琼玉膏抑制肝癌细胞HBxAg表达及对原发性肝癌的防治作用

目的:观察琼玉膏对人肝癌细胞移植裸鼠HBxAg表达的影响,分析其通过影响HBxAg表达防治原发性肝癌的机制。方法:建立人肝癌细胞移植裸鼠模型,观察琼玉膏预防及治疗对小鼠体质量、癌组织质量的影响,同时采用免疫组化法测定癌组织及肝脏中HBxAg的表达。结果:与模型组相比,琼玉膏预防及治疗后,裸鼠的体质量增长迅速,癌组织质量偏低,癌组织及肝脏HBxAg低表达。琼玉膏预防与环磷酰胺治疗的效果相近。结论:琼玉膏能减缓肿瘤的生长,并抑制HBxAg的表达,后者可能是其防治原发性肝癌的主要机制之一。

琼玉膏酸奶对实验性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究

目的探讨琼玉膏酸奶对D-半乳糖(D-gal)衰老模型小鼠的抗氧化作用。方法 SD小鼠分为空白组、模型组、普通酸奶组、琼玉膏酸奶组及琼玉膏组。采用D-gal建立小鼠衰老模型,各组分别灌胃30 d,观察小鼠体质量,心、脾、肝、脑指数的改变;分光光度法检测小鼠肝、心组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)的含量变化;采用HE染色法观察肝组织和脑组织的形态结构变化,采用尼氏染色法观察海马组织的病理形态学变化。结果与衰老模型组相比,琼玉膏酸奶组小鼠的一般情况改善;体质量,心、脾、肝、脑指数,肝、心组织中的SOD、CAT和GSH-Px活性均显著提高(P<0.01);MDA含量显著降低(P<0.01);肝组织、大脑皮质和海马的细胞形态结构有所改善。与普通酸奶组、琼玉膏组相比,琼玉膏酸奶组小鼠肝、心组织中的SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量有显著差异(P<0.01或P<0.05)。结论琼玉膏酸奶可通过提高机体抗氧化酶的活性,减少自由基的生成,达到延缓衰老的作用。

琼玉膏对胰腺癌小鼠化疗增效减毒作用研究

目的:观察琼玉膏对胰腺癌小鼠吉西他滨化疗的增效减毒作用并探讨其可能机制。方法:50只C57BL/6小鼠随机均分为5组:正常组、模型组、吉西他滨治疗组、琼玉膏治疗组和联合治疗(吉西他滨+琼玉膏)组,模型组和治疗组均采用胰腺癌Panc02细胞株皮下接种建立胰腺癌小鼠移植瘤模型,分别给予生理盐水、吉西他滨、琼玉膏以及吉西他滨联合琼玉膏治疗。观察各组小鼠瘤体体积、血常规和肿瘤标志物的变化,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中T细胞亚群Th1/Th2和Th17/Treg的表达。结果:Panc02细胞皮下接种可成功建立胰腺癌小鼠移植瘤模型。与模型组比较,琼玉膏、吉西他滨及联合治疗均可减缓瘤体增长(P<0.05),降低糖链抗原19-9(CA19-9)和癌胚抗原(CEA)浓度(P<0.05)。琼玉膏还可降低Th1/Th2和Th17/Treg比例(P<0.05),并增加吉西他滨化疗小鼠白细胞(WBC)、红细胞(RBC)和血小板(PLT)计数及血红蛋白(HGB)含量。结论:琼玉膏可能通过调节T细胞亚群平衡对胰腺癌起到一定的治疗作用,并对吉西他滨化疗产生一定的增效减毒作用。

琼玉膏对化疗实验肺癌小鼠nm23及PCNA基因蛋白表达的影响

目的 :了解琼玉膏对化疗实验肺癌小鼠转移抑制基因 (nm2 3)基因蛋白表达及增殖细胞核抗原 (PCNA)的影响。方法 :使用细胞培养、接种造模及免疫组化等方法。结果 :琼玉膏可增加化疗实验肺癌小鼠癌组织nm2 3基因蛋白表达及降低癌组织PCNA的表达。结论 :琼玉膏可能通过抑制癌细胞增殖及肿瘤转移等机制 。

琼玉膏对实验肺癌小鼠化疗导致骨髓抑制的影响

目的 :观察琼玉膏对实验性肺癌小鼠化疗导致的骨髓抑制的影响。方法 :使用癌细胞接种的方法制造肺癌模型 ,分别观测空白对照组 (生理盐水 )、化疗组 (顺氨氯铂 )及联合组 (顺氨氯铂加琼玉膏 )小鼠的血常规及骨髓有核细胞计数变化。结果 :联合组及对照组的外周血红细胞、白细胞及血小板皆明显高于化疗组 (P<0 .0 1)。化疗组骨髓有核细胞数明显低于联合组与对照组 (P<0 .0 1)。而联合组与对照组相比 ,对照组又高于联合组 (P <0 .0 5 )。结论

七味育肝颗粒对肝纤维化大鼠的防治作用

目的:探讨七味育肝颗粒对肝纤维化大鼠的防治作用及对基质金属蛋白酶-13(MMP-13)/基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)失衡的影响。方法:取大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组(1.0×10-4 g/kg)、七味育肝颗粒各干预组(3.7、7.4、14.8 g/kg)组(n=8),采用皮下注射四氯化碳、灌胃乙醇6周来复制肝纤维化动物模型,造模的同时给药组每天灌胃给药,观测七味育肝颗粒对大鼠肝功能、肝组织病理学及肝纤维化相关指标的影响,采用免疫组化法测定肝组织MMP-13、TIMP-1的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)以及肝组织透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、TIMP-1显著升高,而MMP-13显著下降,缓解肝组织纤维化病理变化(P<0.01);与模型对照组比较,3.7、7.4、14.8 g/kg七味育肝颗粒能明显降低ALT、AST以及HA、PCⅢ、C-Ⅳ,缓解肝组织纤维化病理变化,改善肝功能,提高MMP-13活性而降低TIMP-1活性,缓解MMP-13/TIMP-1的失衡状态(P<0.05,P<0.01),其中七味育肝颗粒对TIMP-1及MMP-13/TIMP-1的影响有一定的量效关系趋势(P<0.01)。结论:七味育肝颗粒具有防治肝纤维化的作用,而改善MMP-13/TIMP-1平衡状态可能是七味育肝颗粒防治肝纤维化作用的机制之一。

琼玉膏加强顺氨氯铂对肺腺癌细胞株GLC-82的体外抑制作用

目的:观察琼玉膏对顺氨氯铂抑制肺腺癌细胞株GLC-82增殖的影响。方法:使用血清药理学分别观察空白对照组(生理盐水)、化疗组(顺氨氯铂)及联合组(顺氨氯铂加琼玉膏)细胞形态学的变化;使用活细胞计数方法记录各组癌细胞6日的生长情况并绘制其生长曲线;使用流式细胞等方法分析各组癌细胞株GLC-82的凋亡情况。结果:对照组癌细胞生长良好,化疗组癌细胞数基本不增长,联合组活癌细胞数则下降。流式细胞仪的分析结果表明,琼玉膏可明显加强化疗药物顺氨氯铂(DDP)诱发癌细胞的凋亡。结论:琼玉膏有加强化疗抑制癌细胞分裂及诱发癌细胞凋亡的作用。

清胰颗粒对重症急性胰腺炎大鼠肾脏AQP4蛋白表达及肾功能的影响

目的 探讨清胰颗粒(QYG)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏中水通道蛋白4(AQP4)的表达及肾功能的影响。方法 64只SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、SAP组、QYG组和地塞米松(DXMS)组;用5%STC逆行胰胆管注射诱导大鼠SAP肾损伤模型;观察肾脏病理变化,比较各组大鼠肾干湿质量比、肾脏系数、血清淀粉酶(AMS)、BUN、Scr、IL-6、TNF-α水平和肾脏中AQP4蛋白表达量。结果 SAP组大鼠肾脏病理评分、血清AMS、BUN、Scr、IL-6、TNF-α水平均较SO组明显升高(P均<0.05),QYG和DXMS治疗能降低SAP大鼠血清BUN、Scr、IL-6和TNF-α表达,肾脏病理损伤减轻,72 h疗效显著,呈时效依赖性。SAP大鼠肾脏中AQP4蛋白表达均较SO组明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);QYG和DXMS治疗下调AQP4蛋白表达,治疗72 h后与SAP组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AQP4参与SAP并发肾损伤过程,QYG抑制炎症反应下调AQP4表达对肾脏具有保护作用。

琼玉膏延缓衰老作用的候选靶蛋白分析

采用iTRAQ技术研究琼玉膏干预衰老大鼠模型的下丘脑蛋白,寻找候选靶蛋白,探索琼玉膏延缓衰老的作用机制。结果表明,琼玉膏可以提高大鼠血清GSH-Px及肝脏SOD活力。iTRAQ技术鉴定到的总蛋白为3 522个,FDR<1%。通过数据分析,鉴定出琼玉膏组与模型组比较,具有295种差异蛋白;模型组与空白组比较,具有20种差异蛋白;其中与空白组相比,模型组中下调而琼玉膏组中上调的蛋白有14种。在琼玉膏组和模型组的295种差异蛋白中,差异倍数≥1.30的差异蛋白有40种,最高为1.47。查阅文献及基因功能检索,筛选出琼玉膏延缓衰老的候选靶蛋白12种:ST18,Ptprc,PSMB8,INPP4B,Shc3,Pik3r1,PIP5K1C,Nampt,Rasgrp2,Asah2,Pdpk1,Map2k7。Western blot法检测下丘脑炎症通路NF-κB蛋白,模型组(0.96)相对空白组(0.85)表达量升高;而琼玉膏组(0.89)相对模型组则下降。Q-PCR检测PIP5K1C,Ptprc等与炎症相关的候选靶蛋白,与空白组相比,模型组中mRNA相对表达量显著下降(P<0.01),而琼玉膏组中则显著升高(P<0.01),与蛋白质组学数据分析一致。琼玉膏可能通过调节下丘脑炎性反应而延缓衰老的发生。

琼玉膏对衰老大鼠作用的差异蛋白分析

目的研究琼玉膏对衰老大鼠产生调节作用的相关蛋白质,在分子水平上探索琼玉膏的作用机制。方法将42只6月龄SD雄性大鼠随机平均分为3组,分别标记为琼玉膏组、空白组和模型组。给药结束后,取三组大鼠下丘脑全蛋白,运用同位素相对标记与绝对定量(i TRAQ)技术,分离、分析、鉴定大鼠下丘脑差异蛋白质。结果成功建立衰老大鼠模型,分析比较三组大鼠下丘脑蛋白质,发现14种显著差异蛋白质。结论 14种显著差异蛋白分别为,细胞色素C氧化酶多肽VIc-2、中性神经酰胺酶、植烷酸-辅酶A羟化酶相互作用类蛋白、尼克酰胺磷酸核糖转移酶、尾锚定蛋白插入受体WRB、O-甘露糖β-1,4-N-乙酰葡糖胺基转移酶、信号转导子和转录激活子5b、脂酰Co A合成酶、特定微管伴侣蛋白E、3-磷酸肌醇依赖的蛋白激酶1、双特异性作用蛋白激酶7、RAS脒基释放蛋白2、SHC转运蛋白和泛酸酯激酶4,琼玉膏对这些蛋白均起到下调的作用,该研究为琼玉膏延缓衰老作用的靶蛋白研究奠定基础。

琼玉膏抗衰老与下丘脑nf-kb炎症通路及GnRH1关系的相关性研究

目的探索琼玉膏抗衰老以及下丘脑nf-kb炎症通路的激活与GnRH1基因甲基化相关性的可能分子机制。方法(1)观察比较6只24月龄自然衰老SD大鼠和6只2月龄青年SD大鼠下丘脑衰老相关蛋白及其基因mRNA的表达水平:Western Blot检测GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3a的蛋白表达水平;Real-Time PCR检测GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3a基因mRNA的表达水平;使用SPSS19.0统计软件做统计学分析。MSP法检测老年鼠和青年鼠GnRH1基因甲基化情况。(2)通过分离新生SD大鼠下丘脑神经元干细胞,建立D-半乳糖诱导的下丘脑神经元干细胞衰老模型,比较正常神经元干细胞组、D-半乳糖衰老组以及不同浓度琼玉膏干预组之间炎性因子及NF-κB表达的差异。结果 (1)GnRH1、Sirt1、DNMT1的蛋白及其基因mRNA表达水平在老年鼠中明显降低,与青年鼠比较有显著性差异(P<0.05);DNMT3a的蛋白及基因mRNA表达水平在老年鼠中无明显变化,与青年鼠比较无显著性差异(P>0.05);老年鼠中GnRH1基因出现部分甲基化,青年鼠中GnRH1基因未发生甲基化。(2)D-半乳糖诱导建立的神经元干细胞衰老模型呈现炎性指标高表达以及NF-κB信号通路激活;琼玉膏可抑制炎性因子、nuclear P65的表达水平以及NF-κB的转录活性;并且,随着琼玉膏浓度从45μg/ml增加到90μg/ml,其提前干预D-半乳糖诱导的神经元干细胞衰老的作用也相应增强。结论琼玉膏抗衰老的可能分子机制在于降低下丘脑神经元干细胞炎性因子表达和NF-κB转录活性,进而能够逆转衰老进程中GnRH1基因甲基化及其表达水平下降。