HPLC-ELSD法测定清开灵注射液中胆酸和猪去氧胆酸的含量

目的：采用高效液相色谱蒸发光散射检测器测定清开灵注射液中胆酸和猪去氧胆酸的含量。方法：采用CLC-ODS柱，以甲醇-水-冰醋酸（80：20：0．01）为流动相，蒸发光散射检测器。结果：胆酸及猪去氧胆酸分勇1在1.604～8.020μg、1.068～5．340μg线性关系良好；胆酸及猪去氧胆酸的平均回收率分别为97．4％、99．2％。结论：该方法简便、准确、分离效果好；本方法可用于清开灵注射液的质量评价。

清开灵注射液中三种胆酸含量测定方法比较

目的 :建立同时测定清开灵注射液中 3种胆酸 (牛胆酸 ,猪去氧胆酸和去氧胆酸 )含量的 2种高效液相色谱法(HPLC UV和HPLC ELSD) ,并与原有的测定总胆酸含量的紫外分光光度法进行比较。方法 :高效液相色谱法测定 ,采取紫外与蒸发光散射 2种检测方式 ;结果 :同时测定了清开灵注射液中的 3种胆酸物质 ,方法回收率HPLC/ELSD为1 0 0 % ,HPLC/UV为 97% ,均高于原有的紫外方法 (95 %～ 96 % ) ;结论 :HPLC/ELSD测定清开灵中胆酸成分 ,方法简便准确 。

清开灵注射液及其有效成分诱导人急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的 :研究清开灵注射液及其有效成分治疗急性白血病的作用机理。方法 :采用体外培养技术、MTT法、细胞形态学、DNA凝胶电泳及流式细胞检测技术 ,对清开灵及其有效成分诱导的人急性早幼粒白血病 (HL 60 )细胞凋亡进行分析。结果 :清开灵及其有效成分黄芩甙、猪去氧胆酸对HL 60细胞均有很强的细胞毒作用 ,牛黄胆酸的作用次之 ;前三者在体外作用 6h即可诱导细胞凋亡 ,流式细胞仪检测出现典型凋亡峰 ;牛黄胆酸无诱导HL 60细胞凋亡作用。结论 :清开灵注射液及其有效成分可在体外诱导白血病细胞凋亡 ,可能是其治疗急性白血病的作用机理之一。

清开灵注射液中水难溶性成分在不同条件下的表观溶解度测定

目的:测定清开灵注射液中3种水难溶性成分黄芩苷(BCL)、胆酸(CA)、猪去氧胆酸(HA)在不同条件下的表观溶解度,为增溶研究提供基础。方法:将BCL、CA、HA制成水及不同p H值缓冲液的饱和溶液,采用HPLC法,借鉴《中华人民共和国药典》2010版一部中清开灵注射液中难溶性成分含量测定方法进行测定。结果:(25.0±0.5)℃、p H 5.78的去离子水中,BCL的表观溶解度为0.048 7 mg·m L^(-1),为"几乎不溶或不溶"范畴;CA的表观溶解度为0.147 9 mg·m L^(-1),为"极微溶解"范畴;HA的表观溶解度非常小,在该高效液相色谱-二级阵列管检测器(HPLC-DAD)条件下未能检出;但在一定p H范围的缓冲溶液中,BCL、CA、HA的溶解度随p H增大而激增,在p H 7.6的缓冲液中,BCL、CA的溶解度分别相当于p H 5.78的去离子水中的1555倍、131倍。结论:在不同p H条件下,3种水难溶性成分的表观溶解度差异较大,应调节适宜的p H以满足制剂质量标准中对各成分含量的要求。

HPLC法测定注射用清开灵(冻干)中6种成分

目的建立HPLC法测定注射用清开灵(冻干)(胆酸、猪去氧胆酸、水牛角等)中6种成分的含有量。方法腺苷、绿原酸、栀子苷含有量的测定采用XBridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-水(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温30℃;检测波长254 nm。黄芩苷、猪去氧胆酸、胆酸含有量的测定采用XBridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以甲醇-水(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温35℃。结果 6种成分分别在2.244~56.108、2.658~66.445、4.347~108.682、122.01~1 016.75、131.94~1 099.50、152.22~1 268.50μg/m L范围内线性关系良好(r>0.999 0),平均加样回收率(RSD)分别为101.1%(0.46%)、98.0%(1.74%)、99.7%(0.15%)、100.9%(1.31%)、98.1%(0.18%)、98.2%(1.61%)。结论该方法稳定、重复性好,可用于注射用清开灵(冻干)的质量控制。

基于核酸适配体技术对清开灵注射液中胆酸的研究

目的利用免疫磁珠分离技术和核酸适配体相结合的方法剔除清开灵注射液中胆酸小分子,借此研究胆酸在清开灵注射液对细胞脱颗粒中的作用。方法将标记有生物素的胆酸的核酸适配体与表面有链霉亲和素包被的磁珠偶联,然后将偶联物与清开灵注射液进行孵育,使胆酸与核酸适配体特异结合,最后利用磁性分离将清开灵注射液中的胆酸剔除。对胆酸剔除前后的清开灵注射液进行细胞脱颗粒实验,以研究其类过敏反应的性质。结果磁珠与适配体的偶联反应具有浓度依懒性。适配体剔除清开灵注射液中的胆酸也具有浓度依懒性。剔除部分胆酸后的清开灵注射液对细胞的脱颗粒作用,与清开灵注射液相比,有显著下降。结论利用胆酸的核酸适配体与免疫磁珠分离技术能够剔除清开灵注射液中的胆酸,为研究小分子物质在中药注射液中的作用提供了新的研究方法。

清开灵注射液中非胆酸成分对胆酸和异去氧胆酸药代动力学影响

目的研究清开灵注射液中非胆酸成分对胆酸(CA)和异去氧胆酸(HDCA)药代动力学过程及在主要脏器分布的影响,以阐明清开灵注射液的药理作用。方法实验动物分2组,清开灵注射液(10ml.kg-1)组和单用相同剂量的CA/HDCA组,给药前小鼠禁食不禁水12h,眼眶微量采血20μl,直接沉淀蛋白振荡后离心,取上清进样检测。取心、肺、肾、脑清洗后用滤纸吸干称量,用1∶4匀浆后离心取上清,处理方法同血样进样检测。使用液相色谱/质谱联用法检测血和组织样品中的CA和HDCA的含量。结果CA和HDCA在全血和组织中的药物浓度线性范围为4～4000μg.L-1,线性关系良好(r>0.999),最低检测浓度为2μg.L-1,日间和日内精密度的RSD均<5%。比较复方中和单用时CA和HDCA的药代动力学参数和在主要组织(心、肺、肾、脑)中的分布,清开灵注射液中的CA和HDCA的AUC、MRT、T1/2β、V均明显高于单用时(P<0.05),CL明显低于单用时(P<0.05);清开灵注射液中CA和HDCA的分布明显优于单用CA/HDCA,CA和HDCA在组织中的分布特点为:C肺>C肾>C心>C脑。结论本方法灵敏度高,特异性好,适用于胆酸类化合物的体内过程研究;清开灵注射液中非胆酸成分可延长胆酸成分在体内的滞留时间和促进胆酸成分在组织中的分布;CA和HDCA在脑中浓度低说明其不易透过血脑屏障;复方制剂中多种成分存在相互作用。

清开灵注射液中胆酸和猪去氧胆酸的药动学研究

目的 :以清开灵注射液为例 ,以制剂中不同化学组分为指标来研究中药复方药动学规律。方法 :8只家兔以 8m L/kg静注清开灵注射液 ,4h内采血 8次 ,血样经离心、提取后 ,采用双波长薄层色谱法同板测定清开灵注射液中胆酸和猪去氧胆酸两种成分不同时刻的血药浓度。结果 :经《药代动力学计算程序》计算 ,两成分的体内代谢均属二室模型。胆酸 t1 / 2 α=4.0 72 min,t1 / 2 β=1 1 8.89min,AUC=699.95 μg/m L·min,CL=0 .0 3 92L/min。猪去氧胆酸 t1 / 2 α =4.2 5 4min,t1 / 2 β =77.5 0 min,AUC=61 4.0 4μg/m L.min,CL=0 .0 5 3 1 L/min。二者t1 / 2 β,k2 1 ,CL有显著差异 ( P <0 .0 5 ) ,其他参数如 t1 / 2 α,k1 2 ,k2 1 ,AUC等无统计学差异 ( P >0 .0 5 )。结论 :中药复方制剂中不同成分的药动学特征有差异 ,复方制剂中某一成分的代谢情况无法反映整个制剂的水平。

3种非离子型表面活性剂对清开灵注射液中难溶性成分的增溶效果比较

目的:比较3种非离子型表面活性剂聚山梨酯80(Tween-80)、泊洛沙姆188(P188)、聚乙二醇400(PEG 400)对清开灵注射液(QKL)八混液中间体中3种难溶性成分黄芩苷(BCL)、胆酸(CA)、猪去氧胆酸(HA)的增溶效果。方法:根据BCL在水、缓冲液、QKL 3类溶剂中及CA、HA在QKL中的溶解情况,分别在3类溶剂中加入3种非离子型表面活性剂,采用HPLC法测定难溶性成分的含量,以绝对增溶度(ΔS)和相对增溶率(RS)为评价指标来考察增溶效果。结果:Tween-80、PEG400、P188 3种增溶剂对水中的BCL均有一定增溶作用,其溶解度随增溶剂浓度增加呈线性增大。Tween-80、P188、PEG 400浓度均为1.0%时,其RS分别为1.22、0.38、0.72,在水中对BCL的增溶能力大小排序Tween-80>PEG 400>P188;BCL在一定p H值的缓冲液中的溶解度大幅提高,Tween-80对BCL的增溶效果更佳,相比在水溶液中其ΔS大为增加,而RS却较在水中大为降低(RS<0.2);在QKL八混液(指含有胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母、黄芩苷、栀子、板蓝根、金银花8种中药成分的清开灵注射液半成品)中间体中,相对于p H的影响,增溶剂的浓度对溶解度的影响较弱;Tween-80对CA、HA的RS高于BCL。结论:3种增溶剂对3类难溶性成分在不同的溶剂中均具有增溶作用,且随着浓度升高增溶作用逐步提高;3种增溶剂对QKL八混液中间体中难溶性成分的增溶能力不尽一致,在选择增溶剂时应进行优化,且因p H对部分难溶性成分的溶解度影响较大,在增溶时注意调节适宜的p H;增溶剂对难溶性成分的增溶效能与该成分的log P值有关。

清开灵软胶囊中胆酸和猪去氧胆酸的含量测定

目的建立清开灵软胶囊中胆酸和猪去氧胆酸的高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)含量测定方法。方法采用ShiseidoCapcell MGⅡC18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-乙腈-0.5%冰醋酸溶液(49∶20∶31)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,蒸发光散射检测器,漂移管温度为108℃,载气流速为2.8 L/min。结果胆酸和猪去氧胆酸的进样量分别在2.338～18.704μg(r=0.999 4)和2.018～16.141μg(r=0.999 5)范围内与各自的峰面积积分值呈良好的对数线性关系,平均回收率分别为98.51%和98.01%,RSD分别为0.74%和0.72%(n=9)。结论所用方法简便、准确、分离效果好,适用于该制剂的质量控制。

清开灵系列品种中胆酸和猪去氧胆酸的通用检测定方法研究

目的:建立一个通用检测方法测定清开灵系列品种中胆酸和猪去氧胆酸的含量。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%乙酸溶液(40:60,V/V),流速为0.8mL·min-1,蒸发光散射检测器的漂移管温度为110℃,N2流速为2.0mL·min-1,进样量为5～25μL。结果:胆酸和猪去氧胆酸的进样量均在0.5～3.5μg(r=0.9999或0.9998)范围内与各自峰面积积分值呈良好的对数线性关系;不同剂型清开灵系列品种中胆酸的平均加样回收率在93.8%～99.5%之间,RSD在0.8%～4.6%之间(n=6);猪去氧胆酸的平均加样回收率在95.9%～105.6%之间,RSD在0.9%～4.9%之间(n=6)。结论:该方法简便、准确、分离效果好、专属性强,可作为清开灵系列品种的通用检测方法。