能的药效成分。方法 色谱分离采用SHISEIDO MG C18（100 mm×3.0 mm,3μm）液相色谱柱,以乙腈-水（含0.1%的甲酸）为流动相,梯度洗脱,柱温20℃,流速0.3 mL.min-1。质谱定性采用飞行时间质谱,电喷雾离子源（ESI）,正离子模式,质量数扫描范围m/z 100～1 000。结果 体外各部位共鉴别出青风藤中23个化学成分,大鼠血浆中共鉴别出6个入血成分。结论 该方法可用于青风藤体内外成分的鉴别,本研究为青风藤进一步的药效试验提供了参考和依据。

青风藤配伍制附子对RA模型大鼠骨破坏的干预作用及机制

目的评价青风藤配伍制附子对类风湿性关节炎(RA)模型大鼠骨破坏的干预作用,并探讨其作用机制。方法将40只SD大鼠按体质量随机分成空白组、模型组、阳性对照组(吲哚美辛0.0135 g/kg)、青风藤配伍制附子组(青风藤1.08 g/kg+制附子1.35 g/kg),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均通过注射牛Ⅱ型胶原复制RA模型。各组大鼠连续灌胃相应药物或蒸馏水,记录一般情况、体质量、足肿胀度及关节炎症指数(AI)评分。第30天给药结束后,采用小动物CT机检测大鼠踝关节骨质变化;采用酶联免疫吸附测定法检测血清中炎症因子[白细胞介素31(IL-31)、IL-25、IL-3]与趋化因子[核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)、核因子κB受体激活蛋白(RANK)、护骨因子(OPG)]的水平;采用HE染色法观察大鼠踝关节病理学情况;采用免疫组织化学法检测大鼠踝关节滑膜组织中RANKL、RANK、OPG的表达情况。结果与空白组比较,第12~30天模型组大鼠精神状态虚弱,活动力下降明显,毛发失去光泽,体质量显著降低(P<0.05或P<0.01);第12~30天模型组大鼠足肿胀度显著增加、AI评分显著升高(P<0.01);踝关节表面粗糙,组织破坏明显、骨侵蚀严重;血清中IL-31、IL-25、IL-3、RANKL、RANK水平显著升高,OPG水平显著下降(P<0.01);踝关节滑膜组织中RANKL、RANK的光密度显著升高,OPG的光密度显著下降(P<0.01)。与模型组比较,各给药组上述指标均有不同程度改善,大部分差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论青风藤配伍制附子能通过抑制RANKL/RANK/OPG通路,从而抑制破骨细胞过度增殖,恢复骨代谢平衡,进而起到保护骨关节、治疗RA的作用。

青风藤醇提液对关节炎大鼠关节骨破坏的影响

目的观察青风藤醇提液对胶原诱导关节炎(CIA)大鼠关节破坏的影响,初步研究其作用机制。方法雌性SD大鼠32只,随机分为对照组、模型组和青风藤治疗组,模型组和青风藤治疗组制备CIA模型。青风藤治疗组灌胃青风藤醇提液,模型组与对照组灌胃等量0.9%氯化钠溶液。每3 d行关节评分1次,ELISA法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、核因子κB(NF-κB)配位体受体活化剂(RANKL)、可溶性蛋白骨保护素(OPG),观察大鼠后足病理组织切片。结果关节评分模型组显著高于青风藤治疗组(P<0.01);3组大鼠IL-17表达量均差异有统计学意义(P<0.05),IL-17水平青风藤治疗组较模型组低(P<0.05),较对照组高(P<0.01)。3组大鼠血清RANKL、OPG水平及RANKL/OPG值均差异有统计学意义(P<0.01),大鼠血清RANKL水平青风藤治疗组较模型组低(P<0.05),OPG水平青风藤治疗组较模型组高(P<0.05)。RANKL/OPG青风藤治疗组低于模型组,高于对照组;病理结果显示,大鼠关节骨破坏程度青风藤治疗组明显低于模型组。结论青风藤醇提取液能降低CIA大鼠血清IL-17、RANKL水平,升高OPG水平,降低RANKL/OPG,抑制破骨细胞生成,发挥抑制关节骨破坏作用。

风湿通痹胶囊提取工艺的研究

目的研究复方风湿通痹胶囊最佳提取工艺。方法采用正交试验法进行优选,高效液相色谱法测定绿原酸的含量、薄层扫描法测定青藤碱的含量。结果金银花最佳提取工艺为加水6倍量,提取3次,每次0.5h;青风藤最佳提取工艺为70%乙醇7倍量,提取2次,每次1.5h。结论所选提取工艺各有效成分提取率高。

青风藤及青藤碱对吗啡依赖小鼠位置偏爱效应及脑内组胺水平的影响

目的:探讨青风藤及其有效成分青藤碱对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)及脑内组胺(HA)水平的影响。方法:连续给予吗啡(9mg/kg,sc)6d,引起小鼠产生显著的条件性位置偏爱效应。在位置偏爱训练的第4天开始每天sc吗啡前45min分别给予青风藤醇提液(10g/kg,ig)、青藤碱(60mg/kg,im)、苯海拉明组(30mg/kg,ip)、CP48/80组(5mg/kg,sc)或L组氨酸组(750mg/kg,ip),连续给药3天。用荧光分光光度法测定脑内组胺含量。同时检测对小鼠的奖赏效应或厌恶效应。结果:吗啡模型组小鼠在伴药箱中停留的时间明显延长,小鼠脑内HA水平显著升高。青风藤或青藤碱可显著抑制吗啡引起的小鼠位置偏爱的形成,降低脑内的HA含量。青风藤、青藤碱及L组氮酸对正常小鼠脑内组脑水平有升高作用,但三药本身并不使小鼠产生奖赏或厌恶效应。CP48/80对正常及吗啡依赖小鼠脑内组胺含均有明显减少作用,但该药对CPP无明显影响。结论:吗啡诱导的小鼠位置偏爱效应与脑内HA水平升高、中枢组胺能神经系统激活有关。青风藤及青藤碱能消除吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的形成,对脑内组胺水平的改变具有调节作用。

非水毛细管电泳法测定青风藤中青藤碱的含量

目的：建立青风藤药材中青藤碱的含量测定方法。方法：青风藤药材粉碎后过筛，取粉末用70％乙醇超声提取，未涂渍熔融石英毛细管（50μm×48．5cm，有效长度40cm），以30mmol／L磷酸二氢钠溶液（水：甲醇=1：4）为缓冲液，运行电压25kV，温度25℃，内标为盐酸小檗碱，检测波长为210nm，运行时间20min。结果：在此条件下青藤碱与内标及其他成分能达到基线分离，青风藤在34．66～346．6μg／mL范围内呈良好的线性关系Y=0．029X-0．03，r=0．9998，最低检测限为3．466μg／mL（S／N=3），最低定量限为17．33μg／mL（S／N=10），平均加样回收率为100．1％（RSD=3．1％，n=6），低、中、高浓度日内、日间精密度RSD均小于5％（n=3）。结论：此方法可用于青风藤药材中青藤碱的含量测定，具有方法简便快速、准确、试剂消耗量少的优点。

不同型号大孔树脂吸附青风藤中青藤碱特性的研究

目的:研究不同型号大孔树脂对青风藤中青藤碱的吸附效果。方法:以青藤碱转移率为考察指标,对大孔树脂吸附纯化青风藤生物碱的工艺进行筛选。结果:pH2条件下AL-3树脂对青藤碱吸附和解析效果最好,pH6条件下X-5树脂吸附和解析效果最好。结论:筛选树脂应综合考虑目标化合物的性质和树脂的孔径、比表面积、极性等参数。

清络方活性部位的化学成分研究

目的:研究清络方(苦参,青风藤、黄柏)活性部位的化学成分,阐明其抑制血管新生作用的物质基础。方法:采用硅胶、氧化铝、葡聚糖凝胶等多种柱层析手段,根据化合物性质和紫外、质谱、核磁光谱数据鉴定结构。结果:从清络方活性部位中分离得到17个化合物,其中的2个化合物:石虎柠檬素A和正二十六烷酸属首次在组成清络方的三味中药苦参、青风藤、黄柏中发现;根据结构类型和生源途径推测石虎柠檬素A很可能来源于黄柏,而正二十六烷酸来源于苦参。结论:分离得到的化合物能部分反映出该复方的活性部位。