基于转录组学和网络药理学探究清眩润目饮治疗干眼的作用机制

目的:基于转录组学和网络药理学探究清眩润目饮(QRY)治疗干眼(DE)的作用机制,并通过干眼动物模型对QRY的药效和关键靶点进行实验验证。方法:运用RNA高通量测序(RNA-seq)技术检测干眼小鼠与正常小鼠的差异表达基因(DEGs),通过数据库筛选QRY有效成分及作用靶点,将二者重叠获取关键靶点后进行GO和KEGG富集分析,构建“药物-成分-靶点-信号通路”网络并分析蛋白质-蛋白质相互作用(PPI);自动物实验开始每7 d对小鼠行Schirmer I试验(SⅠt)、泪膜破裂时间检测(BUT)、角膜荧光染色试验(FL)检查;HE染色观察小鼠角膜组织病理变化;ELISA、Western blot、qRT-PCR验证小鼠角膜组织中核心靶点的蛋白和mRNA表达水平。结果:获得DEGs共2234个、QRY有效成分233个及相关靶点457个,获得关键靶点64个,GO与KEGG分析结果提示QRY与炎症反应密切相关,通过PPI网络筛选出白介素-6(IL-6)等19个核心靶点;QRY组的SⅠt、BUT、FL结果与模型组相比有差异(均P<0.05);HE染色结果示模型组角膜上皮细胞分层紊乱且角膜形态发生改变,QRY组可以改善角膜粗糙及分层紊乱的情况,形态接近空白组;ELISA、Western blot、qRT-PCR结果示QRY组的IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白和mRNA表达对比模型组都呈现出下降趋势。结论:清眩润目饮通过多成分、多靶点、多通路联合发挥作用,利用槲皮素等主要成分对IL-6、IL-1β、TNF等靶点进行调控,从而抑制AGE-RAGE/TNF/IL-17等信号通路以实现对干眼的治疗作用。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究清眩润目饮对苯扎氯铵诱导的干眼大鼠的作用机制

目的:基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨清眩润目饮对苯扎氯铵(BAC)诱导干眼模型大鼠的作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、清眩润目饮组、玻璃酸钠组,每组10只(20眼)。除空白组外,各组大鼠采用0.2%BAC滴眼,5μL/眼,2次/d,连续14 d,制备大鼠干眼模型。造模后,清眩润目饮组予中药灌胃,同时予磷酸盐缓冲液滴眼;玻璃酸钠组大鼠予等量生理盐水灌胃及玻璃酸钠滴眼液滴眼;空白组和模型组予等量生理盐水灌胃及磷酸盐缓冲液滴眼,2次/d,连续14 d。末次给药1 h后对各组大鼠行泪液分泌量检测(SIT)及角膜荧光素钠染色(FL)评分;透射电镜观察角膜细胞超微结构;HE染色观察结膜组织病理学变化;RT-qPCR检测各组大鼠角膜、结膜及泪腺中TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB p65 m RNA的表达;ELISA检测各组大鼠角膜、结膜及泪腺中磷酸化p65(p-p65)蛋白的表达。结果:造模14 d后,模型组、清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠SIT低于空白组(P<0.01),FL评分高于空白组(P<0.01)。给药14 d后,清眩润目饮组、玻璃酸钠组大鼠SIT均高于模型组(P<0.01或P<0.05),FL评分均低于模型组(P<0.05)。透射电镜显示模型组大鼠角膜间隙增大,面积增宽,排列不规则;清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠角膜上皮细胞间隙增宽程度减轻,排列较规则,角膜结构改善。HE染色显示,与模型组比较,清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠结膜上皮细胞形态及排列恢复,杯状细胞数量上升。模型组大鼠角膜、结膜及泪腺中TLR4 mRNA、MyD88 mRNA相对表达量高于空白组(P<0.01);清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠角膜、结膜及泪腺中TLR4 mRNA、MyD88 mRNA相对表达量均低于模型组(P<0.01);清眩润目饮组大鼠角膜中TLR4 mRNA及结膜、泪腺中MyD88 mRNA相对表达量均低于玻璃酸钠组(P<0.01)。模型组大鼠角膜、结膜及泪腺中p-p65蛋白表达水平均高于空白组(P<0.01);清眩润目饮组及玻璃酸钠组大鼠角膜、结膜及泪腺中p-p65蛋白表达水平均低于模型组(P<0.01);清眩润目饮组大鼠角膜及结膜中p-p65蛋白表达水平低于玻璃酸钠组(P<0.05)。结论:清眩润目饮可缓解BAC诱导干眼模型大鼠的干眼症状,修复角膜、结膜损伤,其机制可能是抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路。

中药清眩润目饮治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼60例的临床观察

目的：观察中药清眩润目饮治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼的临床疗效并探讨作用机制。方法：收集我院2012年7月～2013年7月门诊就诊的60例（120眼）睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼患者，随机分为治疗组和对照组各30（60眼）例，治疗组给予自拟中药清眩润目饮治疗，对照组予典必殊滴眼液治疗，治疗4周，观察对比两组疗效。结果：治疗组30例（60眼）中治愈18只眼，好转38只眼，有效率93．33％。对照组30例（60眼）中治愈7只眼，好转42只眼，有效率81．67％。经统计学分析，P＜0．05有显著差异。治疗组患者经治疗后在临床症状和体征、泪液分泌、泪膜破裂时间以及角膜荧光染色方面均优于对照组（P＜0．05）。结论：自拟中药清眩润目饮治疗睑板腺功能障碍致蒸发过强型干眼的疗效优于典必殊滴眼液的疗效。

姚靖运用养阴清热法治疗睑板腺功能障碍型干眼经验

姚靖教授指出肺、脾两脏功能失调是导致睑板腺功能障碍型(MGD)干眼发病的主要病因,由此创立“养阴清热法”用于治疗MGD干眼。养阴清热法以养阴润肺生津、清热健脾祛湿为主要治疗原则,治疗方法包括清眩润目饮内服及外用熏目、针刺治疗、太阳穴刺络放血拔罐治疗。养阴清热法能够有效改善MGD干眼患者眼部症状及全身症候。本文将从病因病机、方药组成、针刺治疗、验案举隅等方面对姚靖教授采用养阴清热法的中医理论内涵及临床应用进行介绍,以期能够指导临床。