清脂通脉颗粒对动脉粥样硬化病变NF-κB信号通路的影响

目的考察清脂通脉颗粒药物对细胞活性的影响,探究其抗动脉粥样硬化的作用及机制。方法通过CCK-8法实验判断清脂通脉颗粒的细胞毒性;通过PMA诱导的人THP-1细胞实验,ox-LDL(氧化低密度脂蛋白)诱导后研究清脂通脉颗粒对脂质吞噬的影响;进行Westblot实验进行清脂通脉颗粒对蛋白影响的测定;通过NF-KB通路抑制剂JSH-23联合给予验证清脂通脉颗粒作用靶点。结果CCK-8法实验研究结果表明:不同浓度的清脂通脉颗粒对THP-1细胞活性均无影响;模型组细胞总胆固醇显著增加(P<0.001);清脂通脉颗粒不同浓度组细胞中总胆固醇含量有减少的趋势,且100、200μg/mL组内胆固醇含量更低,两组间无显著差异;清脂通脉颗粒可减少NF-κB信号通路中半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、半胱氨酸蛋白酶9(caspase 9,CASP-9)、核转录因子κB-p65蛋白(p65)含量表达(P<0.01),减少B细胞淋巴相关X蛋白(Bax)蛋白含量表达(P<0.05),增加B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白含量表达(P<0.01);清脂通脉颗粒作用于巨噬细胞,与NF-κB通路抑制剂JSH-23作用靶点相同。结论细胞水平验证清脂通脉颗粒对其活性无影响、无毒性、安全可靠;清脂通脉颗粒可吞噬脂质、减少巨噬细胞中胆固醇含量;清脂通脉颗粒可通过调控NF-κB通路内相关分子蛋白表达发挥抗AS(动脉粥样硬化)作用;清脂通脉颗粒与NF-κB通路抑制剂JSH-23作用相同。

基于肠道菌群及脂质代谢探讨清脂通脉颗粒对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠的影响

目的观察清脂通脉颗粒对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠肠道菌群及脂质代谢的影响,以期进一步从“肠道菌群-脂代谢”角度探讨清脂通脉颗粒防治动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)的作用机制。方法将C57BL/6J雄性小鼠设为空白对照组(ZC),将AopE-/-雄性小鼠随机分为模型对照组(MX)、依折麦布组(MB)、清脂通脉中剂量组(TM1)、清脂通脉高剂量组(TM2),每组8只。采用高脂饲料饲养制备As小鼠动物模型。MB组、TM1组、TM2组每日灌胃相应药物治疗,ZC组、MX组每日灌胃等体积生理盐水,连续12周,每周记录小鼠体质量和一般状态。实验结束后处死小鼠收集主动脉组织、结肠内容物及血用于后续分析。采用HE染色观察主动脉组织形态学变化。应用全自动生化分析仪检测小鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(totalCholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density liptein cholesterol,HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(low density liptein cholesterol,LDL)、丙氨酸转氨酶(aLanine amino transferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平。采用16S rDNA测序对肠道菌群进行分析。结果清脂通脉颗粒可明显改善ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠主动脉病理变化。与ZC组比较,MX组小鼠TG、TC、LDL、ALT、AST水平显著升高(P<0.01),HDL水平显著降低(P<0.01);与MX组比较,MB组、TM1组、TM2组小鼠TG、TC、LDL、ALT、AST水平显著降低(P<0.05或P<0.01),HDL水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。清脂通脉颗粒对于多种菌群丰度异常具有抑制作用。结论清脂通脉颗粒能够显著抑制ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠主动脉病理改变、脂质代谢紊乱、肠道菌群失调,具有积极防治作用。

基于网络药理学考察清脂通脉颗粒治疗动脉粥样硬化的可能机制

目的通过网络药理学考察清脂通脉颗粒治疗动脉粥样硬化的可能机制。方法通过TCMSP数据库搜集各类草药及其化合物成分信息,通过Genecard获取动脉粥样硬化靶标蛋白,所获得的基因交集使用STRING在线数据库构建PPI网络,通过DAVID在线数据库结合R语言进行富集分析。结果清脂通脉颗粒治疗动脉粥样硬化在分子功能方面可能是通过影响核受体、转录因子、类固醇激素受体、谷胱甘肽转移酶、氧化还原酶的活性发挥作用;在生物途径方面,类固醇结合、谷胱甘肽结合、雌激素受体及氧结合、氧化应激等产生了影响;信号通路富集发现清脂通脉课题可能通过多种通路发挥作用。结论通过网络药理学可以对清脂通脉颗粒进行作用机制全面预测,清脂通脉颗粒可能通过多靶点发挥治疗动脉粥样硬化的作用。

基于肝脏代谢组学研究清脂通脉颗粒对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化的影响

目的观察清脂通脉颗粒对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏代谢组学及炎症因子的影响,以期进一步从肝脾同调角度探讨清脂通脉颗粒防治动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用机制。方法将C57BL/6J雄性小鼠设为空白对照组(ZC),将AopE^(-/-)雄性小鼠随机分为模型对照组(MX)、依折麦布组(MB)、清脂通脉中剂量组(TM1)、清脂通脉高剂量组(TM2),每组8只。采用高脂饲料饲养制备AS动物模型。MB组、TM1组、TM2组每日灌胃相应药物治疗,ZC组、MX组每日灌胃等体积生理盐水,连续12周,每周记录小鼠体质量和一般状态。试验结束后处死小鼠收集主动脉组织、肝脏组织及血用于后续分析。采用HE染色观察主动脉与肝脏组织形态学变化。应用酶联免疫吸附技术检测小鼠血清脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-18(interleukin-18,IL-18)表达水平。采用UPLC-Q-ExactiveMS技术对肝脏差异代谢物进行分析。结果清脂通脉颗粒可明显改善ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠主动脉、肝脏组织病理变化。与ZC组比较,MX组小鼠LPS、IL-1β、IL-18水平显著升高(P<0.01);与MX组比较,MB组、TM1组、TM2组小鼠LPS、IL-1β、IL-18水平显著降低(P<0.01)。ZC组、MX组以及TM2组的代谢物能够显著区分,发现并初步鉴定与AS相关的胱氨酸、胆酸、柠檬酸三乙酯等潜在生物标志物,代谢通路分析包括烟酸和烟酰胺代谢、牛磺酸和亚牛磺酸代谢、淀粉和蔗糖代谢等多种代谢途径。结论清脂通脉颗粒能够调控ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏代谢,降低肝脏脂滴积累及炎性反应,抑制AS疾病发生发展,具有积极防治作用。