清肝活血方调控Caspase-4/Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡改善酒精性肝损伤

[目的]研究清肝活血方(QGHXR)通过调控半胱天冬酶(Caspase)-4/Caspase-3/GSDME细胞焦亡通路防治酒精性肝病(ALD)的作用机制。[方法]将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和QGHXR组复制ALD小鼠模型。检测血清肝功能、血脂水平;苏木精-伊红(HE)染色及油红O染色观察肝脏病理改变及肝脏脂质沉积状况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)法及免疫荧光染色检测Caspase-4/Caspase-3/GSDME通路相关基因及蛋白表达情况。[结果]与空白对照组比较,模型组小鼠肝组织三酰甘油(TG)水平明显升高(P<0.01),血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平升高(P<0.05),血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平升高(P<0.05);肝脏组织出现病理改变及脂质沉积现象;肝组织IL-1B、IL-6、TNF-α、NLRP3 mRNA表达水平升高。与模型组比较,QGHXR组小鼠肝组织TG水平明显降低(P<0.01),血清ALT、AST、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)水平降低(P<0.05),血清TG、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)以及血清高密度脂蛋白(HDL)水平升高(P<0.01);血清中血脂、肝脏病理改变及脂质沉积现象缓解;GsdmeN、Caspase-4、Caspase-3和C-Caspase-3基因及蛋白水平降低(P<0.05)。[结论]QGHXR可通过调节Caspase-4/Caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡通路改善ALD小鼠肝损伤和脂质沉积。

清肝活血方治疗酒精性肝病的临床研究

目的 :研究清肝活血方治疗酒精性肝病的临床疗效。方法 :采用多中心、随机、对照的方法 ,将12 0例酒精性肝病患者分为清肝活血方组 (6 0例 ,口服清肝活血方 )、小柴胡冲剂组 (30例 ,口服小柴胡汤冲剂 )、一般治疗组 (30例 ,口服肝泰乐、维生素C) ,观察各组患者症状、体征、肝功能、血脂、肝纤维化标志物、细胞因子、脂质过氧化物、B超等的改善情况。结果 :清肝活血方组总体疗效 ,食欲减退、恶心、呕吐、黄疸的改善情况优于其他两组 ,丙氨酸转氨酶 (ALT)、天门冬氨酸转氨酶 (AST)、甘油三酯 (TG)的降低优于其他两组 (P <0 0 1) ,γ 谷氨酰转移酶 (GGT)、极低密度脂蛋白 (VLDL)的降低优于一般治疗组 (P <0 0 1) ;清肝活血方并可降低肝纤维化标志物、细胞因子水平 ,抗肝脏脂质过氧化损伤 ,较明显改善脂肪肝程度。结论 :清肝活血方对酒精性肝病有明显治疗作用 ,而抗脂质过氧化 ,稳定肝细胞膜 ,纠正肝内脂质代谢紊乱 ,调节免疫功能 ,抗肝纤维化 ,促进酒精在肝内代谢的作用可能是其作用机理。

清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠CD14、TLR_4表达的影响

目的:探讨清肝活血方及其拆方对酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)大鼠肝组织CD14、TLR4表达的影响.方法:♂Wistar大鼠100只随机分成空白组、CCl4组各10只,余80只为造模组,采用复合因素复制ALD模型6wk.CCl4组予微量CCl4腹腔注射,每周2次.造模4wk后将模型组随机分成4组,清肝活血方及其拆方组各15只,余为模型组.予等效剂量清肝活血方及拆方ig2wk.检测血清ALT,AST水平;留取肝脏标本进行HE染色.RT-PCR检测肝组织CD14 mRNA、TLR4 mRNA表达,免疫组织化学染色检测肝组织CD14表达,Western blot检测肝组织TLR4蛋白表达.结果:与模型组比较,清肝活血方及其拆方均可明显改善ALD大鼠肝脏脂肪变及肝脏炎症程度(0.67±0.50,2.15±1.28,1.38±1.06vs4.56±0.73,均P<0.01).清肝活血方能显著降低模型大鼠血清ALT水平(725.65±111.02vs884.68±177.54,P<0.05),清肝方和活血方无明显作用;清肝方、活血方、清肝活血方均可明显降低ALD大鼠血清AST水平(2383.81±888.18,2158.93±922.85,2001.90±519.27vs3210.98±640.63,P<0.01或0.05),组间比较无显著差异.清肝方及清肝活血方能显著降低模型大鼠CD14 mRNA表达(1.46±0.52,1.10±0.40vs2.67±0.66,均P<0.01),活血方作用不明显,清肝活血方优于活血方.清肝方、活血方、清肝活血方均能显著降低模型大鼠肝组织TLR4 mRNA表达(1.91±0.03,2.11±0.03,1.53±0.01vs2.37±0.03,均P<0.01),组间比较无显著差异.清肝活血方显著降低模型大鼠肝组织CD14表达(13392.28±9287.54vs32288.89±15631.03,P<0.01).清肝方、活血方、清肝活血方均能显著降低模型大鼠肝组织TLR4表达(1.06±0.10,1.19±0.05,0.98±0.12vs1.40±0.11,均P<0.01).结论:清肝活血方及其拆方发挥对ALD的防治作用,其作用机制可能与降低CD14、TLR4基因和蛋白的表达有关.

清肝化痰活血方治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床研究

目的明确清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)患者的治疗作用。方法 NASH患者150例随机分为治疗组78例和对照组72例,治疗组给予清肝化痰活血方口服,对照组予胆宁片,共治疗3个月,观察两组治疗前后临床症状和体征、肝脏影像学、肝功能、血脂和胰岛素抵抗指数等变化。结果两组患者在临床症状、体重、体重指数、肝功能、血脂及肝脏B超积分等方面均有明显改善(P<0.05);治疗组胰岛素抵抗指数明显下降(P<0.05),在降低体重、体重指数、丙谷转氨酶、γ-谷氨酰转肽酶、甘油三酯、总胆固醇、肝脏B超积分及总有效率等方面均优于对照组(P<0.05)。结论清肝化痰活血方具有确切的治疗NASH的作用,疗效优于胆宁片。

清肝活血方及其拆方抗酒精性肝损伤大鼠肝细胞内质网应激性凋亡的作用及机制

目的研究中药复方清肝活血方及其拆方抗酒精性肝损伤大鼠肝细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)性凋亡的作用及机制。方法利用酒精-玉米油-吡唑复合试剂制备大鼠慢性酒精性肝损伤模型。将造模大鼠随机分为模型组、清肝活血方组、清肝方组及活血方组,另设CCl4对照组和正常对照组,每组10只。造模各组大鼠每天上午以酒精复合试剂灌胃,下午各中药组分别给予清肝活血方9.5g/(kg·d)、清肝方3.0g/(kg·d)、活血方6.5g/(kg·d)灌胃,模型组给予等体积生理盐水灌胃;CCl4组每周1次腹腔注射CCl40.3mL/kg,正常对照组给予生理盐水灌胃,连续治疗2周。组织病理学观察肝脏病理变化;ELISA法检测血清总同型半胱氨酸(total homocysteine,tHCY)水平;流式细胞术检测肝细胞凋亡率;RT-PCR和Westernblot法检测大鼠肝脏ERS凋亡相关因子真核生物翻译起始因子(eukaryotic translation initia-tion factor2alpha,eIF-2α)、磷酸化eIF-2α(p-eIF-2α)、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GPR78)、Caspase-3基因和蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型大鼠出现了典型的慢性酒精性肝损伤病理改变如脂肪变性、炎症甚至纤维化;肝细胞凋亡明显增加,凋亡率达到了正常大鼠的5倍以上,且以早期凋亡为主;血清tHCY水平显著升高;p-eIF-2α、GRP78及Caspase-3蛋白表达明显增高(P<0.01);GRP78及Caspase-3mRNA表达量显著增高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,清肝活血方及拆方组大鼠肝损伤及肝细胞凋亡程度明显减轻,血清tHCY水平显著降低,p-eIF-2α、GRP78及Caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.01);清肝活血方组GRP78和Caspase-3mRNA表达明显降低(P<0.01,P<0.05);清肝方组仅GRP78mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论清肝活血方及其拆方可能通过降低血清tHCY水平及肝脏ERS凋亡相关因子的表达抑制酒精性肝损伤动物肝细胞ERS性凋亡。

清肝活血方及其拆方对库普弗细胞表达CD14、Toll样受体4及核因子-κB的影响

目的:探讨清肝活血方及其拆方对库普弗细胞(Kupffercell,KC)表达CD14、Toll样受体4(Tolllikereceptor4,TLR4)及核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)的影响。方法:原代分离大鼠KC,以一定剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用一定时间,加入一定浓度的清肝活血方及其拆方清肝方和活血方药物血清,Western印迹法、实时聚合酶链式反应法和ELISA分别检测不同培养条件下KC膜受体CD14、TLR4、NF-κB和肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)的表达。结果:清肝方可以下调KC膜受体CD14的表达,但对NF-κB和TNF-α的表达影响不显著;活血方可以下调KC膜受体TLR4表达,抑制NF-κB和TNF-α的表达;清肝活血方可以下调KC膜受体CD14、TLR4,抑制NF-κB和TNF-α的表达。结论:清肝活血方通过下调CD14、TLR4及NF-κB的表达,抑制TNF-α的产生,保护肝细胞。

酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞及肝细胞凋亡和清肝活血方调控机制研究

目的观察酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)、肝细胞凋亡及清肝活血方对不同细胞凋亡的影响。方法将大鼠分为空白组,模型组,清肝活血低、中、高剂量组,易善复组。清肝活血方低剂量组〔4·75g/(kg·d)〕、中剂量组〔14·25g/(kg·d)〕、高剂量组〔28·5g/(kg·d)〕及易善复组〔66·5mg/(kg·d)〕,分别予相应药物灌胃,空白组和模型组以等量生理盐水代替,给药2周。比色法检测血清ALT、AST、γ-GT,HE、Masson染色观察肝脏炎症和纤维化程度。TUNEL法检测肝细胞凋亡,TUNEL-α-SMA双标记法检测HSC凋亡。结果清肝活血方能降低大鼠血清ALT、AST、γ-GT水平,减轻炎症及纤维化程度(P<0·05);诱导活化的HSC凋亡,减少肝细胞凋亡(P<0·05)。结论清肝活血方能有效减轻大鼠肝纤维化程度,并减少酒精引起的肝细胞凋亡,诱导活化的HSC凋亡。

清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶的调控作用

目的通过观察清肝活血方及其拆方对酒精性纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2,9)和1型基质金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)的调控作用,探讨清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组、CCl4组(各10只)和造模组(110只)。造模组用白酒为主的复合因素进行干预。8周后造模组随机分为模型组(25只)、清肝活血方组、清肝方组及活血方组各15只,在实验第4、8、10周各取8只模型大鼠做病理分析以监测模型进展,余大鼠在造模中死亡。各治疗组分别加用相应药物灌胃,分别为4.75、1.50、3.25g/kg。12周末处死大鼠,采用蛋白印迹法、荧光定量PCR、免疫荧光法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白及mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组MMP-2、MMP-9、TIMP-1表达明显升高(1.81±0.28vs.0.53±0.04,1.60±0.16vs.0.45±0.05,1.20±0.02vs.0.35±0.07,P<0.01)。与模型组比较,清肝活血方及其拆方组TIMP-1表达均降低(0.56±0.05、0.67±0.02、0.70±0.02vs.1.20±0.02),MMP-2、MMP-9表达提高(4.18±0.53、2.70±0.40、2.38±0.22vs.1.81±0.28;3.31±0.06、2.56±0.20、1.87±0.05vs.1.60±0.16,P<0.05,P<0.01),全方组调控优于各拆方组(P<0.05,P<0.01)。结论清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制可能与调控MMP-2、9有关。

清肝活血方对乙醇性肝纤维化大鼠肝星形细胞和肝细胞凋亡的影响

目的:观察酒精性肝纤维化大鼠Hsc和肝细胞的凋亡及中药清肝活血方对细胞凋亡的影响.方法:以乙醇为主制备酒精性肝纤维化大鼠模型,将造模大鼠分为清肝活血方低(4.75g/kg)、中(14.25g/kg)和高剂量组(28.5g/kg),每日进行ig药物干预2wk,并设空白对照组、模型对照组及易善复对照组.比色法检测血清ALT,AST,γ-GT;HE和Masson染色观察肝组织炎症和纤维化程度.TUNEL检测肝细胞凋亡,TUNEL-α-SMA双标记检测HSC凋亡.结果:清肝活血方用药组及易善复组能降低大鼠血清ALT(1213±245,1432±253nkat/Lvs2140±428nkat/L,P均<0.05),AST(1671±400,2123±413vs4454±850nkat/L,P均<0.05),γ-GT水平(4539±1847,5509±2430vs8271±3304nkat/L,P均<0.05),减轻纤维化程度(5.5±2.50,6.30±3.16vs9.00±2.27,P<0.05);诱导活化的HSC凋亡(5.25%±2.48%,3.63%±2.04%vs2.30%±1.24%,P<0.05),减少肝细胞凋亡(0.43%±0.11%,0.60%±0.16%vs1.77%±0.49%,P<0.05).结论:清肝活血方能有效减轻大鼠肝纤维化程度,并减少乙醇引起的肝细胞凋亡,诱导活化的HSC凋亡.

清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠血浆内毒素水平及KC活化状态的影响

目的:探讨清肝活血方及其拆方对酒精性肝病(alcoholic liver d isease,ALD)大鼠血浆内毒素水平及KC活化状态的影响。方法:雄性W istar大鼠100只,SPF级,随机分成空白组、CC l4组各10只,余80只为造模组,采用复合因素复制ALD模型6周。空白组予等量生理盐水对照。CC l4组予微量CC l4腹腔注射2次/周。造模4周后将模型组随机分成4组,清肝活血方及其拆方组各15只,余为模型组。予等效剂量清肝活血方及拆方灌胃2周。检测血清ALT、AST水平;留取肝脏标本进行HE染色;采用偶氮显色法检测血浆内毒素水平;免疫组织化学染色检测肝组织CD68表达。结果采用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析及两两比较。结果:(1)清肝活血方及其拆方均可明显改善ALD大鼠肝脏脂肪变及肝脏炎症程度,清肝活血方>活血方>清肝方,清肝活血方优于清肝方。(2)清肝活血方能显著降低模型大鼠血清ALT水平,清肝方和活血方无明显作用;清肝方、活血方、清肝活血方均可明显降低ALD大鼠血清AST水平,组间比较无显著差异。(3)清肝活血方及其拆方均能降低模型大鼠血浆内毒素水平,组间比较无显著差异。(4)清肝活血方及其拆方均可抑制模型大鼠KC活化,活血方优于清肝活血方,清肝活血方优于清肝方。结论:清肝活血方及其拆方发挥对ALD的防治作用,其作用机理可能与降低血浆内毒素水平和抑制KC的活化有关。

清肝活血方对酒精性肝病大鼠肝脏脂质过氧化损伤的影响

目的:研究清肝活血方防治酒精性肝病大鼠肝脏脂质过氧化损伤的影响。方法:采用乙醇、吡唑、玉米油混合液连续灌胃14周,形成酒精性肝病大鼠模型,分为清肝活血方低、高剂量组,以小柴胡冲剂为对照,观察其对肝内脂质过氧化产物的影响。结果:清肝活血方可明显降低升高的ALT、AST、GGT、ALP、LDH,抑制IL1、IL6、TNFα、TGFα的升高;降低血清透明质酸、层粘蛋白水平。结论:清肝活血方对酒精性肝病有明显防治作用,而调节免疫活性因子、抗炎、抗肝纤维化发生可能是其作用机制之一。

清肝活血方及其拆方对酒精性肝损伤大鼠肿瘤坏死因子α表达的影响

目的:观察清肝活血方及其拆方对酒精性肝损伤(alcoholic liver injury,ALI)大鼠肝脏肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA表达和血浆TNF-α含量的影响。方法:除空白组和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)组外,80只雄性Wistar大鼠采用复合因素复制ALI模型。造模4周后将模型大鼠随机分成模型组、清肝方组、活血方组和清肝活血方组。3治疗组予相应药物灌胃。灌胃2周后,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;采用酶联免疫吸附测定法检测血浆TNF-α含量;留取肝脏标本进行苏木素-伊红染色;逆转录聚合酶链反应检测肝组织TNF-αmRNA表达。结果:清肝活血方及其拆方均可明显改善ALI大鼠肝脏脂肪变及肝脏炎症程度,清肝活血方优于清肝方。清肝活血方能显著降低模型大鼠血清ALT活性;清肝方、活血方和清肝活血方均可明显降低ALI大鼠血清AST活性,组间比较差异无统计学意义。活血方及清肝活血方能显著降低模型大鼠肝组织TNF-αmRNA表达和血浆TNF-α水平,清肝方作用不明显。结论:清肝活血方及活血方治疗ALI的作用机制可能与减少TNF-α的产生有关。

清肝活血方及其拆方对酒精性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物途径的影响

目的:通过观察清肝活血方及其拆方对酒精性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plas-minogen activator,uPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)途经的调控作用,探讨清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)组和造模组。造模组采用56度二锅头酒、玉米油、吡唑混合物灌胃联合腹腔注射CCl4橄榄油溶液(CCl4∶橄榄油=1∶3)的方法造模。8周后造模组再随机分为模型组、清肝活血方组、清肝方组及活血方组。各治疗组分别加用相应药物(4.75、1.5、3.25g/kg)灌胃,其他各组灌胃等体积生理盐水。12周末处死大鼠,观察大鼠肝功能变化和肝组织病理学改变;采用蛋白印迹法、实时荧光定量聚合酶链式反应、免疫荧光法检测uPA、PAI-1蛋白和mRNA表达。结果:与空白组比较,CCl4组肝纤维化程度未见明显加重;模型组肝纤维化程度则明显加重(P<0.01),血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和门冬氨基氨转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性明显升高,肝组织uPA和PAI-1表达明显升高,并且PAI-1升高幅度高于uPA。与模型组比较,清肝活血方及其拆方均能不同程度地减轻酒精性肝纤维化大鼠肝纤维化程度(P<0.01),降低血清ALT和AST活性,显著降低PAI-1表达,提高uPA表达。全方对上述环节的调控优于拆方。结论:清肝活血方及其拆方均能改善酒精性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度,且全方作用优于拆方,其机制可能与调控uPA/PAI-1纤溶途径有关。

清肝活血方和拆方对脂多糖介导库普弗细胞活化的调控作用研究

目的探讨脂多糖(LPS)介导库普弗细胞(KC)活化的功能变化及清肝活血方和拆方对其调节作用。方法原代分离KC,筛选LPS最适剂量和最佳作用时间;制备清肝活血方及其拆方含药血清,以ELISA、Westernblot方法检测清肝活血方及其拆方含药血清对LPS激活KC表达TNF-α、ERK1/2和激活蛋白1(AP-1)的影响。结果正常培养的KC在加入LPS后,TNF-α蛋白在2h开始明显增加,6h到达峰值;1mg/L刺激分泌到达峰值,P-ERK表达明显增加。清肝方通过抑制P-ERK来调节核因子AP-1的表达;活血方下调P-ERK,抑制效应产物TNF-α的表达;清肝活血方可以抑制P-ERK,抑制核因子AP-1的表达。结论清肝活血方及其拆方含药血清通过影响ERK信号通路,抑制效应因子TNF-α的产生,从而起到保护肝细胞的作用。

清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠肝组织P-ERK NF-κB表达的调控

目的:通过研究清肝活血方及其拆方对酒精性肝病大鼠肝组织P-ERK、NF-κB蛋白表达的影响,探讨清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝病的作用机制。方法:将Wistar大鼠随机分为空白组、CCl4组、造模组,造模组采用复合因素复制酒精性肝病模型。4周后将造模组随机分为模型组、清肝方组、活血方组、清肝活血方组。各中药组予相应中药灌胃2周。观察肝功能、肝脏病理学变化、Western blot法检测肝组织P-ERK、NF-κB蛋白表达。结果:清肝活血方及其拆方均可明显改善模型大鼠肝脏脂肪变性及炎症程度,清肝活血方优于拆方。清肝活血方能显著降低模型大鼠血清ALT水平,拆方无明显作用;清肝活血方及其拆方均可显著降低模型大鼠血清AST水平及肝组织P-ERK、NF-κB蛋白表达。结论:清肝活血方及其拆方可通过抑制肝组织P-ERK、NF-κB表达发挥对酒精性肝病的防治作用,清肝活血方的作用优于拆方。

清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)的增殖与凋亡以及清肝活血方的调节作用。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组、模型对照组以及清肝活血方高、中、低剂量组,采用复合因素制备酒精性肝纤维化动物模型。观察清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠肝功能、病理、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)以及HSC增殖与凋亡的影响。结果:清肝活血方各剂量组能显著降低酒精性肝纤维化大鼠血清ALT、AST水平(P<0.05);清肝活血方高剂量组能显著降低血清γ-GT水平(P<0.05);各药物组均能在不同程度上减轻肝脏炎症和纤维化,减少肝组织α-SMA的表达(P<0.05),抑制HSC增殖并提高HSC的凋亡率。结论:清肝活血方能有效改善酒精性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度。其作用机制可能是通过抑制HSC的增殖并促进活化HSC凋亡实现的。

清肝活血方及其拆方对脂多糖介导库普弗细胞活化ERK表达调控的研究

目的:探讨清肝活血方及其拆方对脂多糖介导库普弗细胞(Kupffercell,KC)活化表达细胞外受体活性激酶(ERK)的影响。方法:原代分离KC,筛选LPS(脂多糖)合适剂量和作用时间;制备清肝活血方及其拆方含药血清,以ELISA、Western方法检测该方及其拆方含药血清对KC表达肿瘤坏死因子α、细胞外受体活性激酶1/2(ERK1/2)和激活蛋白1(AP-1)的影响。结果:选择LPS合适剂量为100μg/L,合适时间为2小时。清肝方通过抑制磷酸化的ERK(P-ERK)来调节核因子AP-1的表达。活血方可以下调P-ERK,抑制效应产物TNF-α的表达。清肝活血方调控磷酸化P-ERK,抑制核因子AP-1的表达。结论:清肝活血方及其拆方含药血清通过影响ERK信号通路,抑制TNF-α的产生,从而起到保护肝细胞的作用。

清肝活血方对肠黏膜上皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1的影响

目的:探讨清肝活血方对肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的影响,明确清肝活血方干预肠源性内毒素移位的作用位点。方法:应用Caco-2细胞株,建立肠上皮细胞模型,筛选酒精作用的剂量、时间,以Western方法检测该方药物对Caco-2表达ZO-1蛋白的影响。结果:低浓度酒精即可明显增加Caco-2细胞模型的通透性,减少ZO-1蛋白的表达;清肝活血方药物可以提高ZO-1蛋白的表达,且呈一定的量效关系。结论:清肝活血方可以通过调控ZO-1蛋白的表达改善酒精引起的Caco-2细胞的通透性。

清肝化痰活血方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的防治作用

目的:探讨清肝化痰活血方对LXRa/FAS信号通路介导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝细胞脂肪沉积的影响。方法:选用SPF级雄性SD大鼠70只,分4组,正常组、模型组、治疗组及预防组;除正常组外其余3组大鼠采用高脂饮食复制NASH模型;造模8周结束。预防组大鼠从造模开始给予清肝化痰活血方灌胃,1次/d,共12周;治疗组大鼠从造模结束后,开始灌胃清肝化痰活血方,而模型组、正常组大鼠灌胃等量生理盐水,均1次/d,共4周。观察各组大鼠肝脏脂肪变性程度、血清ALT、AST、TC、TG水平。采用实时定量PCR法检测肝细胞LXRamRNA、FAS mRNA的表达。结果:造模8周时,正常组大鼠肝组织正常,其余3组大鼠肝脏均发生不同程度脂肪变性;模型组大鼠血清ALT、AST水平升高,与正常组比较,差异有显著性意义(P<0.05),与模型组比较,预防组大鼠血清ALT、AST、TC、TG水平显著下降(P<0.05);治疗组大鼠的肝脏脂肪变性程度均明显轻于模型组大鼠,其ALT、AST、TC、TG水平明显低于模型组(P<0.05);与正常组比较,其余3组大鼠肝细胞LXRa、FAS基因表达水平均明显升高(P<0.01),与模型组比较,预防组和治疗组大鼠的上述基因表达水平下调明显(P<0.01)。结论:LXRa/FAS通路是介导NAFLD脂质平衡代谢紊乱重要的信号通路,清肝化痰活血方能够调控肝细胞LXRa/FAS通路,使NASH大鼠肝细胞脂肪沉积趋于减轻,这可能是该方抗实验性大鼠脂肪性肝炎的作用机制之一。

滋阴益气活血解毒法治疗32例2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的临床观察

目的:观察以滋阴益气活血解毒立法的左归降糖清肝方对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者的临床疗效。方法:将64例患者随机分为对照组和治疗组,各32例,均给予基础治疗。对照组在基础治疗的同时服用肝旨清胶囊,治疗组在基础治疗的同时给予左归降糖清肝方治疗,两组疗程均为5个月,评定治疗后的临床疗效。结果:两组患者治疗前各项检查指标比较,无统计学差异;治疗后,两组空腹血糖、餐后2h血糖、血脂、肝功能和脂肪肝等级与治疗前比较,差异具有统计学意义(P<0.05);除空腹血糖外,治疗组各项检查指标及总体疗效优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:滋阴益气活血解毒立法的左归降糖清肝方对T2DM合并NAFLD患者有良好临床疗效。